一种DNA病毒基因组的定点改造方法

    公开(公告)号:CN103397018B

    公开(公告)日:2015-04-22

    申请号:CN201310364133.2

    申请日:2013-08-20

    IPC分类号: C12N15/09 C12N15/33

    摘要: 本发明提供了一种DNA病毒基因组的定点改造方法,解决了现有技术诱导DNA病毒基因组定点突变困难,插入外源片段操作复杂,重组率较低的问题。将携带有核酸酶系统的质粒转染细胞后,再感染病毒,待细胞出现病变后,收集病变细胞,经冻融或超声处理后再离心,将上清液分离即得到子代病毒。本发明能够实现在筛选病毒减毒疫苗株、构建病毒性基因载体和溶瘤病毒、研究病毒功能序列等的应用,在病毒基因组进行改造过程中,提高诱变效率,精确控制DNA病毒进行基因组定点突变和特定基因敲除,简化外源基因插入DNA病毒载体的操作步骤,提高外源基因整合进入病毒基因组的效率,从而便于进行高通量的重组病毒筛选工作。

    一种人用腮腺炎病毒组份疫苗及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN1843507B

    公开(公告)日:2010-04-21

    申请号:CN200610010684.9

    申请日:2006-02-14

    IPC分类号: A61K39/155 A61P31/14

    摘要: 本发明公开了一种人用腮腺炎病毒组份疫苗及其制备方法和应用。该疫苗采用常规方法从感染腮腺炎病毒的人体内分离到一株腮腺炎病毒;该病毒经适应于Vero细胞培养后,可在该细胞内稳定生长,并达到105.0CCID50/ml产量,血凝滴度可达1∶8,病变周期为5~6天;然后制备单层静止或旋转Vero细胞培养物;经病毒的灭活与裂解及纯化分离,据其分子量大小,可判定为HN和NP两个抗原成分;该抗原组份在测定蛋白质含量后作为半成品疫苗;根据半成品疫苗蛋白浓度,以生理盐水稀释至100μl/ml,同时配制10.87mg/ml浓度的Al(OH)3,二者以对倍(V/V)混合,制成所需的腮腺炎病毒组份疫苗。该疫苗有效性高、安全性好。本发明的制备方法可用于制备数种副粘病毒的组份疫苗。

    F基因型腮腺炎减毒毒种及其用途

    公开(公告)号:CN101215552A

    公开(公告)日:2008-07-09

    申请号:CN200810058034.0

    申请日:2008-01-16

    摘要: 本发明公开了一种F基因型腮腺炎减毒毒种及其用途。本发明收集腮腺炎流行地区的患儿咽漱液,利用常规的病毒分离培养方法,采用Vero细胞从腮腺炎患儿咽漱液标本中分离腮腺炎病毒,经常规RT-PCR方法全基因测序后,明确其为当前流行基因型——F基因型之后,将该分离毒种按常规方法适应于人二倍体细胞(KMB17株)并进行蚀斑克隆及减毒传代,得到F基因型腮腺炎减毒毒种——SP-A株。并按国家及WHO相关规程要求对其进行了全面的检定,明确SP-A株具备普通腮腺炎减毒毒种的安全性,并且具有优于普通腮腺炎减毒毒种的免疫效力。适宜作为腮腺炎减毒疫苗研究开发。