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公开(公告)号：CN116376796A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310335902.X
申请日：2023-03-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产绿原酸的重组大肠杆菌及应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明在大肠杆菌中表达来源于约氏黄杆菌的酪氨酸解氨酶FjTAL，大肠杆菌内源的hpaBC，3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖酸‑7‑磷酸合成酶突变体aroGfbr，运动发酵单胞菌来源的分支酸变位酶tyrC，大肠杆菌来源的奎宁酸/莽草酸‑5‑脱氢酶ydiB，烟草来源的羟基肉桂酰辅酶A奎宁酸转移酶NtHQT和拟南芥来源的4‑香豆酸:辅酶A连接酶At4CL1，实现了绿原酸的合成。然后过表达大肠杆菌来源的aroB、gldA,并敲除内源基因menI，进一步提高绿原酸产量。本发明构建的重组菌发酵生产绿原酸的产量在摇瓶水平可达638.2mg/L，在5L发酵罐上达到2.8g/L，为工业化生产绿原酸提供了一种新的方法。
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公开(公告)号：CN116376733A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310303990.5
申请日：2023-03-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高毕赤酵母工程菌生产大豆血红蛋白的发酵方法，属于生物工程技术领域。本发明实现了发酵罐水平生产大豆血红蛋白，解决了之前大豆血红蛋白发酵罐水平产量低的问题。通过优化培养基、溶氧条件、血红素和甲醇流加浓度增强菌体的生长和分泌合成大豆血红蛋白的能力，可实现发酵罐水平大豆血红蛋白在毕赤酵母中的高效表达。在发酵罐水平，所得大豆血红蛋白产量可达591mg/L，该结果为大豆血红蛋白在人造肉等食品加工领域的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112852857B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202110165340.X
申请日：2021-02-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种氧化葡萄糖酸杆菌中多基因敲除的方法，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明构建了基于sacB的氧化葡萄糖酸杆菌的基因编辑工具，将多种抗性的敲除质粒转化至同一氧化葡萄糖酸杆菌中，可实现多基因的敲除，并能够促进用以提高其性能的代谢工程修饰。将本发明的基因编辑工具应用于氧化葡萄糖酸杆菌山梨糖还原酶、酮还原酶和磷酸葡萄糖酸脱水酶的敲除验证，表明该方法有多基因敲除的作用，对于合成生物学的发展具有潜在的价值和意义。
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公开(公告)号：CN116286933A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202211158378.5
申请日：2022-09-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种智能调控细胞裂解的方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌为宿主，通过木糖诱导蛋白水解系统在不同时间水解自溶素LytC、LytD，发现在20h添加木糖具有最高的Pul表达水平，摇瓶产量达到181.4U/mL。透射电镜分析显示，抑制LytC和LytD会提高生物量，但增厚了细胞壁膜和降低了Pul的比生产速率。为避免诱导剂添加和自溶素抑制的副作用，基于“与”逻辑门开发了一种双信号输入的自诱导蛋白水解系统，以自主调控LytC和LytD降解时间。在此系统下，Pul的摇瓶表达水平最高可达到274.8U/mL是改造前的1.99倍，为构建适合蛋白表达的普鲁兰酶生产菌株提供了一种新的策略。
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公开(公告)号：CN114752554B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202210041678.9
申请日：2022-01-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N5/077
Abstract: 本发明公开了一种含有天然化合物的无血清成肌分化培养基及应用，属于动物细胞培养及细胞培养肉技术领域。本发明通过细胞分化状态的表观观察及肌肉特异性蛋白MyHC免疫荧光染色，并通过Image J等软件分析分化率及融合率，表征改良无血清培养基对肌源性细胞分化状态的影响。此外，通过免疫印迹和荧光定量PCR证明添加生长因子、植源性天然产物及其他辅助因子的无血清肌源性分化培养基可以使肌源性细胞的蛋白合成能力与在含2％马血清分化培养基下相当。大大降低细胞培养肉技术在分化过程中的成本，并且进一步保证产品的生物安全性，为细胞培养肉产业高效经济的生产优质肌肉蛋白提供技术支持。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115975963A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202310079752.0
申请日：2023-02-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了利用大肠杆菌P450酶全细胞催化合成羟基化黄酮化合物的方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过筛选出高产羟基化黄酮化合物的P450sca‑2mut、通过还原伴侣工程、酶工程以及全细胞催化条件优化，使sca‑2mutR88A/S96A催化柚皮素合成圣草酚的效率达到77％；催化二氢山奈酚合成二氢槲皮素的效率达到66％；催化芹菜素合成木犀草素的效率达到32％；催化大豆苷元合成7,3',4'‑三羟基异黄酮的效率达到75％，为提高羟基化化合物的生物合成提供了新的策略。
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公开(公告)号：CN115927138A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210950271.8
申请日：2022-08-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于表面展示羰基还原酶的全细胞催化合成2‑甲基苯甲酮的方法，属于基因和生物工程领域。本发明通过锚定蛋白将羰基还原酶展示在大肠杆菌表面，固定化的羰基还原酶能够通过简单的离心收集进行重复催化，同时规避了胞内复杂的其他酶催化反应，避免了复杂的纯化步骤，可以提高下游分离纯化的效率并节省成本。有利于工业化生产2‑甲级苯甲酮。
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公开(公告)号：CN113136349B
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202110607028.1
申请日：2021-05-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达不同来源肌红蛋白/血红蛋白毕赤酵母重组菌株的构建，属于基因工程技术领域。本发明首先实现了不同动植物来源的肌红蛋白/血红蛋白在毕赤酵母中的高效分泌表达，构建得到表达猪肌红蛋白、牛肌红蛋白、三叶草血红蛋白、大豆血红蛋白以及猪血红蛋白β单亚基的重组菌，在摇瓶条件下产量分别达到42.0mg/L、20.0mg/L、5.0mg/L、100.0mg/L与1.0mg/L；并进一步优化猪肌红蛋白在毕赤酵母中的分泌表达体系，最终构建得到的重组菌株X33‑△ku70‑△yps1‑1‑MB菌株48h摇瓶发酵产量达到69.0mg/L，较对照提高了59.4％。本发明有利于不同来源肌红蛋白/血红蛋白在人造肉等在食品加工领域的应用及进一步发展。
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公开(公告)号：CN113913314B
公开(公告)日：2023-02-24
申请号：CN202111428903.6
申请日：2021-11-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种降低黄酒中尿素和氨基甲酸乙酯积累的菌株及其应用，属于酿酒及食品安全领域。本发明提供了一株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)G2，已于2021年11月02日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211359；该酿酒酵母可降解尿素，和同时可产氨基甲酸乙酯水解酶的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)d6，同时添加到黄酒发酵中，在经过前酵和后酵阶段，最终检测发酵结束后的黄酒中的尿素和氨基甲酸乙酯含量均比对照组有明显的降低，降低量分别为70.06和68.73％。
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公开(公告)号：CN113862290B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202111098860.X
申请日：2021-09-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/54 , C12N15/81 , C12N15/70 , C12N9/10 , C12N1/19 , C12N1/21 , C12P17/06 , A61K31/352 , A61P3/10 , A61P3/04 , A23L33/105 , A23L29/00
Abstract: 本发明公开了一种来源于甘草的异黄酮4′‑O‑甲基转移酶及其应用，属于基因和代谢工程领域。本发明提供了SEQ ID NO.3所示的异黄酮4′‑O‑甲基转移酶的新用途，可用于催化柚皮素合成异樱花素。本发明将该酶在酿酒酵母中表达，构建获得了可利用柚皮素合成异樱花素的菌株，实现了微生物法合成异樱花素。本发明构建的重组酿酒酵母可在72h内催化300mg/L的柚皮素生成53.3mg/L的异樱花素，摩尔转化率达16.9％。
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