公开(公告)号：CN104830747A

公开(公告)日：2015-08-12

申请号：CN201510244547.0

申请日：2015-05-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  张晓欢 ,  崔文璟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/88 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N1/20 ,  C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12P13/02

Abstract: 本发明公开了一种高效表达高分子量型腈水合酶的基因工程菌及其应用，属于微生物基因工程技术领域。本发明所述的高分子量型腈水合酶基因nhhB(rbs)A(rbs)G是基于R.rhodochrous J1来源的腈水合酶基因bag，经密码子优化及表达元件改造之后化学合成得到，该基因全长1645bp，编码533个氨基酸，能够在大肠杆菌中成功表达。该方法高效安全，在24℃诱导16h即可获得96.7U/mL可溶性腈水合酶，纯化后比酶活高达234U/mg。该方法有利于生产过程中腈水合酶的提取纯化以及酰胺类物质的高效酶法合成。

公开(公告)号：CN103320458A

公开(公告)日：2013-09-25

申请号：CN201210345154.5

申请日：2012-09-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  余越春 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  何琛辉

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/88 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种来源于放线菌的基因在大肠杆菌中高效表达的方法，属于微生物基因工程技术领域。该方法高效安全，能够在较短的表达周期里获得大量的可溶性腈水合酶，有利于后期大规模生产腈水合酶的提取纯化，以及进一步对其进行腈水合酶进行理论研究。

公开(公告)号：CN102827822A

公开(公告)日：2012-12-19

申请号：CN201210345248.2

申请日：2012-09-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  高新星 ,  田亚平 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  丁宁

IPC: C12N9/48 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种重组亮氨酸氨肽酶的分离纯化方法，是采用阴离子交换层析纯化重组亮氨酸氨肽酶，属于生物制品分离纯化技术领域。本发明方法工艺简单，得率高，能得到纯度较高的重组亮氨酸氨肽酶。

公开(公告)号：CN101984052B

公开(公告)日：2012-09-26

申请号：CN201010580955.0

申请日：2010-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  杨晓燕

IPC: C12N9/10 ,  C12R1/55

Abstract: 本发明公开了一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，是采用阴离子交换柱分离纯化谷氨酰胺转胺酶，属于生物制品分离纯化技术领域。本发明方法工艺简单，具有较高的得率，所得到的谷氨酰胺转胺酶纯度高。

公开(公告)号：CN102492646A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110374404.3

申请日：2011-11-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  高新星 ,  崔文璟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产氨肽酶的重组大肠杆菌及其构建方法，生物工程技术领域。该方法简单有效，构建的重组大肠杆菌能高效表达氨肽酶，为后期研究氨肽酶的特性、结构等提供所需蛋白。

公开(公告)号：CN102492645A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110373346.2

申请日：2011-11-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  高新星 ,  崔文璟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/57 ,  C12N15/75 ,  C12N9/48 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种分泌表达氨肽酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法及利用该重组菌生产氨肽酶的方法，属于基因工程技术领域。该方法高效安全，获得的氨肽酶是胞外酶，有利于后期大规模生产的提取纯化，产品符合食品要求。

公开(公告)号：CN118667799A

公开(公告)日：2024-09-20

申请号：CN202410655495.5

申请日：2024-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  李萌 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  郭军玲

IPC: C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12P17/12

Abstract: 本发明公开了远端残基改造提高活性和稳定性的腈水解酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明通过对腈水解酶Nit6803与底物对接，确定Loop1‑Loop4，并进一步设计步进随机组合突变对Loop区进行随机突变，结合迭代组合突变，得到突变体M1‑M3，比酶活相较于WT均显著提升。进一步将突变体M3与催化口袋优选突变结合，得到突变体M4，其比酶活与热稳定性相较于WT均出现显著提升。本发明提供的远端残基改造策略能有效提高腈水解酶活性和稳定性，并且在其他种类酶性能提升方面也存在广阔前景。

公开(公告)号：CN118562775A

公开(公告)日：2024-08-30

申请号：CN202410793074.9

申请日：2024-06-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  宋晨硕 ,  韩来闯 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了嗜冷菌来源的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用，属于蛋白质工程领域。本发明中Gad‑PsyY的两种突变体相对于野生型，在60℃条件下热处理30min的残余酶活相较于野生型从原本的40％分别提升到了78％和52％，此外这两个突变体的最适催化温度相较于野生型也向高温处发生了3‑10℃的偏移。本发明提供了Gad‑PsyF的两种突变体相对于野生型，最适催化温度相较于野生型也向低温处发生了3‑10℃的偏移。本发明对于进一步深入认识谷氨酸脱羧酶的热适应机理和对其进行改造具有重要意义，同时也很大程度的解决了应用谷氨酸脱羧酶因热稳定性低或最适催化温度高从而导致常规生产条件下的产物产量低的问题。

公开(公告)号：CN114107269B

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202111395709.2

申请日：2021-11-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  马东 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02

Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。所述基序在α亚基上酶活中心的108、111和113位点均是高度保守的，它们分别与钴离子形成配位键。通过序列与结构比对，其他来源的腈水合酶在这些对应的氨基酸残基位点也是高度保守的。本发明通过将所述将腈水合酶β亚基上的第129号位的丙氨酸进行突变，得到突变体A129R的比酶活较野生型显著提升，且底物谱较野生型拓宽，对于异丁腈、正戊腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈、1‑萘甲腈和噻虫啉等具有较好的催化活性。

公开(公告)号：CN114214308B

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202111476802.6

申请日：2021-12-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  刘欣悦 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC: C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/12 ,  C12P7/40 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明为了提高腈水解酶PCC6803酶活，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，利用CAST建库NNK突变，通过已构建的烟酸传感器作为初筛工具，利用荧光强度作为筛选依据，将获得的有效果(荧光强度低的)的两个库的位点进行组合突变，再利用传感器进行筛选，然后将荧光强度低的突变体重新构建至表达载体及宿主中表达及纯化，利用HPLC测定纯酶比酶活，最终获得比酶活比野生酶WT提高了57％、180％、555％的突变体。