公开(公告)号：CN104744594B

公开(公告)日：2018-09-18

申请号：CN201510190266.1

申请日：2015-04-21

申请人： 中国人民解放军第三军医大学

发明人： 刘东 ,  刘威 ,  吴玉章

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K39/29 ,  A61K47/42 ,  A61P31/20

摘要： 本发明公开了一种乙肝病毒多表位与志贺毒素的融合蛋白，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因序列如SEQ ID No.2所示；该融合蛋白携带有三种乙肝病毒抗原的四个超型表位，分别为HBsAg281‑290、HBcAg98‑107、Pol321‑330和Pol661‑670，还携带有Th表位Padre和志贺毒素，融合蛋白可用于制备乙肝治疗性疫苗，具有靶向性强、适应人群广等优点。

公开(公告)号：CN105462988A

公开(公告)日：2016-04-06

申请号：CN201610046087.5

申请日：2016-01-22

申请人： 中国人民解放军第三军医大学第三附属医院

发明人： 张庆华 ,  刘威 ,  谢秋波 ,  常秋霜

IPC分类号： C12N15/20 ,  C12N15/70 ,  C07K14/555 ,  C07K16/24

CPC分类号： C07K14/555 ,  C07K16/249

摘要： 本发明涉及一种可溶性IFN-ε蛋白的制备方法。该方法包括PCR扩增、酶切和连接、表达IFN-ε蛋白和蛋白纯化步骤。本发明解决了在体外大量表达IFN-ε蛋白时不能获得可溶性、具备天然活性的IFN-ε蛋白的难题，成功得到可溶性的IFN-ε蛋白，并制备成多克隆抗体，为深入研究IFN-ε的生物学特性及其与阴道炎、宫颈癌等常见疾病的发病关系提供理论基础及实验保障。

公开(公告)号：CN103819563B

公开(公告)日：2016-03-23

申请号：CN201310754485.9

申请日：2013-12-31

申请人： 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院

发明人： 何畏 ,  陈惠玲 ,  刘威 ,  刘东 ,  马博 ,  温彦

IPC分类号： C07K19/00 ,  C07K1/22 ,  C07K1/16 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12P21/06

摘要： 本发明涉及“融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法”，属于生物技术领域。本发明构建了一个表达载体，在MBP与目标蛋白之间设置有凝血酶酶切位点He-Glu-Gly-Arg，使得蛋白Eppin以MBP融合蛋白MBP-Eppin的方式在胞内高效表达，可以大大提高表达产物的产量与可溶性。而又可以有效从MBP融合蛋白中释放出来。通过大量的实验，摸索得到最佳条件，从而使Eppin蛋白以高效、可溶的方式在大肠杆菌中表达。同时显示诱导后纯化的融合蛋白和酶切后的Eppin蛋白均有出现明显的免疫印迹条带。由此可见，重组Eppin蛋白具有良好的抗原性。

公开(公告)号：CN104774822A

公开(公告)日：2015-07-15

申请号：CN201510170311.7

申请日：2015-04-10

申请人： 中国人民解放军第三军医大学

发明人： 刘东 ,  刘威 ,  吴玉章

IPC分类号： C12N9/52 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12N9/52

摘要： 本发明公开了幽门螺旋杆菌丝氨酸蛋白酶的制备方法，具体是以SEQ ID No.3和SEQ ID No.4扩增SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，然后将扩增产物经酶切后连入经同样酶切的pMAL-C质粒中，获得重组表达载体pMAL-C-SP，然后将重组表达载体pMAL-C-SP于大肠杆菌中诱导表达并用Ni2+亲和层析柱和强阴离子交换柱纯化，最后过SephadexG200分子筛，得幽门螺旋杆菌丝氨酸蛋白酶，利用该方法获得的幽门螺旋杆菌丝氨酸蛋白酶量大，损失小，具有丝氨酸蛋白酶活性，为研究该蛋白的晶体结构和功能奠定了坚实的基础，同时能作为一种前景广阔的胰酶替代物及药物研发的靶点。

公开(公告)号：CN104744594A

公开(公告)日：2015-07-01

申请号：CN201510190266.1

申请日：2015-04-21

申请人： 中国人民解放军第三军医大学

发明人： 刘东 ,  刘威 ,  吴玉章

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K39/29 ,  A61K47/48 ,  A61P31/20

摘要： 本发明公开了一种乙肝病毒多表位与志贺毒素的融合蛋白，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因序列如SEQ ID No.2所示；该融合蛋白携带有三种乙肝病毒抗原的四个超型表位，分别为HBsAg281-290、HBcAg98-107、Pol321-330和Pol661-670，还携带有Th表位Padre和志贺毒素，融合蛋白可用于制备乙肝治疗性疫苗，具有靶向性强、适应人群广等优点。

公开(公告)号：CN103819563A

公开(公告)日：2014-05-28

申请号：CN201310754485.9

申请日：2013-12-31

申请人： 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院

发明人： 何畏 ,  陈惠玲 ,  刘威 ,  刘东 ,  马博 ,  温彦

IPC分类号： C07K19/00 ,  C07K1/22 ,  C07K1/16 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12P21/06

摘要： 本发明涉及“融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法”，属于生物技术领域。本发明构建了一个表达载体，在MBP与目标蛋白之间设置有凝血酶酶切位点He-Glu-Gly-Arg，使得蛋白Eppin以MBP融合蛋白MBP-Eppin的方式在胞内高效表达，可以大大提高表达产物的产量与可溶性。而又可以有效从MBP融合蛋白中释放出来。通过大量的实验，摸索得到最佳条件，从而使Eppin蛋白以高效、可溶的方式在大肠杆菌中表达。同时显示诱导后纯化的融合蛋白和酶切后的Eppin蛋白均有出现明显的免疫印迹条带。由此可见，重组Eppin蛋白具有良好的抗原性。