一种构建和生产限制性内切酶Ecop15I的方法

    公开(公告)号:CN101538579B

    公开(公告)日:2013-12-04

    申请号:CN200810019839.4

    申请日:2008-03-19

    摘要: 本发明提供了一种构建和生产重组III型限制性内切酶Ecop15I的方法。III型限制性内切酶Ecop15I在基因表达系列分析具有重要作用,而传统方法难以实现大规模的表达和纯化。本发明利用基因重组的方法,人工合成融合有纯化标签的Ecop15I的2个亚基片段,分别克隆到原核共表达载体pACYCDuet-1的两个独立表达单元中。在IPTG诱导下,具有独立的T7启动子、核糖体结合位点、起始密码子和终止密码子表达单元在大肠杆菌中,同时独立表达酶的2个亚基,并折叠成具有生物学活性的复合结构。再通过Ni亲和层析和DEAE离子交换层析的方法进行纯化。最终得到了产量较高,活力和稳定性较好的重组型Ecop15I内切酶,从而为大规模生产提供了有效的途径。

    一种干扰核酸分子及应用

    公开(公告)号:CN102174520B

    公开(公告)日:2013-01-02

    申请号:CN201110056949.X

    申请日:2011-03-10

    发明人: 朱远源 李铁军

    摘要: 本发明涉及一种核酸分子及其应用,尤其是指干扰核酸分子及其应用。所述的干扰核酸分子,其特征在于,由正义链和反义链退火形成,每条链的长度至少为30个核苷酸,其正义链或反义链中的至少两个部分分别靶向不同基因的RNA或同一基因RNA的不同位点,该核酸分子进入细胞后不会引起干扰素效应。该核酸分子能干扰转录后翻译过程,从而抑制或阻断基因表达,且该干扰核酸分子不引起干扰素反应。所述的核酸分子是制备调节细胞中一种或多种基因功能的药物中的活性成份。

    多靶位干扰RNA分子及其应用

    公开(公告)号:CN102199603A

    公开(公告)日:2011-09-28

    申请号:CN201110056947.0

    申请日:2011-03-10

    发明人: 李铁军 朱远源

    摘要: 本发明涉及一种RNA分子及其应用,尤其是指一种多靶位干扰RNA分子及其应用。所述的多靶位干扰RNA分子,其特征在于,由正义链和反义链退火形成双链,每条链的长度至少为30个核苷酸,其正义链或反义链的至少两个部分分别靶向不同基因的RNA或同一基因RNA的不同位点,该RNA分子进入细胞后不会引起干扰素效应。该RNA分子能干扰转录后翻译过程,从而抑制或阻断基因的表达,且该干扰RNA分子不会引发体内的干扰素反应。所述的RNA分子是制备调节细胞中一种或多种基因功能的药物中的活性成份。