公开(公告)号：CN109251896A

公开(公告)日：2019-01-22

申请号：CN201810918278.5

申请日：2018-08-13

申请人： 中山大学

发明人： 刘峰 ,  松阳洲 ,  李克成 ,  李影影 ,  孙宏伟 ,  吴苏

IPC分类号： C12N5/10 ,  C07K19/00 ,  A61K38/17 ,  A61P39/06 ,  C12P21/02

摘要： 本发明公开了一株高表达hKLs-his蛋白的细胞株CHO-hKLs-his-12#及其制备方法和应用。所述细胞株于2018年6月4日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：C2018116。本发明通过将人源klotho基因CDS序列与His标签序列连接后插入到真核表达载体的多克隆酶切位点处，构建含有klotho基因的重组质粒，并将重组质粒线性化后转染CHO细胞，经药物筛选后得到具有抗生素抗性的阳性细胞克隆即得。意外获得了表达量突出的细胞株CHO-hKLs-his-12#，其蛋白表达含量在上清中能达到1μg/mL以上，且有很好的稳定性和可靠性，具有较好的市场前景。

公开(公告)号：CN109136272A

公开(公告)日：2019-01-04

申请号：CN201710491304.6

申请日：2017-06-15

申请人： 中山大学

发明人： 黄军就 ,  松阳洲 ,  梁普平 ,  孙宏伟 ,  张曦亚 ,  孙英 ,  丁晨晖 ,  徐艳文 ,  周灿权

IPC分类号： C12N15/90 ,  C12N9/22

CPC分类号： C12N15/907 ,  C12N9/22

摘要： 本发明提供了一种用于在人生殖系内特异性修复人HBB基因突变的方法，包括：递送用于特异性修复人HBB基因突变的碱基编辑系统，使所述的碱基编辑系统与人HBB突变基因相关的序列接近，获得经过修复的人HBB基因，其中，所述的碱基编辑系统包含碱基编辑酶和gRNA，所述碱基编辑酶为融合蛋白，所述融合蛋白包括CRISPR/Cas系统的效应蛋白结构域、胞嘧啶脱氨酶结构域以及尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂结构域。将该基因编辑系统导入到人的生殖细胞、人的受精卵或人的胚胎中，可以对A＞G致病突变进行精确的修复，从而治愈β地中海贫血疾病，该技术在基因治疗领域，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN108823202A

公开(公告)日：2018-11-16

申请号：CN201710491367.1

申请日：2017-06-15

申请人： 中山大学

发明人： 黄军就 ,  松阳洲 ,  梁普平 ,  孙宏伟 ,  张曦亚 ,  孙英

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10

CPC分类号： A61K48/00 ,  A61P7/00 ,  C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N15/90 ,  C07K14/4717 ,  C12N15/907 ,  C12N2310/10

摘要： 本发明属于基因治疗领域，更具体地说，涉及采用碱基编辑系统修复导致人β地中海贫血的A＞G致病突变的方法。本发明提供了碱基编辑系统特异性地修复以上突变的方法，以及特异性靶向以上突变的gRNA及碱基编辑蛋白。利用本发明的方法可以精确地修复人的HBB：c.-79A＞G和HBB：c.-78A＞G致病突变。该方法效率高、特异性好。将该基因编辑系统导入到人的体细胞或个体中，可以对A＞G致病突变进行精确的修复，从而治愈β地中海贫血疾病，该技术在基因治疗领域，具有广泛的应用前景。