公开(公告)号：CN103060352A

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN201210345155.X

申请日：2012-09-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  朱龙宝 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  曲娟娟

IPC: C12N15/60 ,  C12N15/10 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开一种获取粘红酵母苯丙氨酸脱氨酶基因的方法，经过提取RNA，反转录，PCR扩增，构建克隆载体pUCm-T-pal，测序，获得全长的苯丙氨酸脱氨酶基因序列，属于基因克隆技术领域。本发明方法操作简单，具有较高的效率和成功率。

公开(公告)号：CN102899311A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210345247.8

申请日：2012-09-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  杜坤 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  葛春蕾

IPC: C12N15/09

Abstract: 本发明公开了一种快速高效删除质粒上基因片度的方法，是采用设计两个特异性引物片段，通过一步PCR获得目标片段已删除的重组质粒的方法，属于基因克隆技术领域。本发明方法操作简单，具有非常高的效率和成功率。

公开(公告)号：CN102732577A

公开(公告)日：2012-10-17

申请号：CN201110436240.2

申请日：2011-12-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘元法 ,  张康逸 ,  周丽 ,  孟宗 ,  王兴国 ,  宋志华

IPC: C12P13/00 ,  C07F9/10

Abstract: 本发明公开了一种甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)的制备方法，属于脂质开发应用技术领域。包括如下步骤：以大豆粉末磷脂为原料，在水相中，用脂肪酶水解磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)生产L-α-GPE；阳离子和阴离子交换树脂柱色谱分别去除阳离子和阴离子，硅胶柱色谱纯化，活性炭脱色，真空浓缩，得到无色透明的L-α-GPE。HPLC-ELSD分析，化学纯度99.6％，回收率66.5％；旋光仪分析，光学纯度ee：99％，(H2O含量15.7％)。

公开(公告)号：CN102532190A

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN201110436224.3

申请日：2011-12-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘元法 ,  周丽 ,  张康逸 ,  王兴国

IPC: C07F9/10

Abstract: 本发明公开了一种柱层析法制备高纯甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)的方法，属于磷脂深加工技术领域。本发明采用甲醇钠催化大豆粉末磷脂在无水甲醇体系中反应制备出含甘油磷脂酰乙醇胺的混合液，调节pH后，先后经过可在非水介质中使用的强阳离子交换树脂(无水醇相平衡)层析柱和强阴离子交换树脂(水平衡)层析柱，采用特定的解吸液解吸，最终将解吸液减压蒸馏，所得浅黄色透明黏稠状液体即为甘油磷脂酰乙醇胺产品。柱层析法所得产品纯度很高，成本较低，并可以同时分离出纯度较高的甘油磷脂酰胆碱，工艺简单，可以适用于工业生产。本发明拓展了磷脂深加工产品的应用范围，可以为甘油磷脂酰乙醇胺的工业生产奠定基础。

公开(公告)号：CN118995458A

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202411189749.5

申请日：2024-08-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈献忠 ,  范成 ,  沈微 ,  杨海泉 ,  夏媛媛 ,  周丽

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12P5/00 ,  C12R1/74

Abstract: 本发明公开了一种合成蛇麻烯的热带假丝酵母工程菌株及应用，属于代谢工程领域。本发明将蛇麻烯合成途径中从乙酰辅酶A到甲羟戊酸合成相关基因在酵母细胞质中表达，将从IPP和DMAPP到蛇麻烯合成相关基因在酵母过氧化物酶体中过表达，将从甲羟戊酸到IPP和DMAPP合成相关基因在细胞质或过氧化物酶体中过表达。应用本发明的方法构建的重组菌株的蛇麻烯产量显著提高，经过4天摇瓶发酵后蛇麻烯产量可达607.8mg·L‑1。本发明构建的工程菌株可以高效合成蛇麻烯，并且生产性能稳定，具有一定的应用前景。

公开(公告)号：CN114107269B

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202111395709.2

申请日：2021-11-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  马东 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02

Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。所述基序在α亚基上酶活中心的108、111和113位点均是高度保守的，它们分别与钴离子形成配位键。通过序列与结构比对，其他来源的腈水合酶在这些对应的氨基酸残基位点也是高度保守的。本发明通过将所述将腈水合酶β亚基上的第129号位的丙氨酸进行突变，得到突变体A129R的比酶活较野生型显著提升，且底物谱较野生型拓宽，对于异丁腈、正戊腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈、1‑萘甲腈和噻虫啉等具有较好的催化活性。

公开(公告)号：CN114214308B

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202111476802.6

申请日：2021-12-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  韩来闯 ,  刘欣悦 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC: C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/12 ,  C12P7/40 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明为了提高腈水解酶PCC6803酶活，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，利用CAST建库NNK突变，通过已构建的烟酸传感器作为初筛工具，利用荧光强度作为筛选依据，将获得的有效果(荧光强度低的)的两个库的位点进行组合突变，再利用传感器进行筛选，然后将荧光强度低的突变体重新构建至表达载体及宿主中表达及纯化，利用HPLC测定纯酶比酶活，最终获得比酶活比野生酶WT提高了57％、180％、555％的突变体。

公开(公告)号：CN114350645B

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202111457993.1

申请日：2021-12-02

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  吴桐 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种新基因型腈水合酶及其重组表达，属于生物工程技术领域。所述腈水合酶来源于RoseomonasStagni，基因全长1014bp，编码336个氨基酸，并将其成功构建于大肠杆菌重组表达体系中。得到的目的蛋白以3‑氰基嘧啶为催化底物，可证明其是一种新型的腈水合酶，对烟腈有催化活力。并且将所述腈水合酶第250位精氨酸突变为丙氨酸后酶活提高了3.61倍，更加适于酰胺类物质在工业领域的生产。

公开(公告)号：CN112322606B

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202011307426.3

申请日：2020-11-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  郭军玲 ,  江诗进 ,  程中一 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。

公开(公告)号：CN114250189A

公开(公告)日：2022-03-29

申请号：CN202111490749.5

申请日：2021-12-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  崔文璟 ,  索菲娅 ,  钱红宇 ,  韩来闯 ,  程中一 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C07K14/315 ,  C12N15/60 ,  C12N15/52 ,  C12Q1/18 ,  G01N33/68 ,  A61K35/74 ,  A61K38/16 ,  A61P31/04 ,  A23L33/135 ,  A23L33/18 ,  C12R1/19 ,  C12R1/46

Abstract: 本发明公开了一种合成乳链菌肽Nisin的异源表达体系及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌采用pRSFDuet‑1载体过表达了乳酸链球菌素前体肽nisA和修饰蛋白nisB，同时采用pACYCDuet‑1载体过表达了修饰蛋白nisC。本发明提供了一种Nisin在大肠杆菌异源表达的方法，该方法利用大肠杆菌自身对Nisin的抗性，实现了Nisin的组成型表达，从而脱离了宿主代谢和基因表达的双重调节，降低了后期的改在难度，有潜力提高Nisin的产量并降低生产成本，为开发新型Nisin高水平合成系统提供了可行方案。