公开(公告)号：CN113151586B

公开(公告)日：2022-09-13

申请号：CN202110081815.7

申请日：2021-01-21

Applicant: 浙江大学

Inventor： 顾金燕 ,  董伟仁 ,  颜焰 ,  周继勇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了用于检测、鉴别猪伪狂犬病毒Ⅰ型和Ⅱ型的引物组合、试剂盒及方法。所述引物组合包括：上游引物Ⅰ：5’‑GAAGCCCCCGCGGAACAA‑3’，上游引物Ⅱ：5’‑CGCGGCCTCCACGCCCGC‑3’，下游引物：5’‑GCGAGGGAGGCGTTGGCG‑3’，其中，上游引物Ⅰ与下游引物配合用于扩增Ⅰ型猪伪狂犬病毒获得283bp序列，上游引物Ⅱ与下游引物配合用于扩增Ⅱ型猪伪狂犬病毒获得351bp序列。本研究通过生物信息学分析方法明确可用于基因分型的gC靶基因，并首次利用AS‑PCR原理来设计分型引物，并通过实验筛选到特异性分型的上游引物，而共用保守下游引物，进而减少了体系中的引物种类与数量，降低错配的可能，从而提高扩增效率，最终建立了灵敏度为104的单重PCR和灵敏度为104的双重PCR检测体系。

公开(公告)号：CN114645099A

公开(公告)日：2022-06-21

申请号：CN202210140250.X

申请日：2022-02-16

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  董伟仁 ,  顾金燕 ,  颜焰 ,  金玉兰 ,  彭曦冉

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11

Abstract: 一种非洲猪瘟病毒基因II型和非II型的快速鉴别方法及其应用，本发明对B646L基因的特异性差异位点1500位核苷酸进行检测，非洲猪瘟病毒基因II型为C，基因非II型为T。通过设计病毒不同基因型差异位点的特异性引物来有效区分非洲猪瘟病毒基因II型和非II型。筛选得到的引物对非洲猪瘟病毒基因II型的扩增效率高，对非洲猪瘟病毒基因非II型扩增效率低，不需通过测序即可判断非洲猪瘟病毒基因型为II型或非II型，检测速度快，成本低。

公开(公告)号：CN109970852A

公开(公告)日：2019-07-05

申请号：CN201910258004.2

申请日：2019-04-01

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇

IPC: C07K16/10 ,  C12N5/20 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种分泌抗狂犬病毒M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及应用，属于生物技术领域。所述杂交瘤细胞株的分类命名为杂交瘤细胞株4A1，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201947。该杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体效价高，特异性好，生物学特性优良；鉴定了其识别RABV M蛋白的精细抗原变异表位，能够用于区分疫苗Flury毒株和其它RABV毒株；将其应用于制备检测狂犬病毒RABV的试剂盒，可以检测RABV感染以及鉴别诊断疫苗Flury毒株和其它RABV毒株。

公开(公告)号：CN105463136B

公开(公告)日：2018-08-28

申请号：CN201610029744.5

申请日：2016-01-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 廖敏 ,  雷静 ,  周继勇 ,  方祥年

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域，旨在提供一种用于鸡传染性支气管炎病毒RT‑PCR分型检测的试剂盒。该试剂盒包括下述三对引物：根据传染性支气管炎病毒的S1基因片段设计的通用引物和4/91类型毒株特异性引物，以及根据nsp12基因片段设计的肾型毒株特异性引物，所述三对引物的序列如SEQ ID NO:6～11所示。本发明提供的试剂盒仅需通过一次RT‑PCR反应就能达到对IBV进行分型检测目的，是业内首次用一次性RT‑PCR的方法实现对肾型、4/91类型、呼吸型三种类型IBV毒株的鉴别检测。本发明具有使用方便快捷、敏感性高、特异性强等优点，为临床上IBV的快速鉴别诊断、流行病学调查以及IB的防控提供了一种新的有效的检测手段。

公开(公告)号：CN107815441A

公开(公告)日：2018-03-20

申请号：CN201710774869.5

申请日：2017-08-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  邢刚 ,  金玉兰 ,  顾金燕 ,  颜焰 ,  尹笛 ,  廖敏 ,  周赟 ,  郑肖娟

IPC: C12N7/01 ,  A61K39/245 ,  A61P31/22 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种Ⅱ型伪狂犬病毒减毒株及其制备方法和应用。所述伪狂犬病毒减毒株，为gE-/TK-双缺毒株，命名为猪伪狂犬病病毒双缺株PRV-HD/c，保藏号为CGMCC No.14325。本发明伪狂犬病毒减毒株由新分离的猪伪狂犬病毒毒株经过gE和TK双基因缺失处理获得，致病力减弱，免疫原性强，用该伪狂犬病毒减毒株制备的灭活疫苗或减毒活疫苗可对猪只和小鼠等猪伪狂犬病毒易感动物提供有效免疫。

公开(公告)号：CN105886502A

公开(公告)日：2016-08-24

申请号：CN201610338455.3

申请日：2016-05-19

Applicant: 浙江大学

Inventor： 廖敏 ,  莫开昆 ,  周继勇 ,  郑肖娟

IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2545/113

Abstract: 本发明公开了一种用于制备检测禽腺病毒4型试剂盒的引物对及其应用，该引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种包含所述引物对的试剂盒以及检测禽腺病毒4型的方法。所述引物对能特异地扩增出样品中的禽腺病毒4型的Hexon基因片段，检测灵敏度高，最低检测限达7.2×10?4ng/μL，结果准确，可将其应用到对禽腺病毒4型的检测和鉴定当中；引物对对禽腺病毒4型的不同毒株的检测具有通用性；本发明建立的一种快速、特异、准确的禽腺病毒4型的检测方法，为今后对该病的流行检测和防控提供检测工具。

公开(公告)号：CN101413950B

公开(公告)日：2013-04-10

申请号：CN200810162444.X

申请日：2008-11-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  颜焰 ,  金玉兰

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/558

Abstract: PCV2抗原亚型鉴定试纸卡适用于猪PCV2亚型鉴定。其反应试剂载体吸附层包括纤维层，金标纤维层，纤维素膜层和吸水材料层；金标纤维层为吸附胶体金标记的识别PCV共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体的金标玻璃棉，纤维素膜层上印制检测印迹T1、T2、T3和对照印迹C；检测印迹T1为识别1767PCV2亚型特异性抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的印迹，检测印迹T2为识别1766PCV2和1767PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的印迹，检测印迹T3为识别PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的印迹，对照印迹C为抗小鼠IgG多克隆抗体溶液印制的印迹。试纸卡特异性强，敏感性高，检测结果直观，易于推广应用。

公开(公告)号：CN102242147B

公开(公告)日：2012-11-21

申请号：CN201110123586.7

申请日：2011-05-13

Applicant: 浙江同点生物科技有限公司 ,  浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  钟伯雄 ,  颜焰 ,  危浩 ,  阮系真 ,  庄兰芳 ,  郑育良

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明公开了一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法。先构建家蚕合成分泌狂犬病病毒核蛋白RVNP的载体pBSer1RVNP-A3EGFP质粒，再利用显微注射转基因家蚕技术将这种质粒与能够提供转座酶的辅助质粒一起导入到家蚕突变品种丝胶蚕已解除滞育的受精卵内，依靠piggyBac转座子的转座特性，使绿色荧光蛋白基因和狂犬病病毒核蛋白基因导入到丝胶蚕的基因组内，并得到稳定遗传和表达，从而创制成一种能够在家蚕中部丝腺细胞特异性合成分泌狂犬病病毒核蛋白的转基因家蚕。

公开(公告)号：CN101413949A

公开(公告)日：2009-04-22

申请号：CN200810162443.5

申请日：2008-11-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  金玉兰 ,  颜焰

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/558

Abstract: PCV2亚型鉴定检测试纸卡是适用于猪PCV2亚型鉴定的试纸卡。其反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，吸附层包括纤维层，金标纤维层，纤维素膜层和吸水材料层；金标纤维层为吸附胶体金标记的识别PCV1和PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体的金标玻璃棉，纤维素膜层为印制检测印迹T1、T2和对照印迹C的硝酸纤维素膜；T1为识别1767PCV2亚型特异性抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的1767亚型检测印迹，T2为识别1766PCV2和1767PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的1766和1767亚型检测印迹，对照印迹C为抗小鼠IgG多克隆抗体溶液印制的印迹。试纸卡特异性强，敏感性高，检测结果直观，易于推广应用。

公开(公告)号：CN101413948A

公开(公告)日：2009-04-22

申请号：CN200810162442.0

申请日：2008-11-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  颜焰 ,  马益平 ,  尹伟

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 犬狂犬病病毒NP－ELISA抗体检测试剂盒，其中抗体检测板为包被狂犬病病毒核蛋白NP的可拆96孔酶标板，酶结合物工作液为辣根过氧化物酶标记抗犬IgG单克隆抗体，阳性对照为犬狂犬病标准阳性血清，阴性对照为犬标准阴性血清，狂犬病病毒核蛋白NP为利用RT－PCR技术扩增狂犬病病毒ERA疫苗株NP基因1350bp的片段，将其插入到原核表达载体pET－28a的下游构建pET－NP重组表达质粒，以氯化钙法转化大肠杆菌BL21 DE3，经0.01mMIPTG诱导表达，用超声波裂解表达菌体，经Ni－NTA亲和层析柱纯化获得。包被NP抗体检测板的狂犬病病毒核NP重组蛋白的使用浓度为：2μg/ml，用量为100μl/孔。本发明的优点为特异性强，敏感性高，安全性好。