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    一种地衣芽孢杆菌CRISPR-Cas9基因编辑系统及其应用
    71.
    发明授权
    一种地衣芽孢杆菌CRISPR-Cas9基因编辑系统及其应用 有权

    公开(公告)号：CN109022476B

    公开(公告)日：2022-08-09

    申请号：CN201810774798.3

    申请日：2018-07-16

    申请人： 天津科技大学

    发明人： 路福平 ,  周翠霞 ,  张会图 ,  李玉 ,  刘逸寒

    IPC分类号： C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

    摘要： 本发明涉及基因工程领域，尤其是涉及一种应用于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)2709的CRISPR‑Cas9基因编辑系统及其应用。所述基因编辑系统是以穿梭质粒pWH1520为载体，将所有调控元件构建于该载体上并经甲基化修饰后所得，所述调控元件包括由pS启动子控制的cas9蛋白、由pLY‑2启动子控制的sgRNA转录盒子，以及上、下游同源臂修复序列HA。所述基因编辑系统应用于地衣芽孢杆菌2709工业菌株存在效率高、设计简单、成本低等优点，基因敲除效率达到90.6％。

    一种磷脂酶D及其制备磷脂酸、磷脂酰丝氨酸的方法
    73.
    发明授权
    一种磷脂酶D及其制备磷脂酸、磷脂酰丝氨酸的方法 有权

    公开(公告)号：CN110283803B

    公开(公告)日：2021-08-03

    申请号：CN201910528146.6

    申请日：2016-06-02

    申请人： 天津科技大学

    发明人： 刘逸寒 ,  路福平

    IPC分类号： C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/75 ,  C12N15/81 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P13/06 ,  C12P7/64 ,  C12P9/00 ,  C12R1/125 ,  C12R1/84

    摘要： 本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及一种磷脂酶D及其制备磷脂酸、磷脂酰丝氨酸的方法。其技术方案是利用重组DNA技术对野生型磷脂酶D基因进行定点突变，得到活力较高的磷脂酶D基因，然后将高活力磷脂酶D基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达，得到产高活力磷脂酶D的重组菌株，表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D提高38‑140％，高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统、毕赤酵母表面展示系统内发酵酶活最高值分别为36.8U/ml、48.1U/ml、140.2U/(g·细胞干重)。

    一种新型地衣芽孢杆菌宿主细胞及其遗传改造方法与应用
    75.
    发明公开
    一种新型地衣芽孢杆菌宿主细胞及其遗传改造方法与应用 有权

    公开(公告)号：CN112239743A

    公开(公告)日：2021-01-19

    申请号：CN202010858709.0

    申请日：2020-08-24

    申请人： 天津科技大学

    发明人： 路福平 ,  孙宴清 ,  周翠霞 ,  张会图 ,  李玉 ,  刘逸寒

    IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N15/56 ,  C12N15/54 ,  C12N15/52 ,  C12N9/56 ,  C12R1/10

    摘要： 本发明属于基因工程领域，具体涉及通过对地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)2709进行遗传改造获得的新型宿主细胞及其改造方法与应用。所述菌株是在地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)2709的基础上，通过敲除eps、pgs、sigF、chiAB、pulA、amyA、lchAC、upp基因，并删除9个基因组岛以实现宿主细胞的基因组精简来构建的。经过基因改造获得的宿主细胞有效改进了发酵生产性能及发酵过程控制。以AprE的生产为例，eps、pgs、sigF、chiAB、pulA、amyA、lchAC基因，和9个基因组岛敲除菌GR15对AprE的发酵液酶活力可高达32494±1013U/mL，高产酶时期长达16h，较对照菌提高了36％。

    新型抗自切碱性蛋白酶的筛选
    77.
    发明公开
    新型抗自切碱性蛋白酶的筛选 无效

    公开(公告)号：CN110819612A

    公开(公告)日：2020-02-21

    申请号：CN201910951894.5

    申请日：2019-11-29

    申请人： 天津科技大学

    发明人： 路福平 ,  王洪彬 ,  邱悦悦 ,  李雪 ,  王玉迎 ,  刘逸寒

    IPC分类号： C12N9/54 ,  C12N15/57 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

    摘要： 本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及一种新型的能够抗自切的碱性蛋白酶突变体的筛选。本发明通过对克劳氏芽孢杆菌来源的碱性蛋白酶进行改造和筛选获得了抗自切性能优异的突变体，突变体的基因在第493-495位突变为GAT，第799-801位为GAT，相应的氨基酸序列分别是在第161位突变为Thr，第183位为Asp。在40℃恒温孵育48h后，碱性蛋白酶突变体的酶活保留率比野生型碱性蛋白酶的酶活提高了40％以上。抗自切碱性蛋白酶分子的筛选，有助于改善碱性蛋白酶的储存和应用效果。

    一种磷脂酶A2及其制备2-DHA-PS的方法
    78.
    发明授权
    一种磷脂酶A2及其制备2-DHA-PS的方法 有权

    公开(公告)号：CN106834251B

    公开(公告)日：2020-02-18

    申请号：CN201611206591.3

    申请日：2016-12-23

    申请人： 天津科技大学

    发明人： 刘逸寒 ,  路福平 ,  桂爽

    IPC分类号： C12N9/18 ,  C12N15/55 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P13/06 ,  C12R1/84

    摘要： 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种磷脂酶A2突变体及其制备方法。本发明使用易错PCR技术，对野生型磷脂酶A2进行随机突变，得到磷脂酶A2突变体，比酶活较野生型磷脂酶A2的酶活提高了27％；同时采用酵母表达系统，当脂酶A2展示于酵母表面时，酵母细胞既作为酶的生产者，又可以充当固定化酶中的载体，免去了酶的纯化和固定等操作，简化了生产环节，降低了生产成本。