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公开(公告)号：CN118374435B
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN202410643505.3
申请日：2024-05-23
Applicant: 北京三元食品股份有限公司 , 内蒙古大学
IPC: C12N5/074
Abstract: 本发明公开了一种牛乳源的干细胞及其分离培养方法。其中的分离培养方法包括以下步骤（1）取新鲜牛乳，分离获得牛乳中的细胞；（2）将培养皿提前用基质胶包被，后弃液，然后用清洗液清洗，弃液；（3）将步骤（1）处理的细胞接种于包被好的培养皿上，用干细胞培养基培养；（4）当细胞融合至80%以上时，用消化酶消化，终止消化，分离细胞，用CTFR培养液重悬后接种于饲养层细胞上培养，促进克隆形成，传代培养获得牛乳干细胞。本发明首次从牛乳中分离、培养得到干细胞，可以更好的维持牛乳干细胞未分化状态，得到的干细胞具有OCT4、SOX2、NANOG、SSEA4标志物。为进行牛细胞诱导分化提供一种新的干细胞类型。
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公开(公告)号：CN118374435A
公开(公告)日：2024-07-23
申请号：CN202410643505.3
申请日：2024-05-23
Applicant: 北京三元食品股份有限公司 , 内蒙古大学
IPC: C12N5/074
Abstract: 本发明公开了一种牛乳源的干细胞及其分离培养方法。其中的分离培养方法包括以下步骤（1）取新鲜牛乳，分离获得牛乳中的细胞；（2）将培养皿提前用基质胶包被，后弃液，然后用清洗液清洗，弃液；（3）将步骤（1）处理的细胞接种于包被好的培养皿上，用干细胞培养基培养；（4）当细胞融合至80%以上时，用消化酶消化，终止消化，分离细胞，用CTFR培养液重悬后接种于饲养层细胞上培养，促进克隆形成，传代培养获得牛乳干细胞。本发明首次从牛乳中分离、培养得到干细胞，可以更好的维持牛乳干细胞未分化状态，得到的干细胞具有OCT4、SOX2、NANOG、SSEA4标志物。为进行牛细胞诱导分化提供一种新的干细胞类型。
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公开(公告)号：CN118995581A
公开(公告)日：2024-11-22
申请号：CN202411498411.8
申请日：2024-10-25
Applicant: 内蒙古大学
IPC: C12N5/0735 , C12N5/075
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种牛孤雌单倍体干细胞及其获取方法与培养液。对成熟的牛卵母细胞进行孤雌激活得到孤雌胚胎，将孤雌胚胎在体外培养液中培养至囊胚，将孤雌囊胚放入培养液中培养，获得牛孤雌单倍体干细胞；其中培养液通过以下方法获得：向每500 mL mTeSR1基础培养液中添加10‑20 ng/mL FGF2，1.5‑2.5μM Activin A，3‑5μM CHIR99021，1.5‑3μM XAV939。本发明提供了一种牛孤雌单倍体干细胞培养液，获得了牛孤雌单倍体干细胞，其基因组来源于卵母细胞，具有自我复制能力与多能性，还可应用于纺锤体复合物置换，解决屠宰场来源的卵母细胞遗传信息不明确的问题，获得遗传信息明确的重构卵母细胞，为牛的生物育种提供新途径。
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公开(公告)号：CN118028494B
公开(公告)日：2024-07-02
申请号：CN202410445533.4
申请日：2024-04-15
Applicant: 内蒙古大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6869 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于基因检测技术领域，具体而言，涉及一种基于二代测序鉴定高产肉牛的引物组、方法和应用；所述引物组包含SEQ ID No.1到SEQ ID No.34的34条引物。所述方法，包括如下步骤：S1：牛血液样品中基因组DNA的提取；S2：根据MSTN基因外显子碱基序列，设计用于三轮PCR扩增的引物；S3：建立三轮PCR扩增体系和扩增程序；S4：纯化PCR扩增产物并混样进行二代测序；S5：利用DAVID软件进行数据分析。本发明创造基于二代测序检测方法鉴定高产肉牛，可同时检测多个样品，降低了测序成本，提高了测序效率。实现了高效快速批量鉴定，具有较强的实用性，可广泛应用于牛基因型鉴定和种群划分，在分子遗传育种领域内也是一次很好的应用。
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公开(公告)号：CN113736728B
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202110962301.2
申请日：2021-08-20
Applicant: 内蒙古大学
IPC: C12N5/073 , C12N15/877 , A01K67/0273
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116286905A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310524020.8
申请日：2023-05-11
Applicant: 内蒙古大学
IPC: C12N15/55 , C12N15/113 , C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统、方法及应用。一种牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统，包括boCas9蛋白和sgRNA；编码所述boCas9蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明根据牛细胞的密码子偏好性对外源Cas9基因进行优化，可以显著提高牛细胞中Cas9基因的转录和翻译效率，最终增加细胞中Cas9蛋白质的含量。结果显示：改造后的牛源化boCas9蛋白质表达量是野生型对照组Cas9的2倍，靶基因切割效率是野生型对照组的至少6倍。本发明方法能够有效提高CRISPR/boCas9基因编辑系统在牛细胞中的切割效率。
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公开(公告)号：CN118931878B
公开(公告)日：2025-02-07
申请号：CN202411429934.7
申请日：2024-10-14
Applicant: 内蒙古大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开一种基于CRISPR/dCas9的表观遗传基因编辑系统及其应用。所述表观遗传基因编辑系统包括：superCRISPRoff融合蛋白和引导所述superCRISPRoff融合蛋白靶向目的基因的sgRNA；所述superCRISPRoff融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1~6中任一种所示。与现有工具dCas9‑DNMT3A‑3L或CRISPRoff相比，本发明的表观遗传基因编辑系统具有效率高、作用效果持久等特点。此外，本发明的表观遗传基因编辑系统能够在肌肉卫星细胞中显著抑制肌肉生长抑制素的表达，提高肌肉卫星细胞的分化能力，从而促进肌肉生长。
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公开(公告)号：CN118291415B
公开(公告)日：2024-11-19
申请号：CN202410291699.5
申请日：2024-03-14
Applicant: 内蒙古大学
Abstract: 本发明涉及一种CRISPR::Cr‑P300M巴豆酰化修饰编辑工具及其应用。所述巴豆酰化修饰编辑工具包括：dCas9和P300突变体的融合蛋白以及sgRNA，所述P300突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述sgRNA靶向MYMK的转录起始位点，所述sgRNA的核苷酸序列为：sg‑MYMK‑Bos如SEQ ID NO：4所示；sg‑MYMK‑Mus如SEQ ID NO：6所示。该工具通过增加靶基因的巴豆酰化修饰促进转录及翻译，可以上调基因表达并促进肌管分化。
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公开(公告)号：CN118956734A
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202411455211.4
申请日：2024-10-18
Applicant: 内蒙古大学
IPC: C12N5/0735 , C12R1/91
Abstract: 本发明提供一种牛孤雄干细胞培养液及其应用，属于生物技术领域，本发明主要研发了一种牛孤雄干细胞培养液，该培养液是以mTeSR1基础培养液为主，向其中加入了FGF2、Activin A、CHIR99021、IWR1‑1‑endo四种因子，通过该培养液本发明实现了对牛孤雄单倍体胚胎干细胞（AG‑haESCs）的获得与培养，填补了牛AG‑haESCs培养的空白，AG‑haESCs可用于制备基因编辑牛，为生物育种提供新思路。
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公开(公告)号：CN118956733A
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202411455209.7
申请日：2024-10-18
Applicant: 内蒙古大学
IPC: C12N5/0735 , C12R1/91
Abstract: 本发明提供一种羊孤雄单倍体干细胞培养液及其应用，属于生物技术领域，羊孤雄单倍体干细胞（AG‑haESCs）的建立依托于适用的优选羊AG‑haESCs培养液，由基础培养液添加4种细胞因子（FGF2、Activin、CHIR99021、IWR1‑1‑endo）组成，本发明公开了羊AG‑haESCs的获得与培养，通过流式细胞分选仪可将单倍体干细胞的比例维持在70%左右，获得的羊孤雄单倍体干细胞可用于基因编辑半克隆动物的生产。
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