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公开(公告)号：CN110951742B
公开(公告)日：2022-10-21
申请号：CN201911405281.8
申请日：2019-12-31
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一种不产生DNA双链断裂的实现基因替换的方法。所述方法包括如下步骤：将sgRNA、Cas9切刻酶、供体DNA导入目的植物中；sgRNA靶向DNA片段甲靶点序列；供体DNA依次包括DNA片段甲靶点序列、DNA片段乙和DNA片段甲靶点序列；DNA片段乙为将DNA片段甲经过一个或几个碱基突变后得到的DNA分子；在sgRNA引导下，Cas9切刻酶在目的植物基因组中的DNA片段甲靶点序列处和所述供体DNA中的DNA片段甲靶点序列处均产生单链DNA切刻，并通过目的植物体内的修复机制将目的植物基因组中的DNA片段甲替换为DNA片段乙，实现植物基因替换。
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公开(公告)号：CN111004817B
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN201911393637.0
申请日：2019-12-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种农杆菌介导的水稻遗传转化方法。本发明还公开了一种粳、籼稻通用型的组织培养的培养基，所述培养基由溶质和溶剂组成，所述溶质包括硝酸钾、硫酸铵、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、硫酸锰、七水硫酸锌、硼酸、碘化钾、五水硫酸铜、二水钼酸钠、六水氯化钴、甘氨酸、维生素B1、维生素B6、烟酸、肌醇、七水硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠。本发明开发的通用型组织培养基具有如下优点：1、通过大量元素、微量元素、有机物及激素的优化组合，使粳、籼稻均可实现愈伤诱导及再生出苗；2、通过农杆菌介导，粳、籼稻均可实现稳定转化。
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公开(公告)号：CN111154796B
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202010074742.4
申请日：2020-01-22
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种农杆菌介导的玉米骨干自交系京724的遗传转化方法。所述方法包括如下步骤：1)用含有目的基因的载体的农杆菌侵染玉米自交系京724幼胚，得到侵染后幼胚；2)将所述侵染后幼胚接种至共培养基培养基中进行培养，得到共培养后幼胚；3)将所述共培养后幼胚接种至恢复培养基中进行培养，得到恢复培养后幼胚；4)将所述恢复培养后幼胚接种至筛选培养基中进行培养，得到抗性愈伤；5)将所述抗性愈伤接种至再生培养基中进行培养，得到幼苗；6)将所述幼苗在生根培养基中培养，得到玉米自交系京724转基因植株。
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公开(公告)号：CN110951743B
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN201911405303.0
申请日：2019-12-31
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种提高植物基因替换效率的方法。所述方法包括如下步骤：将esgRNA、Cas9切刻酶、筛选剂抗性蛋白、供体DNA导入目的植物中；esgRNA靶向DNA片段甲靶点序列；Cas9切刻酶与筛选剂抗性蛋白共表达；供体DNA依次包括DNA片段甲靶点序列、DNA片段乙和DNA片段甲靶点序列；DNA片段乙为将DNA片段甲经过一个或几个碱基突变后得到的DNA分子；在esgRNA引导下，Cas9切刻酶在目的植物基因组中的DNA片段甲靶点序列处和供体DNA中的DNA片段甲靶点序列处均产生单链DNA切刻，并通过目的植物体内的修复机制将目的植物基因组中的DNA片段甲替换为DNA片段乙，实现植物基因替换。
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公开(公告)号：CN110628795B
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN201910938696.5
申请日：2019-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的A·G碱基替换的细胞富集技术及其应用。所述细胞富集技术载体包括如下试剂：靶向目标基因靶点序列的sgRNA、靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA、A·G碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；A·G碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行A·G碱基替换使功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。本发明实现了细胞水平上A·G碱基替换细胞富集，大大提高A·G碱基替换效率。
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公开(公告)号：CN111154796A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010074742.4
申请日：2020-01-22
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种农杆菌介导的玉米骨干自交系京724的遗传转化方法。所述方法包括如下步骤：1)用含有目的基因的载体的农杆菌侵染玉米自交系京724幼胚，得到侵染后幼胚；2)将所述侵染后幼胚接种至共培养基培养基中进行培养，得到共培养后幼胚；3)将所述共培养后幼胚接种至恢复培养基中进行培养，得到恢复培养后幼胚；4)将所述恢复培养后幼胚接种至筛选培养基中进行培养，得到抗性愈伤；5)将所述抗性愈伤接种至再生培养基中进行培养，得到幼苗；6)将所述幼苗在生根培养基中培养，得到玉米自交系京724转基因植株。
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公开(公告)号：CN111019969A
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201911411090.2
申请日：2019-12-31
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种通过优化供体DNA模板来提高基因精确替换效率的方法。该方法包括如下步骤：将esgRNA、Cas9切刻酶、筛选剂抗性蛋白、供体DNA导入植物中；esgRNA靶向DNA片段甲靶点序列；DNA片段甲靶点序列位于植物基因组中的非转录链上；供体DNA的转录链依次由DNA片段甲靶点序列、DNA片段乙和DNA片段甲靶点序列组成；DNA片段乙为将DNA片段甲突变后得到的DNA分子；在esgRNA引导下，Cas9切刻酶在植物基因组的转录链上产生一个单链切刻，在供体DNA的非转录链上产生两个单链切刻，通过植物体内的修复机制将植物基因组中DNA片段甲替换为DNA片段乙，实现植物基因替换。
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公开(公告)号：CN111019968A
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201911405272.9
申请日：2019-12-31
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了NTS/dNTS组合在制备植物突变体中的应用。该方法包括如下步骤：将esgRNA、Cas9切刻酶、筛选剂抗性蛋白、供体DNA导入植物中；esgRNA靶向DNA片段甲靶点序列；DNA片段甲靶点序列位于植物基因组中的转录链上；供体DNA的转录链依次由DNA片段甲靶点序列、DNA片段乙和DNA片段甲靶点序列组成；DNA片段乙为将DNA片段甲突变后得到的DNA分子；在esgRNA引导下，Cas9切刻酶在植物基因组的非转录链上产生一个单链DNA切刻，在供体DNA的非转录链上产生两个单链DNA切刻，通过植物体内的修复机制将植物基因组中DNA片段甲替换为DNA片段乙，实现植物基因替换。
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公开(公告)号：CN110951736A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911323222.6
申请日：2019-12-20
申请人： 北京市农林科学院
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/29 , C12N9/78 , C12N15/55 , C12N15/82 , C12N5/10 , C07K14/415 , A01H5/00 , A01H6/46
摘要： 本发明公开了一种核定位信号F4NLS及其在提高碱基编辑效率与拓展可编辑碱基范围中的应用。所述核定位信号F4NLS由核定位信号甲和核定位信号乙组成，所述核定位信号甲包括3*Flag标签蛋白和NLS蛋白；所述核定位信号乙包括所述NLS蛋白；所述3*Flag标签蛋白的氨基酸序列为序列10第1-22位；所述NLS蛋白的氨基酸序列为序列11第1-7位。通过实验证明：本发明的核定位信号F4NLS可提高碱基编辑效率和拓展可编辑碱基范围，在生物基因组编辑领域具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN110628794A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910938668.3
申请日：2019-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用。所述细胞富集技术载体包括如下试剂：sgRNA、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；sgRNA由靶向目标基因靶点序列的tRNA-sgRNA和靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA-sgRNA组成；C·T碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA-sgRNA的向导下，可通过对功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行C·T碱基替换使功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。本发明实现了细胞水平上C·T碱基替换细胞富集，大大提高C·T碱基替换效率。
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