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公开(公告)号：CN106701719B
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201710029003.1
申请日：2017-01-16
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明公开了一种利用纳豆芽孢杆菌发酵联产维生素K2和纳豆激酶的方法，包括以下步骤：菌种活化：将纳豆芽孢杆菌划线至平板培养基中培养，再取单菌落在试管培养基，进行培养；制备种子：将试管中纳豆芽孢杆菌接种到种子培养基中培养；纳豆激酶、维生素K2的生产：配置联产发酵培养基，待配置联产发酵培养基冷却后，取制备的种子液，接种，于最佳联产培养条件下进行纳豆激酶和维生素K2的生产；纳豆激酶、维生素K2的分离和提取：将发酵液离心后，上清与沉淀分离，向上清中添加无机高分子絮凝剂，并选用壳聚糖作为助凝剂，将上清中维生素K2和纳豆激酶分离。本发明具有提高了原料的利用率且适合于工业生产的优点。
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公开(公告)号：CN106631748B
公开(公告)日：2019-11-05
申请号：CN201611169315.4
申请日：2016-12-16
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明公开了一种分离纯化纳豆芽孢杆菌中维生素K2的方法，包括以下步骤：维生素K2萃取液的获取，维生素K2上柱原液的获取，低纯度的维生素K2浓缩液的获取，较高纯度的维生素K2浓缩液的获取，高纯度的维生素K2的获取，维生素K2晶体的获取。本发明的优点在于：(1)获得的维生素K2晶体产品纯度高、生物活性高、回收率高；(2)分离纯化工艺操作简单、条件温和、处理能力大；(3)各有机溶剂可回收利用，便于工业化应用。
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公开(公告)号：CN109824496A
公开(公告)日：2019-05-31
申请号：CN201910183305.3
申请日：2019-03-12
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 一种从破壁纳豆芽孢杆菌菌体中提取纯化维生素K2的方法，将发酵之后的微生物用超滤和离心进行固液分离，得到湿菌体，用离子束处理湿菌体进行破壁之后，用无水乙醇进行提取，不仅会获得大量的维生素K2，也提取出较少的油脂，在提取过程中进行了粗纯化，为后面一步式高效率纯化提供了很好的溶液。将提取物通过柱萃取，采用极性不同的有机试剂进行萃取纯化，将不同极性的杂质萃取出来，从而使溶液的纯度得到很大提高。之后将其冷冻结晶能得到纯度为95%的维生素K2晶体。本方法省去了传统方法中的干燥和菌体粉碎的过程，提高了提取效率与提取的纯度。并通过一步式纯化就获得纯度较高的维生素K2。
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公开(公告)号：CN109722457B
公开(公告)日：2022-05-31
申请号：CN201910183792.3
申请日：2019-03-12
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明中公开了一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，属于微生物发酵技术领域。所述方法步骤如下：（1）将活化后的黄杆菌种接种于种子培养基中，经种子培养，制得种子液；（2）将步骤（1）制得的种子液转接于发酵培养基中，在其生长周期中加入磁场辅助处理促进发酵，得到磁场处理后的发酵产物；（3）对磁场辅助处理条件下的发酵培养基进行优化，可使黄杆菌的发酵产物维生素K2的产量提高了30‑60%，该方法步骤简单，易于操作。
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公开(公告)号：CN109824496B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201910183305.3
申请日：2019-03-12
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 一种从破壁纳豆芽孢杆菌菌体中提取纯化维生素K2的方法，将发酵之后的微生物用超滤和离心进行固液分离，得到湿菌体，用离子束处理湿菌体进行破壁之后，用无水乙醇进行提取，不仅会获得大量的维生素K2，也提取出较少的油脂，在提取过程中进行了粗纯化，为后面一步式高效率纯化提供了很好的溶液。将提取物通过柱萃取，采用极性不同的有机试剂进行萃取纯化，将不同极性的杂质萃取出来，从而使溶液的纯度得到很大提高。之后将其冷冻结晶能得到纯度为95%的维生素K2晶体。本方法省去了传统方法中的干燥和菌体粉碎的过程，提高了提取效率与提取的纯度。并通过一步式纯化就获得纯度较高的维生素K2。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105154484A
公开(公告)日：2015-12-16
申请号：CN201510734733.2
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明涉及一种利用添加诱导物质提高黄杆菌合成维生素K2产量的方法，具体包括：黄杆菌菌株活化、黄杆菌种子培养、黄杆菌发酵培养、离心发酵液、冷冻干燥、甲醇处理等步骤，通过向发酵培养基中添加前体物质1,4-二羟基-2-萘甲酸、前体类似物VK3或异戊烯醇(YWXC)作为诱导物质，促进MK的生物合成，将获得的抽提液进行检测。结果表明，与对照组相比，添加诱导物质的黄杆菌合成维生素K2的产量显著提高，维生素K2产量对菌体干重比也得到了较大幅度提高。该方法操作简单、可控性强、结果稳定，且安全环保。此外，利用添加诱导物质大大提高了黄杆菌合成MK的产量，为工业化大规模生产维生素MK提供新的思路和方式。
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公开(公告)号：CN109762834A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910184903.2
申请日：2019-03-12
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明公开了一种获取芳香族异戊烯基转移酶的发酵和一步纯化方法。通过质粒构建以及融合标签的使用，能够在细胞的胞液中的到大量的可溶性异戊烯基转移酶NovQ，之后经过一步纯化可以得到高活性的蛋白，提高了蛋白获取的效率。利用融合标签与NovQ蛋白共表达可以在不破坏酶结果的前提下得到纯度较高的酶蛋白。本发明相较于其他异戊烯基转移酶获取方法而言，有产量高，酶的提取和纯化方法简单等优势，在萜类的体外和体内生产过程中有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN105861582B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201610392463.6
申请日：2016-05-31
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
IPC: C12P7/66
Abstract: 本发明公开一种NovQ芳香族异戊烯基转移酶催化合成维生素K2的方法，(1)维生素K3溶解于乙醇水溶液中，加入NaBH4，在N2保护下，控制温度不超过50℃，搅拌反应至体系呈淡绿色透明液体，中和至pH4.0后，用乙酸乙酯萃取产物，浓缩后冷冻结晶，过滤除清液得到维生素K3氢醌；(2)将维生素K3氢醌和DMAPP加入酶促反应体系中，反应在密闭和N2保护条件下进行，反应完成后，加入Fe3+，去除N2保护，充分氧化后，使用乙酸乙酯萃取得到产物。本发明核心环节为生物酶催化工程技术，利用廉价的维生素K3催化合成高值的维生素K2。本发明生产工艺简单，生产成本低廉，生产过程绿色环保。
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公开(公告)号：CN105541585A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610080583.2
申请日：2016-02-03
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明公开一种提取微生物湿菌体胞内维生素K2粗品的方法，包括以下步骤：(1)将发酵液经膜浓缩后离心，得湿菌体；(2)向湿菌体中加入脱水性有机溶剂，搅拌均匀后，进行预处理，离心，吸取上清液，得第一次萃取液；(3)向第一次萃取后的湿菌体中加入有机萃取剂，静置，离心，吸取上清液，得第二次萃取液；(4)重复步骤(3)，合并三次萃取液，干燥后，得产物。本发明具有无需干燥设备、节约成本、时间和能源；萃取条件温和，避免了产物的降解和生物活性的丧失；萃取时间短、步骤简单、得率高，提高了生产效率，萃取剂可以回收利用；单一萃取剂即可满足要求，便于后续产品的分离纯化；萃取处理能力大，便于工业化应用的优点。
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公开(公告)号：CN104673849A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510137112.6
申请日：2015-03-26
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
CPC classification number: C12P7/66
Abstract: 本发明公开了一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺,在发酵培养液中接入二级种子培养液，同时向发酵液中添加一定浓度的表面活性剂，促使维生素K2从胞内渗漏到胞外，解除胞内代谢产物的抑制作用。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明的一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺使维生素K2的发酵单位提高了200-260％，为维生素K2的大规模工业化发酵提供一种可行的发酵策略。
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