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公开(公告)号：CN103173466A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201210210421.8
申请日：2012-06-20
Applicant: 江南大学
Abstract: L-精氨酸是人体和动物体内的半必需碱性氨基酸，具有多种独特的生理和药理作用。本发明主要针对精氨酸合成的竞争旁路代谢关键酶基因进行敲除。以钝齿棒杆菌基因组为模板，分别以proB基因上下游引物进行PCR扩增，利用重叠PCR扩增获得缺失型基因proB’。连接重组质粒pK18mobsacB-proB’电击转化进入钝齿棒杆菌，筛选二次同源重组基因缺失型菌株。将上述重组菌钝齿棒杆菌ΔproB进行摇瓶发酵实验，钝齿棒杆菌中proB基因的功能缺失，使得脯氨酸合成的能力大大降低，同时提高了糖耗，发酵液中脯氨酸的积累量只有对照菌株的2.7％，从而使目标氨基酸L-精氨酸产量提高。
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公开(公告)号：CN102864163A
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN201210360554.3
申请日：2012-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种高效表达枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的方法，属于酶基因工程和酶工程领域。本发明通过PCR技术以B.subtilis 6-7总DNA为模板，扩增获得L-天冬酰胺酶编码基因ansZ，将其连接到表达载体pMA5上，以B.subtilis168为表达宿主，构建L-天冬酰胺酶基因工程菌pMA5-ansZ/B.subtilis168，实现L-天冬酰胺酶的高效表达，该工程菌的酶活为22.4U/mL，较出发菌株提高574倍。
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公开(公告)号：CN102021154B
公开(公告)日：2012-09-19
申请号：CN201010166997.X
申请日：2010-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: L-精氨酸是人体内所需半必需碱性氨基酸之一，具有多种独特的生理和药理作用。高产精氨酸突变菌株C.crenatum SYPA5-5以循环途径合成精氨酸，乙酰谷氨酸激酶(NAGK)是其合成途径中关键酶，受到产物精氨酸的反馈抑制。利用重叠PCR技术用编码天冬氨酸的GAT密码子取代了编码NAGK蛋白中287位的甘氨酸的GGA密码子，突变后获得高活性且受精氨酸的反馈抑制作用明显降低的NAGK。将argBSD基因通过pJCl-tac引入高产精氨酸的钝齿棒杆菌中，进一步提高关键酶的表达量。最终产酸水平由原来的28g/L提高至36.3g/L，L-精氨酸产量提高了29.7％。
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公开(公告)号：CN101130781A
公开(公告)日：2008-02-27
申请号：CN200710024145.5
申请日：2007-07-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 根癌农杆菌介导zeocin抗性基因转化工业化产甘油假丝酵母，将外源基因整合到宿主染色体上，属于基因工程中转化技术领域。本发明通过构建质粒pCAM3300－zeocin，将其电击转化根癌农杆菌。通过将含有目的质粒pCAM3300－zeocin的根癌农杆菌和产甘油假丝酵母共培养，利用zeocin抗性基因为筛选标记，实现了pCAM3300－zeocin对产甘油假丝酵母的转化。根据根癌农杆菌的生长特性，对转化条件进行了优化，在共培养时间为24h，细胞比例为1∶500－1000时最高转化率达到2个转化子/104个酵母细胞。初步建立了根癌农杆菌介导转化工业化产甘油假丝酵母的转化方法，为进一步研究产甘油假丝酵母打下基础。
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公开(公告)号：CN114958693B
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202210770685.2
申请日：2022-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一株枯草芽孢杆菌、一种重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于微生物发酵技术领域。本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)RF1‑6是以核黄素高产菌株RF1作为出发菌株，经过基因改造和诱变，筛选得到的核黄素产量最高的突变株，保藏编号为CCTCCNO：M2022565。与核黄素高产菌株RF1相比，核黄素产量能够提高22.8％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119736189A
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202411780423.X
申请日：2024-12-05
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/20 , C12N1/21 , C07K14/195 , C12N15/31 , C12N15/74 , C02F3/34 , C12R1/01 , C02F101/32
Abstract: 本发明公开了一种提高氧化葡萄糖酸杆菌抗苯乙烯胁迫能力的方法，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明首先通过在培养基中梯度添加苯乙烯，进行野生型氧化葡萄糖酸杆菌对苯乙烯的适应性进化，最终获得的进化菌株ST显著提高了氧化葡萄糖酸杆菌对苯乙烯的耐受性。其次，在氧化葡萄糖酸杆菌中敲除鞭毛蛋白FlgE也提高了氧化葡萄糖酸杆菌对苯乙烯的胁迫能力；将利用本发明的方法制备得到的基因缺失氧化葡萄糖酸杆菌ST‑ΔflgE在15g/L苯乙烯下培养10h后的生长性能远远强于野生型氧化葡萄糖酸杆菌。
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公开(公告)号：CN118599746A
公开(公告)日：2024-09-06
申请号：CN202410693207.5
申请日：2024-05-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种多酶级联转化L‑酪氨酸生产酪醇和红景天苷的方法，属于生物工程技术领域。本发明首先将野生糖基转移酶的第158位苏氨酸突变为丙氨酸，并将第311位酪氨酸突变为丙氨酸，得到氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的糖基转移酶。然后构建了以大肠杆菌为宿主的共表达工程菌，通过双质粒表达系统表达糖基转移酶、酪氨酸脱羧酶和酪胺氧化酶，实现了以L‑酪氨酸为底物进行酪醇和红景天苷的高效生产。本发明的生产方法通过模块化组装和基因重复表达实现各酶的平衡表达，避免副产物的积累，实现了以L‑酪氨酸为底物高效合成酪醇和红景天苷，为酪醇和红景天苷的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN118291315A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410317954.9
申请日：2024-03-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高氧化葡萄糖酸杆菌抗有机溶剂胁迫的方法，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明通过在培养基中梯度添加有机溶剂环氧苯乙烷，对野生型氧化葡萄糖酸杆菌621H进行适应性进化。进化菌株显著提高了对有机溶剂的耐受性。在氧化葡萄糖酸杆菌中过量表达LysR家族转录调控因子GOX_RS04700显著提高了氧化葡萄糖酸杆菌的抗有机溶剂胁迫能力；将利用本发明的方法制备得到的重组氧化葡萄糖酸杆菌在10g/L环氧苯乙烷环境下培养10h后的生长性远远强于野生型氧化葡萄糖酸杆菌。
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公开(公告)号：CN114891710B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210604061.3
申请日：2022-05-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过重构辅酶再生系统强化重组大肠杆菌催化合成胆绿素的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过从Clostridium tetani中获得血红素加氧酶，以E.coliBL21(DE3)作为底盘细胞，pETDuet为表达载体构建重组大肠杆菌，实现该酶的表达。强化大肠杆菌中谷氨酸脱氢酶的表达，引入辅酶NADPH再生系统，成功构建重组菌株E.coliBL21/pETDuet‑gdhAEc‑hoCt，实现E.coli来源的GdhA和C.tetani来源的HO共表达。该重组菌在无需额外添加辅酶NADPH条件下，即可进行全细胞催化血红素合成胆绿素，转化率高达71.5％，为胆绿素的高效生产提供了新途径。
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公开(公告)号：CN117448246A
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202311382576.4
申请日：2023-10-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种合成非天然α‑氨基酸的氧化葡萄糖酸杆菌及其应用，属于基因工程和全细胞催化领域。本发明通过在氧化葡萄糖酸杆菌中异源表达鞘氨醇单胞菌来源的环氧化物水解酶、短乳杆菌来源的扁桃酸脱氢酶和蜡样芽孢杆菌来源的亮氨酸脱氢酶，同时利用氧化葡萄糖酸杆菌自身膜结合的醇、醛脱氢酶，以1,2‑二醇类和环氧化物为底物一步法多酶级联催化合成对应的非天然α‑氨基酸，此外本发明的合成系统不需要额外添加辅酶，内部可实现辅酶自循环。本发明合成的脂肪族非天然α‑氨基酸如：L‑α‑氨基丁酸、L‑正缬氨酸、L‑正亮氨酸和L‑高烯丙基甘氨酸是首次以1,2‑二醇类和环氧化物为底物生物法合成的报道。
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