一种SIRT1基因敲除的IPEC-J2细胞系的构建方法

    公开(公告)号:CN110184302B

    公开(公告)日:2023-02-21

    申请号:CN201910467685.3

    申请日:2019-05-30

    摘要: 本发明公开了一种SIRT1基因敲除的IPEC‑J2细胞系的构建方法,包括如下步骤:(1)针对SIRT1基因的第一外显子设计并合成gRNA探针,gRNA的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,其反向互补序列如SEQ ID NO.2所示;(2)将退火后形成反向互补的双链gRNA探针克隆到如图2所示的pSpCas9‑2A‑PuroV2.0载体中,构建同时表达如SEQ ID NO.1所示sgRNA和Cas9蛋白的质粒;(3)将步骤(2)构建好的质粒转染到IPEC‑J2细胞;(4)从步骤(3)转染后的IPEC‑J2细胞筛选单克隆突变细胞系,得到SIRT1基因敲除的IPEC‑J2细胞系,其相比野生型细胞系,缺少了SIRT1基因第一外显子中的5个碱基。本发明首次构建SIRT1基因敲除的IPEC‑J2细胞系,筛选得到稳定的单克隆SIRT1基因敲除IPEC‑J2纯合细胞系,可作为研究仔猪肠道氧化应激的细胞模型。