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公开(公告)号：CN115786219A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202210973252.7
申请日：2022-08-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产四氢嘧啶的重组谷氨酸棒杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过过表达反馈抑制解除的天冬氨酸激酶LycS301Y和天冬氨酸半醛脱氢酶Asd，可增加前体天冬氨酸半醛的供应。本发明通过在二氢吡啶二羧酸合成酶基因dapA启动子区域插入阻遏蛋白BetI结合序列，同时过表达阻遏蛋白BetI，可大大降低发酵液中副产物L‑赖氨酸的含量。本发明通过在柠檬酸合酶基因gltA启动子区域插入阻遏蛋白LmrA结合序列，同时过表达阻遏蛋白LmrA，解决了菌体生长和发酵产酸之间的不平衡，可增加前体草酰乙酸和乙酰CoA供应，使四氢嘧啶的产量得到大幅提高，产量高达45.5g/L，产率高达0.25g/g葡萄糖。
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公开(公告)号：CN112725255B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN202110165094.8
申请日：2021-02-06
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N9/96 , C12N15/61 , C12N11/14 , C12N11/10 , C12N11/04 , C12P19/24 , C12P19/02 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶重组菌株的构建及全细胞固定化方法，属于生物技术领域。本发明通过在DSDPEase基因N端融合SAPs，筛选出热稳定性提高的SAPs‑DSDPEase重组菌株。为提高重复利用性，本发明通过添加适当比例的二氧化钛与海藻酸钠形成混合固定化载体，制备固定化细胞。重组菌株B.subtilis168/pMA5‑SAP1‑DSDPEase40℃孵育48h后残余酶活为58％。按照优化后的条件制备的固定化细胞连续操作10次，固定化小球机械强度依然维持在80％，残余酶活回收率保留58％。利用固定化细胞合成D‑阿洛酮糖，催化反应80min，D‑阿洛酮糖产量可达153.3g/L，转化率为30.4％。
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公开(公告)号：CN112812983B
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202110176165.4
申请日：2021-02-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产菜油甾醇的酿酒酵母工程菌及构建方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明通过将7‑脱氢胆固醇还原酶的表达盒元件导入到酵母细胞体内，利用CRISPR/Cas9基因操作系统整合至酵母基因组中，还敲除了C‑22甾醇去饱和酶，解除麦角固醇分支途径的竞争，实现了从葡萄糖到菜油甾醇的酵母合成。本发明的方法工艺简单，绿色环保，可用于发酵生产菜油甾醇。采用本发明提供酿酒酵母工程菌株BY4742‑Δerg5‑TEF1p‑dhcr7‑ADH1t制备得到的菜油甾醇的产量，在摇瓶阶段可达253.35mg/L，发酵罐水平产量可达916.88mg/L，比菌株在摇瓶阶段菜油甾醇的产量提升了2.6倍。
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公开(公告)号：CN115011620A
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202210552528.4
申请日：2022-05-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种大肠杆菌重组核酸、重组大肠杆菌及培养方法和生物合成L‑苏氨酸的方法，涉及生物工程技术领域。本发明所述大肠杆菌重组核酸，利用磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因对大肠杆菌进行改造，获得一株以葡萄糖为底物的重组大肠杆菌LMT4，利用所述LMT4进行发酵生产，L‑苏氨酸产量以及转化率明显提高，为L‑苏氨酸的工业化生产奠定基础。
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公开(公告)号：CN111676182B
公开(公告)日：2022-05-24
申请号：CN202010633020.8
申请日：2020-07-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组钝齿棒杆菌发酵生产精酮合剂的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过将谷氨酸氧化酶GOX和过氧化氢酶CAT分别于pDXW‑10和pXMJ‑19载体上进行了成功表达，随后将两种质粒一起转入钝齿棒杆菌中，通过对重组钝齿棒杆菌于5L罐上进行发酵，获得了含有L‑精氨酸和α‑酮戊二酸的发酵液。在对发酵液进行预处理后，最终按照1:1比例从发酵液中结晶获得精酮合剂。本发明方法简单、高效，节省了生产精酮合剂过程中α‑酮戊二酸的用量，在精酮合剂的生产中具有较高的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112111506B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202011006379.9
申请日：2020-09-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种RBS优化提高γ‑谷氨酰胺转肽酶表达量的方法，属于基因工程领域。起始的翻译速率对于外源蛋白的表达影响很大，通过对RBS序列进行改造，优化RBS，可以进一步提高翻译速率从而很大程度上提高目的蛋白表达量，本发明对表达载体pMA5的RBS序列进行改造，提高了酶的翻译效率，从而提高了酶活，采用本发明提供的载体pMA5‑RBS361和pMA5‑RBS362构建的重组枯草芽孢杆菌中，使目的基因γ‑谷氨酰胺转肽酶的酶活得到了提高；其表达量较原始pMA5‑ggt/B.subtilis 168分别提高了1.51倍和1.62倍。
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公开(公告)号：CN112941059B
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202110203167.8
申请日：2021-02-23
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/82 , C12N15/55 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N1/21 , A23L5/20 , A23L19/18 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其在枯草芽孢杆菌中的表达，属于酶工程和微生物工程技术领域。采用本发明公开的米黑根毛霉来源的L‑天冬酰胺酶突变体A344E在45℃、pH7.0的条件下酶活为786.8U/mg，为野生酶509.1U/mg的1.5倍；并且本发明的L‑天冬酰胺酶突变体可以实现在枯草芽孢杆菌中高效表达，采用本发明提供的方法，可以得到是一种表达的L‑天冬酰胺酶突变体酶活为原始菌株7.1倍的重组枯草芽孢杆菌，拓宽其在食品领域的应用范围，使L‑天冬酰胺酶能大规模应用于生产中。
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公开(公告)号：CN112080503B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202011006160.9
申请日：2020-09-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种优化启动子提高γ‑谷氨酰胺转肽酶表达量的方法，属于基因工程领域。本发明实现了B.pumilus ML413来源的γ‑谷氨酰转肽酶基因在枯草芽孢杆菌168中的高效表达，采用本发明所提供的优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的启动子，构建的基因工程菌对γ‑谷氨酰转肽酶的表达量，较采用未优化的启动子构建的基因工程菌对γ‑谷氨酰转肽酶的表达量，分别提高了30％、63％。
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公开(公告)号：CN111718948B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202010736326.6
申请日：2020-07-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一段基因及其在生产计曼尼醇中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种可高产计曼尼醇的酿酒酵母工程菌BY4742/GAL1p‑GES‑ADH1t，此酿酒酵母工程菌是通过将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的编码计曼尼醇合酶的基因整合至酿酒酵母BY4742的基因组中得到的；将此酿酒酵母工程菌接种至发酵培养基中发酵48h，即可使发酵液中计曼尼醇的产量高达45.31mg/L。
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公开(公告)号：CN111172090B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202010095689.6
申请日：2020-02-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用离子转运蛋白促进钝齿棒杆菌合成L‑精氨酸的方法，具体公开了一种通过过表达单价阳离子/H+逆转运蛋白Mrp1A以及阳离子转运ATP酶CTAP1提高L‑精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对基因mrp1和ctap1的敲除和过表达，通过对胞内[Na+]和[K+]的测定，明确离子转运蛋白在离子浓度、pH稳态和渗透压方面的调节作用。采用5L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌5‑5(mrp1ctap1)发酵至96h，重组菌的L‑精氨酸产量达到65.3g/L，产率为0.395g/g，比钝齿棒杆菌SYPA5‑5提高了39.1％。
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