公开(公告)号：CN107299154A

公开(公告)日：2017-10-27

申请号：CN201710559840.5

申请日：2017-07-11

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 宁长申 ,  闫亚群 ,  崔艳艳 ,  赵姗姗 ,  王晓星 ,  张艳 ,  史柯 ,  菅复春 ,  张龙现 ,  王荣军 ,  景纪春

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6893 ,  C12Q1/701 ,  C12Q2600/16

Abstract: 本发明公开了一种羊吕氏泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体双重PCR专用引物，引物的核苷酸序列为：羊吕氏泰勒虫专用引物T.lu7：如SEQ NO.1和SEQ NO.2所示；嗜吞噬细胞无浆体专用引物SSAP2：如SEQ NO.3和SEQ NO.4所示。羊吕氏泰勒虫专用引物T.lu7的扩增产物大小为962bp，嗜吞噬细胞无浆体专用引物SSAP2的扩增产物大小为641bp。本发明基于T. luwenshuni18S rRNA靶基因和A. phagocytophilum16S rRNA靶基因建立的双重PCR方法特异性高。该法有着检测速度快，敏感性高，特异性强、高效、低成本等优点，适于两种病原所引起疾病的流行病学调查和临床确诊。

公开(公告)号：CN109913566A

公开(公告)日：2019-06-21

申请号：CN201910312325.6

申请日：2019-04-18

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 宁长申 ,  彭永帅 ,  赵姗姗 ,  王坤轮 ,  宁晓冬 ,  闫亚群 ,  史柯 ,  菅复春 ,  张龙现 ,  王荣军 ,  张素梅

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种同时检测四种无浆体的多重PCR专用引物和四重PCR检测方法，牛无浆体专用引物扩增产物大小为529 bp，山羊无浆体专用引物扩增产物大小为874 bp，绵羊无浆体专用引物扩增产物大小为347 bp，嗜吞噬细胞无浆体专用引物扩增产物大小为172 bp。四重PCR反应体系为：LA Taq DNA Polymeras 0.25μL，10×LA Buffer 2.5μL，dNTP Mixture 4.0μL，四个引物对各0.4μL，DNA模板2.0μL，灭菌去离子水补足至25μL；四重PCR反应条件为：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，63℃退火30s，72℃延伸1 min，运行40个循环，72℃延伸10 min；该方法有着检测速度快，敏感性高，特异性强、高效、低成本等优点，适于四种病原所引起疾病的流行病学调查和临床确诊。

公开(公告)号：CN105154557A

公开(公告)日：2015-12-16

申请号：CN201510605844.3

申请日：2015-09-22

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 宁长申 ,  崔艳艳 ,  张艳 ,  菅复春 ,  张龙现 ,  王荣军 ,  曹树轩 ,  王晓星 ,  闫亚群

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

CPC classification number: C12Q1/686 ,  C12Q1/6893 ,  C12Q2600/16 ,  C12Q2537/143 ,  C12Q2565/125

Abstract: 本发明涉及一种检测羊泰勒虫和无浆体的双重PCR方法，包括以下步骤： 根据羊泰勒虫18S rRNA基因序列，找到基因保守序列靶基因位点，设计了特异性引物序列I，根据羊无浆体16S rRNA基因序列，找到基因保守序列为靶基因位点，设计了特异性引物序列II；将特异性引物序列I的上、下游引物和特异性引物序列II的上、下游引物及PCR混合液加入PCR反应管中，混合后加入待测血液样品中提取出来的羊泰勒虫DNA及羊无浆体DNA；将PCR管置于PCR扩增仪中进行循环；取PCR产物于2%琼脂糖凝胶上电泳。该法以具有快速、特异、灵敏、高效、低成本等特点，便于临床应用。