公开(公告)号：CN118374435A

公开(公告)日：2024-07-23

申请号：CN202410643505.3

申请日：2024-05-23

Applicant: 北京三元食品股份有限公司 ,  内蒙古大学

Inventor： 陈历俊 ,  杨磊 ,  袁宏敏 ,  李光鹏 ,  张珍珍 ,  白春玲 ,  赵军英 ,  苏广华 ,  乔为仓

IPC: C12N5/074

Abstract: 本发明公开了一种牛乳源的干细胞及其分离培养方法。其中的分离培养方法包括以下步骤（1）取新鲜牛乳，分离获得牛乳中的细胞；（2）将培养皿提前用基质胶包被，后弃液，然后用清洗液清洗，弃液；（3）将步骤（1）处理的细胞接种于包被好的培养皿上，用干细胞培养基培养；（4）当细胞融合至80%以上时，用消化酶消化，终止消化，分离细胞，用CTFR培养液重悬后接种于饲养层细胞上培养，促进克隆形成，传代培养获得牛乳干细胞。本发明首次从牛乳中分离、培养得到干细胞，可以更好的维持牛乳干细胞未分化状态，得到的干细胞具有OCT4、SOX2、NANOG、SSEA4标志物。为进行牛细胞诱导分化提供一种新的干细胞类型。

公开(公告)号：CN118374435B

公开(公告)日：2024-09-17

申请号：CN202410643505.3

申请日：2024-05-23

Applicant: 北京三元食品股份有限公司 ,  内蒙古大学

Inventor： 陈历俊 ,  杨磊 ,  袁宏敏 ,  李光鹏 ,  张珍珍 ,  白春玲 ,  赵军英 ,  苏广华 ,  乔为仓

IPC: C12N5/074

Abstract: 本发明公开了一种牛乳源的干细胞及其分离培养方法。其中的分离培养方法包括以下步骤（1）取新鲜牛乳，分离获得牛乳中的细胞；（2）将培养皿提前用基质胶包被，后弃液，然后用清洗液清洗，弃液；（3）将步骤（1）处理的细胞接种于包被好的培养皿上，用干细胞培养基培养；（4）当细胞融合至80%以上时，用消化酶消化，终止消化，分离细胞，用CTFR培养液重悬后接种于饲养层细胞上培养，促进克隆形成，传代培养获得牛乳干细胞。本发明首次从牛乳中分离、培养得到干细胞，可以更好的维持牛乳干细胞未分化状态，得到的干细胞具有OCT4、SOX2、NANOG、SSEA4标志物。为进行牛细胞诱导分化提供一种新的干细胞类型。

公开(公告)号：CN118995581A

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202411498411.8

申请日：2024-10-25

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  狄安琪 ,  李光鹏 ,  宋丽爽 ,  刘雪霏 ,  白春玲 ,  苏广华

IPC: C12N5/0735 ,  C12N5/075

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种牛孤雌单倍体干细胞及其获取方法与培养液。对成熟的牛卵母细胞进行孤雌激活得到孤雌胚胎，将孤雌胚胎在体外培养液中培养至囊胚，将孤雌囊胚放入培养液中培养，获得牛孤雌单倍体干细胞；其中培养液通过以下方法获得：向每500 mL mTeSR1基础培养液中添加10‑20 ng/mL FGF2，1.5‑2.5μM Activin A，3‑5μM CHIR99021，1.5‑3μM XAV939。本发明提供了一种牛孤雌单倍体干细胞培养液，获得了牛孤雌单倍体干细胞，其基因组来源于卵母细胞，具有自我复制能力与多能性，还可应用于纺锤体复合物置换，解决屠宰场来源的卵母细胞遗传信息不明确的问题，获得遗传信息明确的重构卵母细胞，为牛的生物育种提供新途径。

公开(公告)号：CN118165919B

公开(公告)日：2024-07-23

申请号：CN202410592180.0

申请日：2024-05-14

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  王德政 ,  李光鹏 ,  狄安琪 ,  宋丽爽 ,  白春玲 ,  刘雪霏

IPC: C12N5/076 ,  C12Q1/6881 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供一种小分子化合物介导的牛性控精子分选液及其应用，包括精子分选保护液和性控功能成分，所述精子分选保护液为：氯化钠、氯化钾、二水氯化钙、磷酸二氢钠、葡萄糖、丙酮酸钠、碳酸氢钠、青链霉素、酚红；所述性控功能成分为：肌酸、24e药物；所述肌酸的浓度为450 uM‑550 uM；所述24e药物的浓度为0.27 uM‑0.33 uM；所述24e药物为吡啶[3，2‑d]嘧啶类TLR7&8双激动剂；本发明能够满足生产中对性控精液的大量需求，而且分选过程是在精子所适宜条件下进行的且不需要对精子进行复杂的处理，分选花费时间少，对精子产生伤害小。

公开(公告)号：CN118028494B

公开(公告)日：2024-07-02

申请号：CN202410445533.4

申请日：2024-04-15

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  李光鹏 ,  裴栋超 ,  海超 ,  白春玲 ,  刘雪霏 ,  苏广华 ,  宋丽爽

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6869 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于基因检测技术领域，具体而言，涉及一种基于二代测序鉴定高产肉牛的引物组、方法和应用；所述引物组包含SEQ ID No.1到SEQ ID No.34的34条引物。所述方法，包括如下步骤：S1：牛血液样品中基因组DNA的提取；S2：根据MSTN基因外显子碱基序列，设计用于三轮PCR扩增的引物；S3：建立三轮PCR扩增体系和扩增程序；S4：纯化PCR扩增产物并混样进行二代测序；S5：利用DAVID软件进行数据分析。本发明创造基于二代测序检测方法鉴定高产肉牛，可同时检测多个样品，降低了测序成本，提高了测序效率。实现了高效快速批量鉴定，具有较强的实用性，可广泛应用于牛基因型鉴定和种群划分，在分子遗传育种领域内也是一次很好的应用。

公开(公告)号：CN113736728B

公开(公告)日：2024-03-08

申请号：CN202110962301.2

申请日：2021-08-20

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  李光鹏 ,  宋丽爽 ,  刘雪霏 ,  苏广华 ,  白春玲

IPC: C12N5/073 ,  C12N15/877 ,  A01K67/0273

公开(公告)号：CN116286905A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310524020.8

申请日：2023-05-11

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  郝振廷 ,  白春玲 ,  刘雪霏 ,  苏广华 ,  李光鹏

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明公开了一种牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统、方法及应用。一种牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统，包括boCas9蛋白和sgRNA；编码所述boCas9蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明根据牛细胞的密码子偏好性对外源Cas9基因进行优化，可以显著提高牛细胞中Cas9基因的转录和翻译效率，最终增加细胞中Cas9蛋白质的含量。结果显示：改造后的牛源化boCas9蛋白质表达量是野生型对照组Cas9的2倍，靶基因切割效率是野生型对照组的至少6倍。本发明方法能够有效提高CRISPR/boCas9基因编辑系统在牛细胞中的切割效率。

公开(公告)号：CN119120577A

公开(公告)日：2024-12-13

申请号：CN202411620324.5

申请日：2024-11-14

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  狄安琪 ,  李光鹏 ,  宋丽爽 ,  刘雪霏 ,  白春玲 ,  苏广华

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/877 ,  C12N15/12 ,  A01K67/0273 ,  A01K67/0278

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种擦除羊iCHI胚胎表观修饰异常的方法及其应用。本发明提供方法包括以下步骤：将表达鱼精蛋白的重组质粒转入羊孤雄单倍体干细胞中后导入成熟的羊卵母细胞中，激活培养后，得到擦除表观修饰异常的羊iCHI胚胎。本发明通过对羊AG‑haESCs细胞瞬时表达鱼精蛋白可擦除iCHI胚胎中的异常甲基化，制备得到的Pro‑iCHI胚胎的囊胚率与iCHI胚胎相比有显著提高，与IVF胚胎相近，用于胚胎移植可获得半克隆基因编辑羊，为后续育种应用提供材料。

公开(公告)号：CN118787657B

公开(公告)日：2024-12-03

申请号：CN202411266204.X

申请日：2024-09-11

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  吴迪 ,  李光鹏 ,  白春玲 ,  刘雪霏 ,  宋丽爽 ,  刘明成

IPC: A61K31/7084 ,  A61P15/08 ,  A01K67/02

Abstract: 本发明提供了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在提高牛繁殖效率中的应用，属于畜牧业动物繁殖技术领域。本发明首次揭示了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在牛繁殖中的作用，为提高牛MOET（超数排卵和胚胎移植技术）效率开辟了新的途径。本发明利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸能够提高牛排卵的数量和质量，显著提升了超排效率，并可以在胚胎移植过程中，提高受胎率，提高了牛繁殖效率，降低了养殖成本，生产效益高，易于在养殖业广泛应用，提高投资回报率，为养殖者创造实际经济效益，对农牧业经济具有积极影响。

公开(公告)号：CN118291415A

公开(公告)日：2024-07-05

申请号：CN202410291699.5

申请日：2024-03-14

Applicant: 内蒙古大学

Inventor： 杨磊 ,  李光鹏 ,  卜力格 ,  白春玲 ,  刘雪霏 ,  苏广华 ,  宋丽爽

IPC: C12N9/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及一种CRISPR::Cr‑P300M巴豆酰化修饰编辑工具及其应用。所述巴豆酰化修饰编辑工具包括：dCas9和P300突变体的融合蛋白以及sgRNA，所述P300突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述sgRNA靶向成肌标志基因MYOG和MYMK的转录起始位点，所述sgRNA的核苷酸序列为：sg‑MYOG‑Bos如SEQ ID NO：3所示；sg‑MYMK‑Bos如SEQ ID NO：4所示；sg‑MYOG‑Mus如SEQ ID NO：5所示；sg‑MYMK‑Mus如SEQ ID NO：6所示。该工具通过增加靶基因的巴豆酰化修饰促进转录及翻译，分别对BMSC和C2C12细胞的成肌标志基因MYOG和MYMK的转录起始位点进行定点巴豆酰化修饰编辑，可以上调基因表达并促进肌管分化。