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公开(公告)号：CN114672509B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202210173671.2
申请日：2022-02-24
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/77 , C12N15/67 , C12N15/66 , C12N15/12 , C07K14/435
Abstract: 本发明提供了一种具有高表达能力的棒状杆菌和大肠杆菌双表达载体及其构建方法，目的在于提高外源蛋白的蛋白产量；从蛋白表达元件的突变入手，对目的基因前的一段序列加以突变，在不引入副产物，不对宿主菌株产生额外的影响下，提高蛋白产量；原pXMJ19‑egfp的荧光表达量在100000左右，现pXMJ19‑1676‑5’UTR‑egfp的荧光表达量在850000左右，对于5’utr核苷酸序列的加入，蛋白表达元件的绿色荧光蛋白表达能力有了8.5倍左右的提升。本发明不仅仅对egfp这种绿色荧光蛋白有效果，对m‑cherry的表达也有提升效果，说明，本发明中的质粒系统可以尝试应用于其他的外源蛋白表达。
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公开(公告)号：CN114672509A
公开(公告)日：2022-06-28
申请号：CN202210173671.2
申请日：2022-02-24
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/77 , C12N15/67 , C12N15/66 , C12N15/12 , C07K14/435
Abstract: 本发明提供了一种具有高表达能力的棒状杆菌和大肠杆菌双表达载体及其构建方法，目的在于提高外源蛋白的蛋白产量；从蛋白表达元件的突变入手，对目的基因前的一段序列加以突变，在不引入副产物，不对宿主菌株产生额外的影响下，提高蛋白产量；原pXMJ19‑egfp的荧光表达量在100000左右，现pXMJ19‑1676‑5’UTR‑egfp的荧光表达量在850000左右，对于5’utr核苷酸序列的加入，蛋白表达元件的绿色荧光蛋白表达能力有了8.5倍左右的提升。本发明不仅仅对egfp这种绿色荧光蛋白有效果，对m‑cherry的表达也有提升效果，说明，本发明中的质粒系统可以尝试应用于其他的外源蛋白表达。
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公开(公告)号：CN114574490A
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN202210238177.X
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母组成型启动子及其改造方法和应用，所述组成型启动子为P0887‑GAP、P0887‑AOX1和P0887‑GS中的一种；所述启动子P0887‑GAP的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示；所述启动子P0887‑AOX1的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；所述启动子P0887‑GS的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示。本发明通过替换启动子P0887的5’非翻译区序列，改造后启动子的转录活性基本不变，荧光强度提高至原始启动子的37倍。
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公开(公告)号：CN109097362B
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN201810990251.7
申请日：2018-08-28
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77
Abstract: 本发明公开了操纵子、其载体及其应用，其中，所述操纵子序列至少包括，3’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游201～257bp中任一碱基、5’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游308bp～345bp中任一碱基。本发明操纵子被诱导剂诱导后，蛋白表达活性显著高于传统Ptac的诱导表达活性，是一种超高效操纵子。本发明操纵子能够用于原核生物内源或外源蛋白的高效表达。
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公开(公告)号：CN114457104A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210068136.0
申请日：2022-01-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种猪伪狂犬病病毒糖蛋白gD的表达载体及其制备方法和应用，在启动子下游含有PRV‑gD基因的表达质粒；其中，所述启动子为组成型启动子H36,所述组成型启动子H36的基因序列如SEQ ID NO.4所示，所述PRV‑gD基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明表达的PRV‑gD具有免疫活性，为猪伪狂犬病亚单位疫苗的研究和建立高效免疫学检测技术提供技术指导和材料。
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Patent Agency Ranking
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公开(公告)号：CN112080456A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202010969328.X
申请日：2020-09-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其能通过对发酵方法的各工艺步骤、参数条件以及培养基配制进行综合优化，以提高外源蛋白的表达水平。一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、在生长温度条件下培养大肠杆菌，生长温度为30‑37℃；步骤2、待细胞密度在OD600条件下达到40±5℃时，转为诱导温度下培养大肠杆菌，诱导温度为20‑35℃，诱导温度低于生长温度；步骤3、在诱导温度下培养0.5‑2 h后加入诱导剂进行诱导。采用本发明方法的表达调控，可有效地延长大肠杆菌培养周期，提高大肠杆菌的细胞密度，同时实现较高的蛋白表达量。
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公开(公告)号：CN111909879A
公开(公告)日：2020-11-10
申请号：CN202010859729.X
申请日：2020-08-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种高效表达外源蛋白的谷氨酸棒杆菌诱变菌株，其能解决现有谷氨酸棒杆菌作为外源蛋白表达宿主时，蛋白表达量低的技术问题。一种高效表达外源蛋白的谷氨酸棒杆菌诱变菌株，其特征在于：该谷氨酸棒杆菌诱变菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20138。本发明的谷氨酸棒杆菌诱变菌株，经外源蛋白表达验证，与出发菌株进行对比，胞内蛋白的表达量、分泌蛋白的表达量均得到显著增强。
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公开(公告)号：CN110628616A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910893202.6
申请日：2019-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种反应器系统及其应用，其不仅能够高通量的开展工艺条件的研发，大大提高生物医药研发效率，而且将载体的吸附性能考虑在内，使得优化后的工艺条件能够成功放大至固定床反应器，并可缩减研发成本。一种反应器系统，其特征在于：反应器系统包括离心管架、离心管和振荡二氧化碳培养箱，离心管插装于离心管架上，离心管架安装于振荡二氧化碳培养箱内的托盘上，离心管包括管体和盖子，管体的内腔下部固定有载体，盖子开设有透气孔并内置有过滤膜，过滤膜封装透气孔。本发明的反应器系统，其采用离心管和载体构成种子细胞培养的反应器，能够通过离心管架将反应器批量设置，通过振荡二氧化碳培养箱进行动态培养。
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