一种抑制NK细胞KIR 2DL3受体表达的siRNA及其应用

    公开(公告)号:CN111575287B

    公开(公告)日:2024-05-31

    申请号:CN202010413234.4

    申请日:2020-05-15

    申请人: 刘广贤

    发明人: 刘广贤

    摘要: 本发明实施例公开了一种抑制NK细胞KIR 2DL3受体表达的siRNA及其应用,属于生物技术领域。所述siRNA序列为2DL3‑1或/和2DL3‑2,其中,2DL3‑1的正义链如SEQ ID NO.9所示,反义链如SEQ ID NO.10所示;2DL3‑2的正义链如SEQ ID NO.11所示,反义链如SEQ ID NO.12所示。本发明的siRNA能明显特异性抑制KIR 2DL3受体表达,可使NK细胞激活,杀伤活性显著增强,能够有效应用于抗病毒和抗肿瘤的防治中。

    重组慢病毒Lenti-shRRP15的制备和特异性应用杀伤神经胶质瘤细胞

    公开(公告)号:CN118086404A

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202410117883.8

    申请日:2024-01-29

    摘要: 本发明涉及重组慢病毒Lenti‑shRRP15的制备和特异性应用杀伤神经胶质瘤细胞。以一种siRNA序列为靶点的shRRP15引物进行化学合成,将引物等比例混和退火后,得到shRRP15序列,使用引物对慢病毒质粒pLKO.1进行PCR扩增,并进行琼脂糖凝胶回收,使用无缝克隆试剂盒连接shRRP15和质粒pLKO.1,得到慢病毒载体质粒pLKO‑shRRP15,应用细胞转染试剂盒SuperFect转染慢病毒质粒pLKO‑shRRP15和辅助载体质粒共转染293T细胞,细胞转染12小时后,更换细胞培养液;细胞培养24小时后,收集细胞培养上清,细胞继续培养24小时,再次收集细胞培养上清,离心收集病毒浓缩液,得到重组慢病毒Lenti‑shRRP15,利用慢病毒作为载体感染神经胶质瘤细胞,以核仁蛋白分子RRP15作为特异性抗肿瘤治疗的靶标,制备慢病毒Lenti‑shRRP15制剂进行神经胶质瘤治疗,具有高效、高特异、低副作用等巨大优势。

    一种一步构建猪流行性腹泻病毒感染性质粒的方法与应用

    公开(公告)号:CN118086390A

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202410212036.X

    申请日:2024-02-27

    申请人: 浙江大学

    摘要: 本发明涉及动物病毒学与基因工程学技术领域,旨在提供一种一步构建猪流行性腹泻病毒感染性质粒的方法与应用。本发明通过分为4段的PEDV全基因组cDNA与pBelo‑BAC11载体骨架的一步同源重组,实现猪流行性腹泻病毒感染性cDNA质粒高效构建;通过五片段同源重组一步构建具有特定遗传变化的PEDV感染性cDNA质粒新突变体;最终得到序列如SEQ ID NO:41所示的PEDV感染性cDNA质粒。本发明通过打断毒性序列,降低了PEDV基因组对细胞的毒性,使PEDV基因组cDNA序列片段在高拷贝质粒pUC57中稳定保存,并实现一步同源重组构建PEDV感染性cDNA克隆。因此通过本方法可以高效实现猪流行性腹泻病毒感染性cDNA克隆的构建和编辑。

    一种敲除p300基因的BCBL1细胞系及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN113736780B

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202010466070.1

    申请日:2020-05-28

    申请人: 暨南大学

    摘要: 本发明公开了一种敲除p300基因的BCBL1细胞系及其构建方法与应用,属于生物技术领域。本发明提供的特异性靶向p300基因的sgRNA,可通过CRISPR/Cas9技术构建p300基因敲除的细胞系。通过本发明方法可以得到稳定敲除p300的BCBL1细胞系。本发明所提供的p300基因敲除细胞系能够为卡波西肉瘤相关疱疹病毒在宿主细胞中复制的研究提供细胞模型,也能够为p300基因与肿瘤的发生机制和药物治疗研究提供细胞模型。本发明构建方法还可以为其他悬浮细胞系得到稳定敲除的细胞株提供经验。

    SARS-CoV-2病毒样颗粒及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN118028253A

    公开(公告)日:2024-05-14

    申请号:CN202410207574.X

    申请日:2024-02-26

    摘要: 本发明公开带有EGFP和HiBiT双标签的SARS‑CoV‑2病毒样颗粒及其制备方法和应用。该SARS‑CoV‑2病毒样颗粒包括S蛋白或其变体、M蛋白或其变体、E蛋白或其变体以及N蛋白或其变体,其中E蛋白或其变体上连接有EGFP标签,N蛋白或其变体上连接有HiBiT标签。本发明携带双标签的SARS‑CoV‑2病毒样颗粒既能通过荧光显微镜直接观察病毒的包装和进入过程,又能通过荧光素酶定量病毒样颗粒的包装效率和侵染活性。此外,本发明的病毒样颗粒为筛选或评价SARS‑CoV‑2进入抑制剂提供了安全的模型,能够促进SARS‑CoV‑2感染机制的研究。