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公开(公告)号：CN116298278A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310418909.8
申请日：2023-04-18
Applicant: 浙江大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/68 , G01N33/58 , G01N33/543 , C07K19/00 , C12N15/62
Abstract: 本发明公开了一种用于传染性支气管炎病毒中和抗体检测的ELISA试剂盒及其应用，属于生物技术领域。所述试剂盒包括：由S1蛋白中和抗原表位融合蛋白包被的酶联反应板，所述融合蛋白包括传染性支气管炎病毒编码的S1蛋白中的四个中和抗原表位，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示。本发明利用筛选鉴定的4个具有中和活性的抗原表位，将其进行串联融合表达出蛋白，作为检测抗原，建立一种简便、特异的中和抗体ELISA方法。该检测抗原对流行毒株具有通用性，能够在实际生产中快速检测鸡群血清样本中是否含有中和抗体，为准确判断鸡群免疫是否有效提供依据，为传染性支气管炎疫病的有效防控提供参考。
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公开(公告)号：CN107190022B
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201710507429.3
申请日：2017-06-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种快速构建禽传染性支气管炎病毒反向遗传株的方法，属于冠状病毒反向遗传技术领域。所述构建方法包括：以BAC载体为骨架，运用体外同源重组技术，快速完成包含禽传染性支气管炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建，将构建的重组质粒直接转染细胞，在细胞内转录获得具有感染性的转录本，并完成病毒包装，将细胞与培养基的混合液接种SPF鸡胚并传代，获得禽传染性支气管炎病毒反向遗传株。该构建方法操作简单，阳性克隆率高，而且获得的反向遗传株具有传代稳定性，为体外研究病毒的致病机理、开发新型疫苗等提供了有效的工具；本发明利用5’添加的CMV启动子，在细胞内进行转录，利用3’添加的HDVR序列，大大提高了病毒的拯救效率。
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公开(公告)号：CN105886502B
公开(公告)日：2019-04-02
申请号：CN201610338455.3
申请日：2016-05-19
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种用于制备检测禽腺病毒4型试剂盒的引物对及其应用，该引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种包含所述引物对的试剂盒以及检测禽腺病毒4型的方法。所述引物对能特异地扩增出样品中的禽腺病毒4型的Hexon基因片段，检测灵敏度高，最低检测限达7.2×10‑4ng/μL，结果准确，可将其应用到对禽腺病毒4型的检测和鉴定当中；引物对对禽腺病毒4型的不同毒株的检测具有通用性；本发明建立的一种快速、特异、准确的禽腺病毒4型的检测方法，为今后对该病的流行检测和防控提供检测工具。
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公开(公告)号：CN105624122A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610069177.6
申请日：2016-02-01
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12N7/00 , C12N2770/20021 , C12N2770/20034
Abstract: 本发明涉及病毒学领域，旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒自然突变株。该病毒自然突变株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为传染性支气管炎病毒，保藏号为CGMCC NO.11491。其基因组长为27,541bp，其全基因组序列如SEQ ID NO:1所示，具有典型的IBV基因组编码结构特征。本发明提供的有特殊基因插入的突变株，能够突破疫苗的免疫保护，而在机体繁殖下来，这个突变株可以在易感鸡群中增殖，但不致敏感鸡产生明显致病性，因此该毒株可以作为进一步研究弱毒疫苗或IBV毒株变异机制的基础材料。
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公开(公告)号：CN105463136A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201610029744.5
申请日：2016-01-18
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域，旨在提供一种用于鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR分型检测的试剂盒。该试剂盒包括下述三对引物：根据传染性支气管炎病毒的S1基因片段设计的通用引物和4/91类型毒株特异性引物，以及根据nsp12基因片段设计的肾型毒株特异性引物，所述三对引物的序列如SEQ ID NO:6～11所示。本发明提供的试剂盒仅需通过一次RT-PCR反应就能达到对IBV进行分型检测目的，是业内首次用一次性RT-PCR的方法实现对肾型、4/91类型、呼吸型三种类型IBV毒株的鉴别检测。本发明具有使用方便快捷、敏感性高、特异性强等优点，为临床上IBV的快速鉴别诊断、流行病学调查以及IB的防控提供了一种新的有效的检测手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101408548B
公开(公告)日：2013-07-03
申请号：CN200810162445.4
申请日：2008-11-13
Applicant: 浙江大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558
Abstract: PCV1和PCV2鉴别检测试纸卡适用于猪PCV2感染快速鉴别检测。其反应试剂载体吸附层包括纤维层，金标纤维层，纤维素膜层和吸水材料层；金标纤维层为吸附胶体金标记的识别PCV1和PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体的金标玻璃棉，纤维素膜层为依次印制检测印迹T1、T2和对照印迹C的硝酸纤维素膜；检测印迹T1为识别PCV1型特异性抗原表位的单克隆抗体溶液印制的条状PCV1检测印迹；T2为识别PCV1和PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的条状PCV检测印迹，对照印迹C为抗小鼠IgG多克隆抗体溶液印制的条状对照印迹。试纸卡特异性强，敏感性高，简便快速，检测结果形象直观，在生产实践中易于推广应用。
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公开(公告)号：CN102851311A
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201210042295.X
申请日：2012-02-24
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/873 , A61D19/04 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种抗猪圆环病毒2型病转基因猪的构建方法。目前在该病的防治领域，从技术上取得的效果上收效甚微。本发明方法首先设计能有效阻止猪圆环病毒2型病增殖和复制的靶向基因shRNA；其次获得能有效阻止猪圆环病毒2型病感染的胚胎成纤维细胞克隆；然后借助核移植、胚胎移植技术和常规育种技术培育抗圆环病毒2型转基因猪；最后检测抗圆环病毒2型病转基因猪基因组中目的插入基因。本发明从遗传的角度根除猪圆环2型病毒的感染，减少养猪的疫病控制成本，减少猪圆环病毒对环境的污染，为生命科学研究提供合格的实验用猪，从根本改变疫病控制的传统策略，开启一个疫病控制研究的新时代。
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公开(公告)号：CN101139589B
公开(公告)日：2012-08-15
申请号：CN200710084568.6
申请日：2005-03-08
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP2基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI-neo构建成重组表达质粒。在Lipofectamine2000介导下转染Vero细胞，在G418的抗性下，通过极限稀释法克隆单细胞，经PCR、RT-PCR、Southern blot、Northern blot、IFA/IPMA检测，获得含目的基因的克隆化细胞系，经反复传代培养后不丢失。这些细胞系可作为研究传染性法氏囊病毒基因编码蛋白对宿主细胞基因表达调控的载体，以及将表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白应用于传染性法氏囊病的免疫接种。本发明应用基因工程技术、细胞重组技术制备表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白的永生细胞，具有重复性强、稳定性好，再生能力强等特点。
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公开(公告)号：CN102286529A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110123583.3
申请日：2011-05-13
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种家蚕丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒糖蛋白的方法。是先构建家蚕合成分泌狂犬病病毒糖蛋白RVGP的载体pBSer1RVGP-A3EGFP质粒和pBFibLRVGP-A3EGFP质粒，再利用显微注射转基因家蚕技术将这2种质粒分别与能够提供转座酶的辅助质粒一起导入到家蚕受精卵内，依靠piggyBac转座子的转座特性，使绿色荧光蛋白基因和狂犬病病毒糖蛋白基因导入到家蚕的基因组内，并得到稳定遗传和表达，从而创制家蚕中部丝腺生物反应器、后部丝腺生物反应器、以及丝腺生物反应器三种生物反应器，育成家蚕中部丝腺细胞、后部丝腺细胞或两部分丝腺细胞能够特异性合成分泌狂犬病病毒糖蛋白的转基因家蚕新品种。
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公开(公告)号：CN102242147A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201110123586.7
申请日：2011-05-13
Applicant: 浙江同点生物科技有限公司 , 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法。先构建家蚕合成分泌狂犬病病毒核蛋白RVNP的载体pBSer1RVNP-A3EGFP质粒，再利用显微注射转基因家蚕技术将这种质粒与能够提供转座酶的辅助质粒一起导入到家蚕突变品种丝胶蚕已解除滞育的受精卵内，依靠piggyBac转座子的转座特性，使绿色荧光蛋白基因和狂犬病病毒核蛋白基因导入到丝胶蚕的基因组内，并得到稳定遗传和表达，从而创制成一种能够在家蚕中部丝腺细胞特异性合成分泌狂犬病病毒核蛋白的转基因家蚕。
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