公开(公告)号：CN110577969B

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN201910731396.X

申请日：2019-08-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇 ,  王帅

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/864 ,  C12N15/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种CRISPR/Sa‑SlugCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为Sa‑SlugCas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑；Sa‑SlugCas9为融合蛋白，把SaCas9的PAM识别结构域（PAM interacting，PI）替换为SlugCas9的PAM识别结构域（SlugCas9‑PI）。Sa‑SlugCas9蛋白小，为1055个氨基酸，识别的PAM序列简单，所述Sa‑SlugCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN113652411A

公开(公告)日：2021-11-16

申请号：CN202110878452.X

申请日：2021-07-30

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  王帅 ,  高思琪 ,  王瑶

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及一种CRISPR/Cas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为特定Cas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确定位靶向DNA序列并产生切割，使所述靶序列发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑。所述各特定Cas9蛋白识别的PAM序列种类多样，适应于不同场景下的基因编辑，拓宽了可靶向范围，并且所述特定Hsp1‑Hsp3Cas9‑Y446A蛋白和Hsp1‑Hsp3Cas9‑K390A‑Y446A蛋白具有较高的编辑活性和特异性。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN110577971A

公开(公告)日：2019-12-17

申请号：CN201910731401.7

申请日：2019-08-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇 ,  王帅

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/864 ,  C12N15/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种CRISPR/Sa-SauriCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为Sa-SauriCas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑；Sa-SauriCas9为融合蛋白，把SaCas9的PAM识别结构域（PAM interacting，PI）替换为SauriCas9的PAM识别结构域（SauriCas9-PI）。Sa-SauriCas9蛋白小，为1056个氨基酸，识别的PAM序列简单，所述Sa-SauriCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN110551763A

公开(公告)日：2019-12-10

申请号：CN201910731802.2

申请日：2019-08-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇 ,  王帅

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/864 ,  C12N15/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种CRISPR/SlutCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为SlutCas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑；SlutCas9蛋白小，为1054个氨基酸，识别的PAM序列简单，所述SlutCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN110066852A

公开(公告)日：2019-07-30

申请号：CN201910454917.1

申请日：2019-05-29

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  胡子英 ,  王大奇

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种在哺乳动物细胞中检测CRISPR/Cas PAM序列的方法和系统。本发明方法的具体步骤如下：(1)构建包含PAM序列的质粒文库；(2)构建包含PAM序列的慢病毒文库；(3)构建包含PAM序列文库的细胞系；(4)流式分选去除荧光报告基因假阳性背景；(5)转染CRISPR/Cas至包含PAM序列文库的细胞系进行编辑；(6)流式分选出荧光报告基因阳性细胞，通过PCR构建二代测序文库；(7)生物信息学分析二代测序结果，找出能够产生基因编辑的PAM序列。本发明将快速筛选出在哺乳动物细胞中能产生基因编辑的CRISPR/Cas系统，并通过测序找出其需要的PAM序列。

公开(公告)号：CN109251963A

公开(公告)日：2019-01-22

申请号：CN201811342073.3

申请日：2018-11-12

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王永明 ,  王贝

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/35

CPC classification number: C12Q1/6844 ,  C12Q1/689 ,  C12Q2521/507 ,  C12Q2522/101

Abstract: 本发明属于核酸检测技术领域，具体为一种恒温检测细胞培养液中支原体污染的方法及试剂盒。本发明方法包括：构建反应体系，包含：RPA恒温扩增反应成分，特异性扩增支原体的引物对，Cas12a蛋白，靶向目标序列的crRNA和单链DNA报告分子；取1mL细胞培养上清液，加热培养，取1uL作为检测样品加入到一体化检测体系中，经过反应，可直接观察检测体系荧光变化进行支原体检测；试剂盒含有：扩增支原体16s rRNA保守区域DNA序列的引物对，RPA恒温扩增反应成分，Cas12a蛋白，与靶基因互补的crRNA和两端分别被荧光基团和猝灭基团修饰的单链DNA报告分子。本发明操作简单，检验周期短，并且解决了常规支原体检测过程中出现的开盖污染问题。