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公开(公告)号：CN106645718A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201710144784.9
申请日：2017-03-11
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/558
CPC分类号： G01N33/56911 , G01N33/558 , G01N2333/28
摘要： 本发明提供一种病原性副溶血弧菌检测试纸，其中硝酸纤维素膜上从靠近金标垫一侧开始设有依次排列的四条检测线T1、T2、T3、T4和一条质控线C，其中四条检测线T1、T2、T3、T4分别是副溶血弧菌的外膜蛋白、鞭毛蛋白、胞外产物和全菌破碎蛋白；靠近吸水垫的质控线C为羊抗兔IgG。本发明提取病原菌多种抗原蛋白特异地排列组合起来，在试纸上与待检测样品同时进行反应，并在检测线T4上特别设置了全菌破碎蛋白，解决了其他菌的共同抗原导致的免疫交叉反应干扰结果判定的问题，可以准确地区分阳性结果和交叉反应。
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公开(公告)号：CN101671392B
公开(公告)日：2012-06-06
申请号：CN200910017390.2
申请日：2009-08-03
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C07K16/18 , C12N15/06 , C12P21/08 , G01N33/577
摘要： 本发明公开了一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体，其是由名称为小鼠杂交瘤细胞CS-H，保藏号为CCTCC-C200937的杂交瘤细胞分泌的。该抗体的制备方法如下：通过抽取中国对虾血淋巴经离心分离血清，经超速离心获得中国对虾血蓝蛋白粗提物，利用对虾白斑症病毒(WSSV)亲和层析纯化中国对虾血蓝蛋白，经电泳分析和多肽质谱分析确认后，以亲和纯化的血蓝蛋白作为抗原免疫Balb/c小白鼠，采用细胞融合制备杂交瘤细胞，经过免疫学检测方法筛选出该单抗。本发明将作为检测对虾在各种生理状态下血蓝蛋白含量变化提供重要工具，同时为研究血蓝蛋白在中国对虾非特异免疫中的作用提供有力支持。
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公开(公告)号：CN101691403B
公开(公告)日：2011-11-09
申请号：CN200910017391.7
申请日：2009-08-03
申请人： 中国海洋大学
CPC分类号： C07K16/081 , C07K2317/76 , C12N2710/18022
摘要： 本发明公开了一种抗对虾白斑症病毒囊膜蛋白VP28独特型单克隆抗体及其制备方法，所述单抗是由保藏号为：CCTCC-C200938的杂交瘤细胞AMVP分泌的，该单抗是以抗WSSV-VP28单抗(Ab1)为抗原制备的，能与兔抗WSSV-VP28抗体结合；具有与WSSV竞争结合兔抗WSSV-VP28抗体的能力；且以该单抗为抗原制备的抗抗WSSV-VP28独特型抗体(Ab3)能与WSSV结合，其结合位点在WSSV的囊膜上，Ab3能中和WSSV感染，具有Ab1特性。本发明首次将该抗独特型抗体应用于WSSV研究中，并且建立了运用间接酶联免疫吸附法和竞争酶联免疫吸附法检测的筛选体系，还采用间接免疫荧光法、金标记免疫电镜法和螯虾体内中和实验证明了Ab3具有Ab1特性，从而验证了本发明单抗具有模拟最初抗原WSSV-VP28的特性。
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公开(公告)号：CN101691403A
公开(公告)日：2010-04-07
申请号：CN200910017391.7
申请日：2009-08-03
申请人： 中国海洋大学
CPC分类号： C07K16/081 , C07K2317/76 , C12N2710/18022
摘要： 本发明公开了一种抗对虾白斑症病毒囊膜蛋白VP28独特型单克隆抗体及其制备方法，所述单抗是由保藏号为：CCTCC-C200938的杂交瘤细胞AMVP分泌的，该单抗是以抗WSSV-VP28单抗(Ab1)为抗原制备的，能与兔抗WSSV-VP28抗体结合；具有与WSSV竞争结合兔抗WSSV-VP28抗体的能力；且以该单抗为抗原制备的抗抗WSSV-VP28独特型抗体(Ab3)能与WSSV结合，其结合位点在WSSV的囊膜上，Ab3能中和WSSV感染，具有Ab1特性。本发明首次将该抗独特型抗体应用于WSSV研究中，并且建立了运用间接酶联免疫吸附法和竞争酶联免疫吸附法检测的筛选体系，还采用间接免疫荧光法、金标记免疫电镜法和螯虾体内中和实验证明了Ab3具有Ab1特性，从而验证了本发明单抗具有模拟最初抗原WSSV-VP28的特性。
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公开(公告)号：CN101629955A
公开(公告)日：2010-01-20
申请号：CN200910017833.8
申请日：2009-08-07
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/577
CPC分类号： G01N33/56983
摘要： 本发明公开了一种鱼类淋巴囊肿病毒免疫检测芯片，其结构包括芯片载体、铺覆于芯片载体上的琼脂糖凝胶层、琼脂糖凝胶层上固定有多个抗体微阵列，各个微阵列之间用芯片专用围栏或Super PAP Pen划线隔开。本发明采用夹心法检测抗原，在芯片片基上固定病原的抗体，取待检个体病毒靶器官制备待检样品液，直接将待测样品液与固定有病原抗体的芯片孵育，再加荧光标记的特异性单抗探针，通过CCD扫描仪读取结果。其优点在于能同时检测多种样品或同一样品不同组织中淋巴囊肿病毒，用于海水养殖鱼类中LCDV的快速、灵敏、准确的检测，以及进出口鱼类中LCDV的检疫。
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公开(公告)号：CN101629954A
公开(公告)日：2010-01-20
申请号：CN200910017831.9
申请日：2009-08-07
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/552 , G01N33/532 , G01N21/64
摘要： 本发明公开了一种对虾白斑症病毒免疫检测芯片，其结构包括芯片载体、铺覆于芯片载体上的琼脂糖凝胶层、琼脂糖凝胶层上固定有多个4×4的抗体微阵列，各个微阵列之间用芯片专用围栏或Super PAP Pen划线隔开。本发明采用夹心法检测抗原，在芯片片基上固定病原的多克隆抗体(多抗)，取待检个体的靶器官组织制备待检样品液，直接将待测样品液与固定有多抗的芯片孵育，以捕获抗原使其结合在芯片上，再加上荧光标记的特异性单抗探针，通过CCD芯片扫描仪读取结果。其优点在于能同时检测多个样品中的白斑症病毒，用于养殖生产中虾类/蟹类白斑症病毒病的快速、准确检测，及进出口虾类/蟹类中WSSV的检疫。
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公开(公告)号：CN115785243B
公开(公告)日：2024-07-16
申请号：CN202211340998.0
申请日：2022-10-30
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明提供一种牙鲆M细胞标志分子GP2的特异性抗体及其应用，所提供的牙鲆GP2的特异性抗体可用于检测牙鲆GP2蛋白分子和GP2+M细胞，为进一步了解牙鲆M细胞在引发黏膜和系统免疫应答中的作用提供重要的工具。所提供的特异性抗体，是用氨基酸序列为YKDEAFEDRWTT的B细胞抗原表位作为抗原制备的。本发明筛选获得了牙鲆M细胞表面标志分子GP2基因的B细胞抗原表位，并使用该抗原表位作为抗原来免疫动物制备了牙鲆GP2特异性抗体，为检测牙鲆GP2蛋白分子及GP2+M细胞提供了重要工具。
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公开(公告)号：CN117925915A
公开(公告)日：2024-04-26
申请号：CN202410268353.3
申请日：2024-03-10
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12Q1/6806 , C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种基于RPA‑CRISPR‑Cas12a体系检测牙鲆弹状病毒的试剂盒及方法，属于鱼类病理分子诊断技术领域。所述试剂盒，包括crRNA、RPA引物、逆转录酶、Cas12a蛋白、ssDNA探针；所述crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述检测方法基于重组酶聚合酶扩增结合CRISPR‑Cas12a技术。本发明通过RPA扩增及Cas12a识别可双重特异的对牙鲆弹状病毒进行检测，特异性强，灵敏度可低至8.7拷贝/ul，远高于常规PCR，可以在感染潜伏期检测出牙鲆弹状病毒，从而对牙鲆弹状病毒病进行防治。本发明具有可视化，操作简单的优点，可直接通过肉眼观察试纸条显色结果来判定检测结果，特别适合于在水产现场推广应用。
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公开(公告)号：CN114292812B
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202111683722.8
申请日：2021-12-28
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12N5/0783
摘要： 本发明公开了一种流式细胞术分选牙鲆CD4+T淋巴细胞的方法，包括如下步骤：取牙鲆头肾组织，经Percoll密度梯度离心法，获得头肾淋巴细胞；在头肾淋巴细胞中加入抗牙鲆CD4‑1和CD4‑2分子的单克隆抗体和FITC标记的羊抗鼠IgG孵育；以磷酸盐缓冲液为流式细胞仪的鞘液，用胎牛血清润洗1.5mL无酶离心管，将其置于流式细胞仪分选仓中的流式收集管上；孵育抗体后的淋巴细胞经流式细胞仪分析，设置CD4+T淋巴细胞门进行细胞分选；荧光显微镜下观察分选细胞的纯度，并通过PI和台盼蓝染色测定细胞的活性。本发明通过使用适合于鱼类淋巴细胞的磷酸盐缓冲液和收集分选细胞的装置，创造性地建立了流式细胞术分离海水鱼类CD4+T淋巴细胞的方法，具有重要的科学意义和应用价值。
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公开(公告)号：CN117487002A
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202311445515.8
申请日：2023-11-02
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明提供一种高效分离鱼类血清中多种免疫球蛋白的方法。本发明的方法能够高效分离鱼类免疫球蛋白。本发明提供的方法能够精准的根据鱼类血清中免疫球蛋白的分子量差异先将血清中蛋白质从大到小收集，而后再根据抗体特有的轻链κ链纯化不同分子量大小的混合液中的免疫球蛋白。所提供的方法可以准确的分离出血清中的IgM和IgT，并且纯化出的蛋白纯度极高，可以用于后续一系列免疫学实验。
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