一种1型牛病毒性腹泻病毒样颗粒及其制备与应用

    公开(公告)号:CN108456663A

    公开(公告)日:2018-08-28

    申请号:CN201810254144.8

    申请日:2018-03-26

    Abstract: 本发明公开一种1型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)病毒样颗粒及其制备方法和用途。通过将BVDV-1的结构蛋白C、Erns、E1、E2编码基因克隆至pFastBacDual构建pFBD-BVDV-1重组杆状病毒转移载体,在大肠杆菌DH10Bac中转座获得重组杆状病毒载体Bac-BVDV-1,转染昆虫细胞,获得重组杆状病毒Baculo-BVDV-1,感染昆虫细胞表达BVDV-1的结构蛋白C、Erns、E1、E2,在细胞内自动组装为BVDV-1病毒样颗粒(VLP)。本发明获得的病毒样颗粒更接近天然BVDV病毒粒子的形态结构,接种动物后可刺激机体产生较好的免疫反应,可达到更好的免疫效果。所获的病毒样颗粒可利用蔗糖密度梯度离心直接纯化,与其它表达系统相比,避免了病毒结构蛋白分别纯化然后在细胞外组装的繁琐过程,有利于提高效率和节约成本,而且在生产过程中不用感染性的BVDV活病毒,提高了安全性。

    牛A型口蹄疫广谱多表位疫苗及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN104119441A

    公开(公告)日:2014-10-29

    申请号:CN201310144390.5

    申请日:2013-04-24

    Abstract: 本发明公开了一种牛A型口蹄疫广谱多表位重组疫苗及其制备方法和应用,属于兽用疫苗研究领域。本研究采用全新的反向疫苗学研究理念和策略,将国内流行毒株与我国接壤国家最近流行的牛A型口蹄疫病毒代表毒株的主要抗原表位进行合理的串联后,与牛IgG重链恒定区偶联,克隆入原核表达载体构建重组表达载体,转化大肠杆菌感受态细胞表达重组抗原并采用Ni-NAT层析柱纯化后,经Bio-Rad蛋白定量试剂盒定量后单独或与重组口蹄疫病毒3D蛋白配伍制备疫苗,动物免疫试验结果显示,无论是多表位抗原单独还是与3D蛋白配伍均能够刺激机体产生高效价的保护性抗体,同时能够保护免疫动物抵抗同源病毒的攻击,因而本发明具有良好的应用前景。

    一种基于位点特异性重组的RNA干扰载体及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN103060374A

    公开(公告)日:2013-04-24

    申请号:CN201210424785.6

    申请日:2012-10-30

    Abstract: 本发明公开了一种基于位点特异性重组的RNA干扰载体及其构建方法和应用,属于生物技术领域。本发明所述的干扰载体依次包括以下相连的各部分:与猪的整合素受体β3基因的某单一内含子区域上游进行同源重组的同源重组臂1、人U6启动子序列、多克隆酶切位点、人U6终止子序列、含有PCMV启动子的新霉素抗性基因、与猪的整合素受体β3基因的某单一内含子区域下游进行同源重组的同源重组臂2、复制起始位点基因、氨苄青霉素抗性筛选基因以及用于载体线性化的酶切位点。本发明的干扰载体实现了对猪源细胞基因组的精确打靶,并为筛选提供了方便,同时还可预期插入片段后对基因表达的影响,对后续实验提供了方便。

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