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公开(公告)号：CN104513807B
公开(公告)日：2018-01-12
申请号：CN201310461790.9
申请日：2013-09-29
申请人： 深圳华大方舟生物技术有限公司 , 深圳华大基因科技有限公司
IPC分类号： C12N5/078 , C12N15/877
摘要： 本发明提供了一种从血液中分离、培养细胞的方法以及一种对非人动物进行克隆的方法。所述从血液中分离、培养细胞的方法包括以下步骤：将所述血液加入到分离液上层后利用密度梯度离心的方式进行离心，以便获得单个核细胞；将所述单个核细胞接种于含有贴壁细胞培养基的体外培养设备，以便获得贴壁细胞；以及将所述贴壁细胞进行传代培养，以便获得体细胞核移植的供体细胞。该方法获得的体细胞核移植的供体细胞可以直接用于手工克隆非人动物，不仅操作过程简单、易于实现、成本较低，且该方法对动物应激刺激少、伤害小，可以保证动物的完整外观、改善动物福利。
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公开(公告)号：CN107299113A
公开(公告)日：2017-10-27
申请号：CN201710439507.0
申请日：2017-06-12
申请人： 内蒙古大学
IPC分类号： C12N15/877 , C12N15/89
CPC分类号： C12N15/8775 , C12N15/89
摘要： 本发明公开了一种H3K27me3及其去甲基化酶KDM6A/B在小鼠核移植重构胚中的应用方法，分析了植入前各时期孤雌胚胎中H3K27三甲基化模式与克隆胚胎有何差异，这种模式的差异对克隆胚胎发育能力的影响，证实了通过对KDM6A和KDM6B的微调能提高克隆胚胎的囊胚发育率及克隆动物的出生率。
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公开(公告)号：CN107182940A
公开(公告)日：2017-09-22
申请号：CN201710323141.0
申请日：2017-05-09
申请人： 中国科学院动物研究所
IPC分类号： A01K67/027 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/877
摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体公开了一种抗寒及瘦肉型转基因猪及其制备方法。本发明通过将鼠的解偶联蛋白1基因转到猪的基因组中，获得了一种既能抵抗寒冷又能通过脂肪沉积减少来提高瘦肉率的转基因猪。本发明通过定点单基因的操纵，同时改善猪两个重要生产性状，不仅为大动物基因编辑的应用及其基础研究打下基础，也为育种工作者对家畜进行性状改良带来新的思路。
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公开(公告)号：CN107034218A
公开(公告)日：2017-08-11
申请号：CN201710424887.0
申请日：2017-06-07
申请人： 浙江大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/877 , C12N15/66 , A01K67/027
CPC分类号： C12N15/1137 , A01K67/0276 , A01K2217/075 , A01K2227/108 , A01K2267/02 , C12N15/66 , C12N15/8509 , C12N15/8778 , C12N15/907
摘要： 本发明提供了一种用于猪APN基因编辑的靶向sgRNA、修饰载体及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域，本发明提供的sgRNA和基因修饰载体，特异性强，能够非常高效地通过CRISPR/Cas9n系统在细胞水平上对猪APN基因进行编辑，用获得的APN基因编辑阳性细胞为供体细胞进行体细胞克隆和胚胎移植，得到的APN基因编辑克隆猪具有抗仔猪腹泻病的能力。本发明提供的一种抗仔猪腹泻病的猪的制备方法，破坏了引起仔猪腹泻病的病毒的受体，除了对目的基因APN进行编辑外不会引入其他任何外源基因，也不会对基因组上非APN基因的区域进行非特异的编辑，遗传背景干净清晰，极大的减少了后期转基因安全评估的工作。
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公开(公告)号：CN107018955A
公开(公告)日：2017-08-08
申请号：CN201710321636.X
申请日：2017-05-09
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： A01K67/027 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/877
CPC分类号： A01K67/0275 , A01K67/0273 , A01K2207/05 , A01K2217/058 , A01K2227/108 , A01K2267/02 , C12N15/1131 , C12N15/8509 , C12N15/8778 , C12N2310/14 , C12N2800/24
摘要： 本发明公开了一种抗猪圆环病毒2型转基因猪。该抗猪圆环病毒2型转基因猪的抗猪圆环病毒2型siRNA基因序列整合在第10号染色体上，可以高效特异表达抗猪圆环病毒2型siRNA，来抑制猪圆环病毒2型的表达及生物活性，从而起到防治猪感染圆环病毒疾病的作用。同时，该转基因猪删除了外源标记基因，减少了外源基因对转基因猪个体健康的影响，同时也可以简化转基因猪安全评价程序，有利于该转基因猪的产业化推广及应用。
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公开(公告)号：CN104357483B
公开(公告)日：2017-04-05
申请号：CN201410613163.7
申请日：2014-11-04
申请人： 东北农业大学
IPC分类号： C12N15/877
摘要： 本发明公开了一种提高猪细胞重编程能力的方法及应用，属于细胞移植和胚胎发育技术领域。本发明所提供的方法是在获取并培养猪卵母细胞和猪胎儿成纤维细胞后，进行体细胞核移植，最后进行iPS诱导并进行碱性磷酸酶染色。方法中利用小分子药物GSK126进行了处理，其使用方式有以下三种：1)猪胎儿成纤维细胞在核移植前利用小分子药物GSK126进行处理；2)在猪胎儿成纤维细胞体细胞核移植后，利用小分子药物GSK126处理融合胚胎；3)用于iPS诱导的猪胎儿成纤维细胞，在培养成熟后接种前利用小分子药物GSK126进行处理。本发明所提供的方法可以显著提高克隆胚胎的发育率和iPS诱导效率，提高幅度分别达到44.7％和111.3％。
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公开(公告)号：CN106086080A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610537461.1
申请日：2016-07-08
申请人： 西北农林科技大学
IPC分类号： C12N15/877 , C12N5/073
CPC分类号： C12N15/8771 , C12N5/0604
摘要： 本发明公开了一种利用微小核糖核酸提高牛克隆效率的方法，在体细胞核移植的电融合液中加入bta‑miR‑125b mimic，可以有效地导入到胚胎中，在避免产生转染的二次损伤的同时，还能有效地减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量。
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公开(公告)号：CN105593369A
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：CN201480054593.8
申请日：2014-05-27
申请人： 内帕基因株式会社
IPC分类号： C12N15/877 , A01K67/027
摘要： 一个目的是开发一种技术，其能够仅仅通过非常简单的操作来利用可广泛应用于哺乳动物的技术，该技术不需要利用ES细胞，并且其包括通过靶向基因组上的特定序列来修饰特定基因(基于ZFN等的基因组编辑技术)。提供了有效地修饰哺乳动物的任意靶基因的技术，其包括：将具有完整透明带的原核阶段哺乳动物合子浸入含有一对具有特定序列的mRNA分子的溶液中，和通过在三个步骤中施加多个方波脉冲来执行电穿孔处理，其中在预定范围内调节第一个电脉冲的总电能。
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公开(公告)号：CN105112450A
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN201510463471.0
申请日：2012-05-16
申请人： 密苏里大学管理者
IPC分类号： C12N15/877 , A01K67/027
CPC分类号： A01K67/0276 , A01K2217/075 , A01K2217/15 , A01K2227/108 , A01K2267/02 , C07K14/7056 , C07K14/70596 , C12N15/8509
摘要： 本公开涉及经基因修饰的猪，其中SIGLEC1基因的至少一个等位基因已经失活和/或CD163基因的至少一个等位基因已经失活。SIGLEC1基因的两个等位基因和/或CD163基因的两个等位基因失活的经基因修饰的猪抗猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。还提供了产生此类转基因猪的方法。
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公开(公告)号：CN103725710B
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201310728828.4
申请日：2013-12-25
申请人： 北京济福霖生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/877 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体提供了一种可自我删除游离载体，所述游离载体的核心功能区域从5’端到3’端包括：人EF1α启动子序列，loxp序列，EGFP编码序列，来源于人β干扰素基因的S/MAR序列，SV40的PolyA序列，小鼠Oct4启动子驱动Cre基因的表达盒序列，loxp序列。利用本发明所述载体进行基因打靶细胞及动物的制备，可删除筛选标记基因且不会产生基因插入突变，消除了marker基因对邻近基因表达的影响及对机体产生的潜在生物安全隐患。
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