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公开(公告)号：CN103224951A
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201310028216.4
申请日：2013-01-25
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种人白细胞介素29成熟肽第35位精氨酸定点突变为赖氨酸的变异体(hIL-29G)及其制备方法，属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工设计合成hIL-29成熟肽的上下游引物和定点突变引物；2)用上下游引物从hIL-29的cDNA扩增hIL-29成熟肽编码基因，再用突变引物对第104位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)培养重组酵母工程菌，于培养液添加1.5％(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体；5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达第35位精氨酸突变为赖氨酸的hIL-29突变体，适用于工业化制备人白细胞介素29成熟肽突变体。
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公开(公告)号：CN103014040A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210562517.0
申请日：2012-12-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种来源于细菌的耐热β-1，4-内切木聚糖酶(SyXyn11)基因的异源表达、活性测定及分析和酶学性质分析方法。EvXyn11TS是一种来源于细菌的极端耐热木聚糖酶突变体(GenBank登录号EU591743)，它的热稳定性非常好，具有适合于工业应用的理想特性。为实现EvXyn11TS在工业上的应用，将该耐热基因中的稀有密码子进行优化，并命名为Syxyn11，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值，也为其它β-1，4-内切木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN102559737A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110413170.9
申请日：2011-12-13
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种重组人白细胞介素29(hIL-29)变异体的制备方法及表达重组hIL-29变异体的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从健康人外周血单个核细胞经反转录PCR得到hIL-29变异体的编码基因；3)构建含有hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达重组hIL-29变异体；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化重组hIL-29变异体。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达重组hIL-29变异体，适用于工业化制备重组人白细胞介素29变异体。
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公开(公告)号：CN103642875A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666360.0
申请日：2013-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种从魔芋粉中制备低聚甘露糖的方法。利用来源于本实验室的重组β-甘露聚糖酶(reAuMan5AN3C3)和重组β-内切葡聚糖酶(reAuCell2A)协同作用对魔芋粉进行酶解，得到低聚甘露糖。该方法所用的关键酶的催化效率较高、酶的生产和使用成本较低、周期短、无污染，有较大的工业化生产、应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104672318A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201410775687.6
申请日：2014-12-17
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种人白细胞介素-29(hIL-29)第43位赖氨酸定点突变为亮氨酸的重组变异体(rhIL-29M)及其制备方法，属于生物技术领域。本发明具体方法为：1)设计合成IL-29变异体的特异性引物及突变引物；2)用特异性引物及突变引物对hIL-29编码基因第127、128位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)用含1％(v/v)甲醇的培养液诱导培养酵母工程菌；5)用SP-Sepharose Fast Flow层析柱从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的重组酵母工程菌可高密度发酵并表达肽链第43位赖氨酸突变为亮氨酸的rhIL-29变异体，适用于工业化制备rhIL-29变异体。
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公开(公告)号：CN104407129A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410756205.2
申请日：2014-12-12
申请人： 江南大学
IPC分类号： G01N33/543
CPC分类号： G01N33/6869 , G01N2333/7155
摘要： 本发明提供了一种检测发酵液中重组人白细胞介素-29活性的间接ELISA方法，用于基因工程菌株发酵条件优化过程中简便、快速检测发酵液中表达产物rhIL-29的活性。检测方法包括以下步骤：将表达rhIL-29的基因工程菌株的发酵液上清用包被液稀释后，直接包被酶标反应板，经37℃孵育3h、4℃过夜；洗板三次，加入封闭液37℃孵育3h：洗板三次，加入羊抗人IL-29抗体37℃孵育30min；洗板三次，加入HRP标记的兔抗羊IgG，37℃孵育30min；洗板三次，加入TMB底物，37℃显色10min；加终止液终止反应，在A450波长测定OD值。本发明的检测方法适用于基因工程菌株发酵条件优化过程中检测发酵液中表达产物的活性，根据不同发酵条件下测得的发酵液OD450值，可判定该基因工程菌株的最佳发酵条件。
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公开(公告)号：CN104402988A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410756203.3
申请日：2014-12-12
申请人： 江南大学
CPC分类号： C07K14/54
摘要： 本发明提供了一种人白细胞介素-29(hIL-29)成熟肽第33位赖氨酸定点突变为精氨酸的重组hIL-29变异体(rhIL-29L)及其制备方法，属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工设计合成hIL-29成熟肽的上下游引物和定点突变引物；2)用上下游引物及突变引物对hIL-29成熟肽编码基因第98位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)培养重组酵母工程菌，于培养液添加1.5％(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体；5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的重组酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达rhIL-29L，适用于工业化制备rhIL-29成熟肽变异体。
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公开(公告)号：CN103224952A
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201310028218.3
申请日：2013-01-25
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种人白细胞介素29成熟肽第33位赖氨酸、35位精氨酸定点突变为精氨酸、赖氨酸的变异体(hIL-29Z)及其制备方法，属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工设计合成定点突变引物；2)用突变引物对hIL-29成熟肽编码基因第98位和104位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)培养重组酵母工程菌，于培养液添加1.5％(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体；5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达第33位赖氨酸、35位精氨酸突变为精氨酸、赖氨酸的hIL-29变异体，适用于工业化制备人白细胞介素29成熟肽变异体。
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