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公开(公告)号：CN110004140B
公开(公告)日：2022-03-11
申请号：CN201910139421.5
申请日：2019-02-25
申请人： 华东师范大学 , 泰兴市东圣生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种提高可得然胶高产菌株筛选效率的方法，属于微生物育种技术领域，主要包括以下步骤：(1)产可得然胶出发菌株的培养；(2)出发菌株的NTG诱变；(3)配制苯胺蓝平板筛选培养基；(4)在苯胺蓝筛选培养基中加入NaI和NaIO3；(5)诱变菌液在苯胺蓝和NaI和NaIO3双筛选平板培养基上的初筛；(6)50mL/250mL摇瓶发酵复筛，根据测定粗产量筛选高产菌株；(7)75mL/500mL摇瓶发酵二次复筛，根据测定可得然胶产量筛选高产菌株。本发明方法在平板筛选培养基中添加化学药物NaI和NaIO3，利用其在酸性环境下产生碘单质杀死产酸细菌的原理，增大了筛选得到高产可得然胶菌株的几率，提高了平板筛菌效率，缩短了筛菌周期。
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公开(公告)号：CN110004140A
公开(公告)日：2019-07-12
申请号：CN201910139421.5
申请日：2019-02-25
申请人： 华东师范大学 , 泰兴市东圣生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种提高可得然胶高产菌株筛选效率的方法，属于微生物育种技术领域，主要包括以下步骤：(1)产可得然胶出发菌株的培养；(2)出发菌株的NTG诱变；(3)配制苯胺蓝平板筛选培养基；(4)在苯胺蓝筛选培养基中加入NaI和NaIO3；(5)诱变菌液在苯胺蓝和NaI和NaIO3双筛选平板培养基上的初筛；(6)50mL/250mL摇瓶发酵复筛，根据测定粗产量筛选高产菌株；(7)75mL/500mL摇瓶发酵二次复筛，根据测定可得然胶产量筛选高产菌株。本发明方法在平板筛选培养基中添加化学药物NaI和NaIO3，利用其在酸性环境下产生碘单质杀死产酸细菌的原理，增大了筛选得到高产可得然胶菌株的几率，提高了平板筛菌效率，缩短了筛菌周期。
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公开(公告)号：CN109306341B
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN201811062937.6
申请日：2018-09-12
申请人： 华东师范大学 , 上海邦耀生物科技有限公司
摘要： 本发明提供了HDAC11基因干扰的嵌合抗原受体T细胞及其应用。具体地，本发明提供了工程化免疫细胞，所述工程化免疫细胞包括：(a)嵌合抗原受体CAR，所述嵌合抗原受体CAR包括：抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述抗原结合结构域特异性结合于肿瘤细胞表面抗原；和(b)降低或抑制HDAC11蛋白表达活性的抑制分子。本发明的工程化免疫细胞具有良好的肿瘤杀伤效果。
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公开(公告)号：CN112708617A
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN201911021014.0
申请日：2019-10-25
申请人： 华东师范大学
摘要： 本发明公开了一种快速筛选高产细菌纤维素菌株的方法。该方法通过使用细菌纤维素来吸附刚果红的原理来筛选高产细菌纤维素菌株，属于微生物技术领域。所述方法包括以下步骤：产纤维素菌株经亚硝基胍NTG诱变后，用NaBr‑NaBrO3平板高通量初筛，动态发酵后进一步用刚果红吸附法进行高通量筛选后，三角瓶发酵复筛，筛选得到高产菌株。本方法与常用的通过测定纤维素的干重测定方法来筛选高产菌株的效率不同，大大提高了高产菌株的筛选效率。
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公开(公告)号：CN103555742A
公开(公告)日：2014-02-05
申请号：CN201310407820.8
申请日：2013-09-09
申请人： 华东师范大学
摘要： 本发明公开一种人活性颗粒酶A重组蛋白的制备方法，利用PCR扩增得到人活性颗粒酶A基因，将其插入到与原核表达载体pET24a(+)相应酶切位点中，构建重组表达质粒pET24a(+)-aGzmA，经转化大肠杆菌BL21后获得工程菌pET24a(+)-aGzmA/BL21。该工程菌经IPTG诱导后可表达人活性颗粒酶A重组蛋白，重组蛋白以包涵体的形式表达。利用镍亲和层析柱可以分离得到纯度高达95％以上的重组蛋白，且该重组蛋白经BLT底物溶液进行活性测定显示出较好的酶解活性。该方法具有成本低、操作简单、蛋白表达量高等特点，并且制备的重组蛋白具有生物学活性和易于纯化。
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公开(公告)号：CN103205444A
公开(公告)日：2013-07-17
申请号：CN201310090856.8
申请日：2013-03-21
申请人： 华东师范大学
摘要： 本发明涉及一种人活性颗粒酶K重组蛋白（rhGzmK）的制备方法，该重组蛋白去除了人颗粒酶K（hGzmK）N端的24个氨基酸，并在C端增加了6个组氨酸，以方便用镍离子柱进行纯化。其流程是：抽提人NK92细胞的总RNA，利用RT-PCR技术得到hGzmK基因，将之与原核表达载体pET24a(+)相连，构建重组表达质粒pET24a(+)-hGzmK，经转化大肠杆菌BL21后获得工程菌，该工程菌经IPTG诱导可表达rhGzmK。该重组蛋白以包涵体的形式表达，可利用镍亲和层析柱进行纯化，其纯度可达95%以上。该方法具有操作简单、产量高、重组蛋白易于纯化等特点，且纯化蛋白具有较高的生物学活性。
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公开(公告)号：CN101265478B
公开(公告)日：2011-02-02
申请号：CN200810036673.7
申请日：2008-04-25
申请人： 华东师范大学
摘要： 本发明公开了一种抑制小鼠B7-DC基因表达的shRNA真核表达载体的构建方法，其构建流程是：根据Genebank提供的小鼠B7-DC的基因序列，选取编码区第361～379位核苷酸序列为靶序列设计并合成引物，通过引物退火，连接至干扰载体pAS，即得本发明构建的真核表达载体shRNA-B7-DC。本发明所构建的真核表达载体，不仅能特异性靶向并抑制小鼠骨髓来源的树突状细胞中B7-DC基因的表达，还可以大量扩增，并可将其有效片段克隆至其它更好的载体上，具有操作简单、应用方便、毒副作用小、成本低等优点，可以为研究B7-DC基因的功能、增强树突状细胞诱导的免疫应答中的应用研究提供一个有效工具。
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公开(公告)号：CN114836428B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210639709.0
申请日：2022-06-08
申请人： 华东师范大学
IPC分类号： C12N15/12 , C12N15/113 , C12N15/867 , C12N15/62 , C12N5/10 , A61K39/00 , A61P35/00
摘要： 本发明公开了一种TIGIT基因干扰的嵌合抗原受体NK细胞及其用途。本发明提出利用RNA干扰技术敲低TIGIT在NKG2D‑CAR‑NK细胞中的表达，普遍增强CAR‑NK细胞功能的通用型方法，提升NKG2D‑CAR‑NK细胞免疫疗法的效果。本发明还公开了一种TIGIT基因RNAi靶序列以及基于该靶序列的干扰序列、及其构建方法和应用。本发明可应用于恶性肿瘤病免疫治疗中，为利用CAR‑NK治疗肿瘤提供新的改良思路，具有广泛应用前景。
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公开(公告)号：CN114058589B
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202010754293.8
申请日：2020-07-30
申请人： 华东师范大学 , 上海邦耀生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了具有嵌合抗原受体修饰的免疫细胞、制备方法和药物，涉及免疫治疗技术领域。本发明公开的免疫细胞的GPR116基因不表达、或其表达受到抑制、或其表达的GPR116蛋白失活。本发明首次发现GPR116基因或蛋白对免疫细胞免疫功能的负调控作用，并且首次将其与嵌合抗原受体修饰的细胞联合，用于增强免疫细胞的抗肿瘤功能，本发明不仅提供了一个提高肿瘤治疗的新方法，也为今后深入GPR116的免疫调节功能以及临床疾病治疗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109320602B
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN201810725628.6
申请日：2018-07-04
申请人： 华东师范大学 , 上海邦耀生物科技有限公司
IPC分类号： C07K14/705 , C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/13 , C12N15/867 , A61K35/17 , A61P35/00
摘要： 本发明涉及一种Siglec‑9靶向的嵌合抗原受体T细胞及其用途，具体地，本发明提供了一种Siglec‑9胞外段蛋白、表达靶向MUC1的CAR和工程化的免疫细胞。本发明的工程化免疫细胞可选择性杀伤来自高表达MUC1的恶性肿瘤的肿瘤细胞。
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