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公开(公告)号：CN101230405B
公开(公告)日：2011-06-08
申请号：CN200810081497.9
申请日：2008-02-20
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开一种检测禽类及其产品是否感染H5型或H9型禽流感病毒或新城疫病毒的方法。本发明的方法是无菌取待检禽的气管或泄殖腔拭子或血液或粪便或者死禽的器官组织，用灭菌生理盐水研磨成乳悬液，再提取其全基因组RNA，以RNA为模板，以H5A、H9A和F为靶基因的引物进行多重RT-PCR，对得到的产物进行电泳，根据电泳图谱分析被检禽是否感染有H5、H9型禽流感病毒及新城疫病毒。
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公开(公告)号：CN111793650A
公开(公告)日：2020-10-20
申请号：CN202010651532.7
申请日：2020-07-08
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12N15/866 , C12N15/62 , A61K39/295 , A61K39/135 , A61K39/23 , A61P31/14 , A61P31/20
摘要： 本发明根据计算机软件模拟结果，在猪细小病毒PPV VP2蛋白Loop2区和Loop4区后嵌入SAT2FMDV B细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYADTNHTLPPTFNFGYVTVDK)，N端嵌入两个T细胞表位(NVQEGRRKHTDVAFLLDRST)串联。根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1927OP，克隆到载体pFastBacTMDual上，转化感受态细胞DH10Bac，获得重组杆粒rBacmidN(T1)2L2B4B，转染sf9细胞收获重组杆状病毒rBacN(T1)2L2B4B，用其感染HF细胞，使用间接免疫荧光IFA针对嵌合表位和VP2蛋白进行检测，具有特异性荧光。Western-blot针对B、T细胞表位和VP2蛋白进行检测，在72KDa出现一条特异性条带。透射电镜TEM观察，重组蛋白N(T1)2L2B4B能够自我组装成病毒样颗粒。本发明旨在为南非2型口蹄疫制备储备疫苗，并能在此基础上达到同时预防南非2型口蹄疫和猪细小病的目的。
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公开(公告)号：CN111020059A
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201911309233.9
申请日：2019-12-18
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒3型的PCR检测方法，根据猪圆环病毒3型(PCV3)的保守基因区段筛选出特异性引物，建立PCR检测方法，所得目的基因扩增片段大小为457bp。建立的PCV3 PCR不与猪圆环病毒2型、1型和2型猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪乙脑病毒、古典猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒发生交叉反应，可用以了解样品采集地猪群PCV3的感染情况，经敏感性和特异性检测分析表明建立的PCV3 PCR检测方法具有良好的特异性和敏感性，可用于田间样品的常规检测。采用本发明建立的PCR方法检测了我国2017-2018年11个不同省份不同猪场的总共1402份田间样品，PCV3的阳性检出率为29.48％，具有一定临床应用价值，可用于临床PCV3的检测。
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公开(公告)号：CN110305984A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910511586.0
申请日：2019-06-13
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
摘要： 本发明公开一种非洲猪瘟病毒的可视化LAMP检测试剂盒。该试剂盒包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒以中性红染料替代了传统钙黄素，不仅使可视化直观效果更加鲜明，将反应时间缩短至45分钟，而且还实现了由试剂盒直接提供反应预混缓冲液的需求，这样进一步简化了操作程序，更加有效避免污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，能够肉眼直接直观判断，具有良好的特异性、敏感性和稳定性。
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公开(公告)号：CN106367529B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610760227.5
申请日：2016-08-30
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明提供一种快速显色一步法检测美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征的RT‑LAMP试剂盒，该试剂盒包含有6条RT‑LAMP引物。本发明的试剂盒在不延长原有1小时反应时间的条件下，实现了将荧光染料直接加入反应管的一步操作，不仅简化了操作程序，解决了含有钙黄素的预混染料对Bst DNA扩增酶的抑制而导致在反应管直接加入荧光染料不显色的根本问题，还有效避免了由于反应结束后二次开盖导致的释放产物形成气溶胶的污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，能够肉眼直接直观判断，具有良好的特异性和敏感性。
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公开(公告)号：CN109765366A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910096803.4
申请日：2019-01-31
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/535 , G01N33/58 , G01N33/68 , G01N21/78
摘要： 本发明提供了一种检测口蹄疫病毒3AB抗体的试剂盒及其检测方法，涉及酶联免疫技术领域，所述试剂盒包括酶标板和酶标二抗；所述酶标板经口蹄疫病毒3AB蛋白包被。本发明提供的试剂盒检测口蹄疫病毒3AB的抗体，具有高效、灵敏特异性和重复性均良好的优点，该方法操作简便、快速、成本低廉，可以在室温下可视化检测，适合于在临床应用中进行推广，为口蹄疫病毒3AB抗体的快速检测提供可靠的技术手段。
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公开(公告)号：CN108823246A
公开(公告)日：2018-11-16
申请号：CN201810785057.5
申请日：2018-07-17
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12N15/866 , C12N15/40 , C07K14/08
摘要： 本发明公开了一种PRRSV的双标记型病毒样颗粒(VLPs)的制备及鉴定方法，涉及生物研究技术领域，制备含有GP5、M和N蛋白编码基因ORF5、ORF6和ORF7的pMD18T重组质粒，为扩增模板，ORF5末端引入Myc标签，ORF6末端引入His标签，重组至双元载体的PpH和Pp10启动子下，获得重组质粒，转入DH10Bac大肠杆菌获得重组杆粒；ORF7与pFastBacHTB载体重组获得重组杆粒。将两种重组杆粒接种SF9细胞，Myc-GP5、His-M和His-N蛋白被成功表达，自动组装成VLPs。为研究GP5、M和N主要结构蛋白功能和开发能够区分感染和免疫的VLPs疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN107304438A
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201610259926.1
申请日：2016-04-25
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/02
CPC分类号： G01N33/48
摘要： 本发明公开了一种牛羊食道-咽部分泌物处理液及其制备方法和用途，本发明的一种牛羊食道-咽部分泌物处理液由氯化钠、Tris缓冲液、分散剂、表面活性剂以及粘液分解剂组成。其中，优选的，所述氯化钠的含量为5-19g/L，Tris缓冲液的浓度为0.02-0.1M，分散剂的含量为0.1-5g/L，表面活性剂的含量为0.3-1％(v/v)，粘液分解剂的含量为3-5g/L。其中，优选的，所述的分散剂为聚乙二醇，所述表面活性剂为tritonX-100，所述粘液分解剂为甲基半胱氨酸。本发明的一种牛羊食道-咽部分泌物处理液常温下可放置贮存，不易变质、无毒，专一、高效、对牛羊O/P液中的粘液分解迅速，对细胞则比较温和，不会因为粘液降解过程而损害细胞，提高了检测效果。
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公开(公告)号：CN107302911A
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201610259741.0
申请日：2016-04-25
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： A01N1/02
CPC分类号： A01N1/0215
摘要： 本发明公开了一种用于牛羊食道-咽部分泌物的保存液及其制备方法和用途，属于生物技术领域。本发明的一种用于牛羊食道-咽部分泌物的保存液，其pH值为6.8—7.6的磷酸盐缓冲液，稳定剂以及防腐剂组成，其中，所述的磷酸盐缓冲液中还含有氯化钠及/或氯化钾，氯化钠及/或氯化钾的浓度为0.2-10g/L，所述的稳定剂选自牛血清白蛋白，酪蛋白、马血清、甘油中的一种或多种，所述的防腐剂选自叠氮钠、盘尼西林、青霉素及氯霉素中的一种或多种。与现有技术相比，本发明采用上述原料制成保存液，无毒无刺激性气味，安全性高，保存效果好，能较长时间保存不会变质，不会影响后期O/P液检测效果。
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公开(公告)号：CN106367529A
公开(公告)日：2017-02-01
申请号：CN201610760227.5
申请日：2016-08-30
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC分类号： C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/107
摘要： 本发明提供一种快速显色一步法检测美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征的RT-LAMP试剂盒，该试剂盒包含有6条RT-LAMP引物。本发明的试剂盒在不延长原有1小时反应时间的条件下，实现了将荧光染料直接加入反应管的一步操作，不仅简化了操作程序，解决了含有钙黄素的预混染料对Bst DNA扩增酶的抑制而导致在反应管直接加入荧光染料不显色的根本问题，还有效避免了由于反应结束后二次开盖导致的释放产物形成气溶胶的污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，能够肉眼直接直观判断，具有良好的特异性和敏感性。
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