公开(公告)号：CN103224951A

公开(公告)日：2013-07-31

申请号：CN201310028216.4

申请日：2013-01-25

申请人： 江南大学

发明人： 陈伟 ,  葛春蕾 ,  郑海军 ,  陆源 ,  朱荣 ,  邬敏辰 ,  吴静

IPC分类号： C12N15/81 ,  C12N15/20 ,  C12N1/19 ,  C07K14/555 ,  C12P21/02 ,  C12R1/84

摘要： 本发明提供了一种人白细胞介素29成熟肽第35位精氨酸定点突变为赖氨酸的变异体(hIL-29G)及其制备方法，属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工设计合成hIL-29成熟肽的上下游引物和定点突变引物；2)用上下游引物从hIL-29的cDNA扩增hIL-29成熟肽编码基因，再用突变引物对第104位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)培养重组酵母工程菌，于培养液添加1.5％(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体；5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达第35位精氨酸突变为赖氨酸的hIL-29突变体，适用于工业化制备人白细胞介素29成熟肽突变体。

公开(公告)号：CN104789566B

公开(公告)日：2017-09-29

申请号：CN201510203088.1

申请日：2015-04-24

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  葛春蕾

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/54 ,  C12N9/48 ,  C12R1/125

摘要： 本发明公开了一种启动子及其应用，属于微生物基因工程领域。本发明所述方法中涉及的启动子Pd(‑35～‑10)HpaII基因是在启动子PHpaII的基础上对其核心区进行串联改造而形成的。在新启动子Pd(‑35～‑10)HpaII控制转录下，重组纳豆激酶的纤溶活力高达200.83FU/ml。该方法高效安全，能够有效提高纳豆激酶的表达量，且为进一步研究启动子对异源基因表达的影响提供了理论基础。

公开(公告)号：CN105505931A

公开(公告)日：2016-04-20

申请号：CN201610004239.5

申请日：2016-01-05

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  葛春蕾

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/54 ,  C12N9/48

CPC分类号： C12N9/54 ,  C12N9/485 ,  C12Y304/11011

摘要： 本发明公开了一种强启动子及其在提高纳豆激酶表达的应用，属于微生物基因工程领域。本发明涉及的一系列启动子基因是在启动子PP43和/或PHpaII的基础上对其进行n次(n≥1)串联形成的。在强启动子PHpaII-PHpaII-PP43控制转录下，重组纳豆激酶的纤溶活力高达264.2FU/ml。该方法高效安全，能够有效提高纳豆激酶的表达量，且为进一步研究启动子对异源基因表达的影响提供了理论基础。

公开(公告)号：CN102899311A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210345247.8

申请日：2012-09-18

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  杜坤 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  葛春蕾

IPC分类号： C12N15/09

摘要： 本发明公开了一种快速高效删除质粒上基因片度的方法，是采用设计两个特异性引物片段，通过一步PCR获得目标片段已删除的重组质粒的方法，属于基因克隆技术领域。本发明方法操作简单，具有非常高的效率和成功率。

公开(公告)号：CN105505931B

公开(公告)日：2018-11-09

申请号：CN201610004239.5

申请日：2016-01-05

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  葛春蕾

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/54 ,  C12N9/48

摘要： 本发明公开了一种强启动子及其在提高纳豆激酶表达的应用，属于微生物基因工程领域。本发明涉及的一系列启动子基因是在启动子PP43和/或PHpaII的基础上对其进行n次(n≥1)串联形成的。在强启动子PHpaII‑PHpaII‑PP43控制转录下，重组纳豆激酶的纤溶活力高达264.2FU/ml。该方法高效安全，能够有效提高纳豆激酶的表达量，且为进一步研究启动子对异源基因表达的影响提供了理论基础。

公开(公告)号：CN103224952A

公开(公告)日：2013-07-31

申请号：CN201310028218.3

申请日：2013-01-25

申请人： 江南大学

发明人： 陈伟 ,  朱荣 ,  葛春蕾 ,  陆源 ,  郑海军 ,  邬敏辰 ,  吴静

IPC分类号： C12N15/81 ,  C12N15/20 ,  C12N1/19 ,  C07K14/555 ,  C12P21/02 ,  C12R1/84

摘要： 本发明提供了一种人白细胞介素29成熟肽第33位赖氨酸、35位精氨酸定点突变为精氨酸、赖氨酸的变异体(hIL-29Z)及其制备方法，属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工设计合成定点突变引物；2)用突变引物对hIL-29成熟肽编码基因第98位和104位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)培养重组酵母工程菌，于培养液添加1.5％(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体；5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达第33位赖氨酸、35位精氨酸突变为精氨酸、赖氨酸的hIL-29变异体，适用于工业化制备人白细胞介素29成熟肽变异体。

公开(公告)号：CN104789566A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201510203088.1

申请日：2015-04-24

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  葛春蕾

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/54 ,  C12N9/48 ,  C12R1/125

摘要： 本发明公开了一种新型启动子及其应用，属于微生物基因工程领域。本发明所述方法中涉及的启动子Pd(-35～-10)HpaII基因是在启动子PHpaII的基础上对其核心区进行串联改造而形成的。在新启动子Pd(-35～-10)HpaII控制转录下，重组纳豆激酶的纤溶活力高达200.83FU/ml。该方法高效安全，能够有效提高纳豆激酶的表达量，且为进一步研究启动子对异源基因表达的影响提供了理论基础。