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公开(公告)号：CN103740743B
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201310750497.4
申请日：2013-12-30
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种表达猪博卡病毒VP2蛋白的重组杆状病毒及其应用，PCR扩增一种猪博卡病毒VP2基因，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。将扩增到的猪博卡病毒VP2基因插入到杆状病毒转移质粒pFastBacTMHTB的BamHⅠ和XhoⅠ位点构建为重组转移质粒pFastBac HTB-VP2，然后将该重组转移质粒转化至含有杆状病毒骨架质粒的DH10Bac感受态细胞，通过同源重组将VP2基因整合至杆状病毒骨架质粒Bacmid中，提取重组Bacmid DNA转染sf9细胞后获得重组杆状病毒rBV-VP2，保藏号为：CCTCC V201401。在昆虫细胞中大量表达产生VP2蛋白及病毒样颗粒，开发成一种有效的PBoV VLPs亚单位疫苗。
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公开(公告)号：CN107304417A
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201610261530.0
申请日：2016-04-25
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N7/00 , A61K39/215 , A61P31/14 , A61P1/12 , C12Q1/70
摘要： 本发明属于动物病毒学与动物传染病技术领域，具体涉及一株猪流行性腹泻病毒变异弱毒株及应用。该弱毒株为猪流行性腹泻病毒AJ1102-R株(保藏号CCTCC NO:V201433)，经细胞传代、蚀斑克隆和培育证明增殖性能稳定。该弱毒株的基因组序列出现下述突变：第96代在3’UTR的第71～72位发生序列突变，缺失了2个碱基TT；在位于S基因的第3805～3816位存在序列突变，添加了12个碱基GATGCTATTGTT。该弱毒株的免疫效力可以诱导免疫仔猪产生高水平的中和抗体和足够攻毒保护，可以作为疫苗株应用。
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公开(公告)号：CN104862285A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510242555.1
申请日：2015-05-12
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/543
摘要： 本发明属于动物免疫学技术领域。具体涉及猪流行性腹泻病毒抗体捕获ELISA检测方法及应用。本发明以抗猪流行性腹泻病(PEDV)N蛋白的单克隆抗体包被酶标板，捕获原核表达的PEDV N蛋白作为抗原建立检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体的捕获ELISA方法。本发明具有快速简便、特异灵敏等特点，适用于在体外检测猪血清中的猪流行性腹泻病毒抗体。其中分泌抗PEDV N蛋白单抗的杂交瘤细胞株N2D1保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2014174。本发明还公开了在体外猪流行性腹泻病毒抗体检测中的应用。
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公开(公告)号：CN103421728A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201210205663.8
申请日：2012-06-20
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N1/21 , A61K39/116 , A61K39/102 , A61K39/10 , A61P31/04 , C12R1/01
摘要： 本发明属于动物细菌学和基因工程疫苗制备技术领域，具体涉及一种不含抗性标记的表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段的重组支气管败血波氏杆菌菌株、含有该重组菌的疫苗，其制备方法与应用。本发明得到一株不含抗性标记的表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段重组支气管败血波氏杆菌QH0814ΔaroA/toxA-N，该菌株缺失了支气管败血波氏杆菌的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶aroA基因，该菌株含有猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段。本发明还公开了该重组菌的制备方法及疫苗的应用。本发明的基因工程疫苗可以刺激猪产生抵抗猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌野毒株的保护性免疫反应，能有效防止猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌的双重感染。
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公开(公告)号：CN104862285B
公开(公告)日：2018-03-06
申请号：CN201510242555.1
申请日：2015-05-12
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/543
摘要： 本发明属于动物免疫学技术领域。具体涉及猪流行性腹泻病毒抗体捕获ELISA检测方法及应用。本发明以抗猪流行性腹泻病(PEDV)N蛋白的单克隆抗体包被酶标板，捕获原核表达的PEDV N蛋白作为抗原建立检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体的捕获ELISA方法。本发明具有快速简便、特异灵敏等特点，适用于在体外检测猪血清中的猪流行性腹泻病毒抗体。其中分泌抗PEDV N蛋白单抗的杂交瘤细胞株N2D1保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2014174。本发明还公开了在体外猪流行性腹泻病毒抗体检测中的应用。
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公开(公告)号：CN107304417B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201610261530.0
申请日：2016-04-25
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N7/00 , A61K39/215 , A61P31/14 , A61P1/12 , C12Q1/70
摘要： 本发明属于动物病毒学与动物传染病技术领域，具体涉及一株猪流行性腹泻病毒变异弱毒株及应用。该弱毒株为猪流行性腹泻病毒AJ1102‑R株(保藏号CCTCC NO:V201433)，经细胞传代、蚀斑克隆和培育证明增殖性能稳定。该弱毒株的基因组序列出现下述突变：第96代在3’UTR的第71～72位发生序列突变，缺失了2个碱基TT；在位于S基因的第3805～3816位存在序列突变，添加了12个碱基GATGCTATTGTT。该弱毒株的免疫效力可以诱导免疫仔猪产生高水平的中和抗体和足够攻毒保护，可以作为疫苗株应用。
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公开(公告)号：CN103421817B
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201210389745.2
申请日：2012-10-15
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明涉及动物病毒学与动物传染病学及基因工程学技术领域。具体涉及一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗原多表位基因的合成与应用。其特征是将高致病性PRRSVWUH3株GP3、GP4、GP5、M和N蛋白的T细胞表位和修饰的GP5B细胞表位通过linker相连，并根据哺乳动物对密码子的偏爱性进行改造后人工合成，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。合成的该多表位基因包含在真核表达质粒pcDNA3.1-mMEP中，含有该质粒的大肠杆菌Escherichia coli DH5α/pcDNA3.1-mMEP保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCC NO：M 2012171。本发明还公开了该基因在制备猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗中应用。
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公开(公告)号：CN103421728B
公开(公告)日：2015-05-27
申请号：CN201210205663.8
申请日：2012-06-20
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N1/21 , A61K39/116 , A61K39/102 , A61K39/10 , A61P31/04 , C12R1/01
摘要： 本发明属于动物细菌学和基因工程疫苗制备技术领域，具体涉及一种不含抗性标记的表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段的重组支气管败血波氏杆菌菌株、含有该重组菌的疫苗，其制备方法与应用。本发明得到一株不含抗性标记的表达猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段重组支气管败血波氏杆菌QH0814ΔaroA/toxA-N，该菌株缺失了支气管败血波氏杆菌的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶aroA基因，该菌株含有猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因片段。本发明还公开了该重组菌的制备方法及疫苗的应用。本发明的基因工程疫苗可以刺激猪产生抵抗猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌野毒株的保护性免疫反应，能有效防止猪产毒多杀性巴氏杆菌和猪源支气管败血波氏杆菌的双重感染。
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公开(公告)号：CN103740743A
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201310750497.4
申请日：2013-12-30
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种表达猪博卡病毒VP2蛋白的重组杆状病毒及其应用，PCR扩增一种猪博卡病毒VP2基因，它的核苷酸序列如序列表SEQ？ID？NO.1所示。将扩增到的猪博卡病毒VP2基因插入到杆状病毒转移质粒pFastBacTMHTB的BamHⅠ和XhoⅠ位点构建为重组转移质粒pFastBac？HTB-VP2，然后将该重组转移质粒转化至含有杆状病毒骨架质粒的DH10Bac感受态细胞，通过同源重组将VP2基因整合至杆状病毒骨架质粒Bacmid中，提取重组Bacmid？DNA转染sf9细胞后获得重组杆状病毒rBV-VP2，保藏号为：CCTCC？V201401。在昆虫细胞中大量表达产生VP2蛋白及病毒样颗粒，开发成一种有效的PBoV？VLPs亚单位疫苗。
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公开(公告)号：CN103421817A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201210389745.2
申请日：2012-10-15
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明涉及动物病毒学与动物传染病学及基因工程学技术领域。具体涉及一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗原多表位基因的合成与应用。其特征是将高致病性PRRSVWUH3株GP3、GP4、GP5、M和N蛋白的T细胞表位和修饰的GP5B细胞表位通过linker相连，并根据哺乳动物对密码子的偏爱性进行改造后人工合成，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。合成的该多表位基因包含在真核表达质粒pcDNA3.1-mMEP中，含有该质粒的大肠杆菌Escherichia coli DH5α/pcDNA3.1-mMEP保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCC NO：M 2012171。本发明还公开了该基因在制备猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗中应用。
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