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公开(公告)号：CN113151233B
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202110396840.4
申请日：2021-04-13
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种本发明涉及一种腈水合酶突变体，具体涉及一种腈水合酶赖氨酸突变体HBA‑K2H2及其编码基因，含有该突变体编码基因的质粒及重组菌，以及该腈水合酶赖氨酸突变体HBA‑K2H2在催化有机腈化合物制备酰胺化合物中的应用。所述突变体HBA‑K2H2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其最适pH为9.0，最适温度为35℃。与野生酶HBA相比，突变腈水合酶HBA‑K2H2的碱性活力得到了改良，可应用于生物催化生产丙烯酰胺、烟酰胺及其它高附加值的酰胺类化合物，化工纤维表面改性和碱性污水处理等生物技术领域。
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公开(公告)号：CN111363775B
公开(公告)日：2022-08-05
申请号：CN202010191945.1
申请日：2020-03-18
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物酶法去消旋化制备L‑草铵膦的方法、草铵膦脱氢酶突变体及应用。一种生物酶法去消旋化制备L‑草铵膦的方法，以D,L‑草铵膦为原料，经多酶催化体系催化获得L‑草铵膦，所述酶催化体系包括用于将D,L‑草铵膦中的D‑草铵膦催化为2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸的D‑氨基酸氧化酶、以及用于将2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸催化还原为L‑草铵膦的草铵膦脱氢酶突变体，所述草铵膦脱氢酶突变体由野生菌Thiopseudomonas denitrificans中的草铵膦脱氢酶突变所得，突变位点为：V377S。本发明草铵膦脱氢酶突变体具有更好的催化效率，以外消旋D,L‑草铵膦为底物进行催化反应时，转化率远高于野生型酶，PPO产率也大幅提升。
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公开(公告)号：CN111909907B
公开(公告)日：2022-05-24
申请号：CN202010649552.0
申请日：2020-07-08
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种天冬氨酸氧化酶突变体、工程菌及其在氧化‑还原偶联制备精草铵膦中的应用，以D,L‑草铵膦为底物，在有氧环境及过氧化氢酶存在的情况下，利用氨基酸氧化酶突变体或含有氨基酸氧化酶突变体的细胞作为生物催化剂，进行氧化反应，获得L‑草铵膦的前体酮2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸。2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸再在草铵膦脱氢酶的作用下，催化生成L‑草铵膦，本发明方法原料转化率和收率高，产物易于分离提纯且手性纯度较高；与其他催化工艺相比，工艺相对简单，转化率高达99％。
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公开(公告)号：CN114507650A
公开(公告)日：2022-05-17
申请号：CN202210103919.8
申请日：2022-01-28
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其在合成(S)‑邻氯苯甘氨酸中的应用，所述亮氨酸脱氢酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第362位点进行定点饱和突变获得的。本发明构建的亮氨酸脱氢酶突变体EsLeuDH‑F362L的活性较野生型亮氨酸脱氢酶提高了32倍，其中突变体EsLeuDH‑F362L底物邻氯苯甲酰甲酸投料量可达到500mM，产物浓度随时间的推移而逐渐升高，4.0h内可反应完成，底物转化率大于99％，产物e.e值始终保持在99.5％以上。因此亮基酸脱氢酶突变体EsLeuDH‑F362L具有工业应用前景。
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公开(公告)号：CN114456995A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210091140.9
申请日：2022-01-26
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种高产L‑2‑氨基丁酸的基因工程菌及其构建方法，以及其在微生物发酵制备L‑2‑氨基丁酸中的应用。本发明通过对大肠杆菌的葡糖糖PTS途径相关竞争基因进行了敲除，减少磷酸烯醇式丙酮酸的消耗，过表达基因ilvA、leuDH改善主路合成途径基因的表达情况，最终获得更高产L‑2‑氨基丁酸工程菌，无需质粒引入外源酶增强关键酶酶活，添加诱导剂IPTG时5L发酵罐发酵产量可达到15.11g/L；敲除阻遏蛋白编码基因lacI后形成组成型表达，并进行培养基优化后在5L发酵罐中分批补料发酵，无需诱导剂IPTG添加时产量达到10.86g/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113215185B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202110436263.7
申请日：2021-04-22
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种用于重组表达棘白菌素B脱酰基酶的重组基因序列。本发明对实验室以获得的棘白菌素B脱酰基酶进行了克隆，并首次在大肠杆菌中成功的活性表达了重组棘白菌素B脱酰基酶。以往的多亚基单链结构蛋白在大肠杆菌中很难成熟，在我们的发明中采用将亚基拆分后共表达的方法，成功实现了在大肠杆菌中的活性表达。由于这是研究中首次将棘白菌素B脱酰基酶于大肠杆菌中表达，为其他的多亚基类似蛋白酶提供了一种新的异源表达思路，同时也为了后续的工业化生产奠定了一定基础。
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公开(公告)号：CN112852790B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202110054609.7
申请日：2018-07-12
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本分案申请公开了一种十字花科植物腈水解酶嵌合酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明将高山南芥腈水解酶氨基酸序列的225‑285位肽段嵌入到缺失对应肽段的芜菁腈水解酶中，获得芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体BaNIT，进而对嵌合体BaNIT的编码基因进行定点饱和突变，使得嵌合体氨基酸序列的第223位的L突变为Q，获得植物腈水解酶嵌合酶突变体BaNIT‑L223Q。本发明提供的植物腈水解酶嵌合酶突变体的催化活力提高1.31倍，重组蛋白的可溶性提高，对映体选择率E值保持在400以上，在高效催化外消旋异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112126662B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202011014094.X
申请日：2020-09-24
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种发酵生产D‑泛酸的方法，在发酵培养时将保藏号为CCTCC NO：M2018914的大肠杆菌接种到发酵培养基中发酵培养生产D‑泛酸，当发酵至13h时，往发酵罐中流加补料培养基，控制发酵液中葡萄糖的浓度为0.5‑2g/L，当发酵至29h时，控制发酵液中葡萄糖的浓度为4‑6g/L，直至发酵结束；开始流加补料培养基后，同时往发酵罐中流加异亮氨酸水溶液，所述异亮氨酸水溶液的浓度为30‑60g/L，直至发酵结束添加的异亮氨酸的总量为30‑50g。本发明方法有效地提高了产D‑泛酸的浓度，并且提高了糖酸转化率、降低了抑制性副产物乙酸的产生。
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公开(公告)号：CN111676163B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202010561573.7
申请日：2020-06-18
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种餐厨垃圾高温生物降解用的微生物菌剂与应用。所述微生物菌剂包括：保藏号为CCTCC NO：M 2019263的克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)ZJB‑091、保藏号为CCTCC NO：M 2020014的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ZJB19163、保藏号为CCTCC NO：M 2020015的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringlensis)ZJB19165、保藏号为CCTCC NO：M 2020016的副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)ZJB19166。本发明提供的微生物菌剂不仅能够加速餐厨垃圾的生物降解，还能够消除异味，实现餐厨垃圾的无害化、减量化处理。各微生物菌种之间协同作用，在好氧条件下将餐厨垃圾中大分子的有机物快速降解为小分子物质，产生大量有机质和微量元素，实现废物资源化的转变。
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公开(公告)号：CN111575210B
公开(公告)日：2022-04-26
申请号：CN202010454857.6
申请日：2020-05-26
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌ZJB19161及其在混凝土裂缝修复中的应用，属于微生物技术领域。所述解淀粉芽孢杆菌ZJB19161于2020年1月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2020044。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌ZJB19161从浙江工业大学朝晖校区古运河边的土样中分离获得，其代谢产物可与环境中的钙离子高效结合形成方解石，可有效修复混凝土微裂缝。此外，该菌株具有很好的热稳定性和酸碱稳定性，作为混凝土裂缝修复应用时可以适应不同酸碱度环境。该菌株具有作为生物修复制剂进行混凝土裂缝自修复的潜力和应用前景。
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