一种耐辐射奇球菌DNA甲基转移酶
    1.
    发明公开

    公开(公告)号:CN109439636A

    公开(公告)日:2019-03-08

    申请号:CN201811290498.4

    申请日:2018-10-31

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12N9/10

    摘要: 本发明公开了一种耐辐射奇球菌DNA甲基转移酶。所述DNA甲基转移酶来源于耐辐射奇球菌,其具有典型的DNA甲基转移酶保守结构域,从N端至C端依次为含“FxGxG”保守序列的AdoMet结合域、目标序列识别域(TRD序列)及含“TSPPY”保守序列的催化域,属α型N4-Cytosine DNA甲基转移酶;其所识别的底物DNA保守序列为5’-CCGCGG-3’,甲基化修饰的位置在第二个胞嘧啶C的N4位,产生4mC类型的修饰碱基;其甲基化反应的最适温度在25-37℃之间。本发明所涉及的DNA甲基转移酶能够特异性识别“CCGCGG”保守基序并甲基化修饰其第二个胞嘧啶C的N4位,产生4mC修饰碱基,为N4-Cytosine DNA甲基转移酶。

    耐辐射奇球菌蛋白酶PprI的酶活性启动和提高方法

    公开(公告)号:CN104212782A

    公开(公告)日:2014-12-17

    申请号:CN201410262937.6

    申请日:2014-06-13

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12N9/52 C12R1/01

    CPC分类号: C12N9/52

    摘要: 本发明公开了一种蛋白酶PprI的酶活性启动和提高方法。所述蛋白酶PprI的酶活性启动需要2.0-5.0mM的Mn2+离子。酶切反应缓冲液为150-250mMNaCl、10-50mMTris-HCl8.0、1mMDTT、2.0-5.0mMMnCl2。基因dr2574和dr2340启动子片段与底物DdrO结合后,可提高蛋白酶PprI的酶切活性,缩短反应时间,对该酶的今后利用具有积极贡献。

    一种培养耐辐射奇球菌生产天然类胡萝卜素的方法

    公开(公告)号:CN102559827A

    公开(公告)日:2012-07-11

    申请号:CN201210001376.5

    申请日:2012-01-04

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12P23/00 C12R1/01

    摘要: 本发明提供一种耐辐射奇球菌生产天然类胡萝卜素的方法,通过黄浆水的收集、除杂,pH调整,添加培养物、灭菌,菌种的活化、培养种子,发酵培养,菌体破壁,类胡萝卜素萃取,干品制备获得。本发明利用豆腐等豆制品加工制作过程中副产物黄浆水来培养细菌发酵生产天然类胡萝卜素,实现了黄浆水的废物利用,提高了资源利用效率,并降低了豆制品加工企业对环境造成的污染,有利于保护环境,每升黄浆水发酵液可得类胡萝卜素干品229.8mg,优于常规培养发酵提取方法226.2%。本发明先对菌体细胞进行酸热破壁处理,再用乙醇萃取,提取完全、快速,生产工艺流程简单、生产成本低廉,产品无毒性残留、安全性高。

    一个定向突变及遗传改造的重组质粒及其应用

    公开(公告)号:CN101768598A

    公开(公告)日:2010-07-07

    申请号:CN201010101163.0

    申请日:2010-01-22

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12N15/63 C12Q1/04

    摘要: 本发明提供一个用于耐辐射球菌目的基因定向突变和染色体遗传改造的重组基因,具有SEQ?ID?№:1的核苷酸序列,是表达耐辐射球菌热激蛋白GroEL基因的启动子PgroEL与卡那霉素抗性基因KanR的融合DNA片段。本发明的基因片段位于质粒pRADK,该质粒可以在耐辐射球菌中正常复制并遗传,而且在大肠杆菌中也有较高的拷贝数,因而可以有较高产量,很容易得到大量质粒,进而可以从该质粒到得到SEQ?ID?№:1的序列,可在构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株的目的基因突变株的筛选标记中应用;也可在构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株遗传改造成工程菌的筛选标记中应用。

    利用耐辐射球菌生产天然类胡萝卜素的生产工艺

    公开(公告)号:CN1281761C

    公开(公告)日:2006-10-25

    申请号:CN200410017087.X

    申请日:2004-03-16

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12P23/00 C12R1/01

    摘要: 本发明公开了一种利用耐辐射球菌生产天然类胡萝卜素的生产工艺,其步骤为利用菌株分类为Deinococcus radiodurans的耐辐射球菌,接种于TGY固体培养基活化、传代,将活化的液体种子接入以豆饼粉配制成的豆饼粉培养基进行发酵培养,将培养好的菌体发酵液,离心,水洗,萃取,提取天然类胡萝卜素。用本发明提供的生产工艺,可得类胡萝卜素干品2.27g/L,同时具有生产工艺流程简单、易控、成本低的优点。耐辐射球菌属于原核生物,菌株繁殖快,生产周期更短,适合于大规模的生产。

    基于FRET的DNA损伤检测方法及功能蛋白

    公开(公告)号:CN115046973A

    公开(公告)日:2022-09-13

    申请号:CN202210657900.8

    申请日:2022-06-12

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: G01N21/64 C07K19/00 C12N9/50

    摘要: 本发明公开了一种基于FRET的DNA损伤检测方法及功能蛋白。利用耐辐射奇球菌中的阻遏蛋白DdrO,将黄色荧光蛋白eYFP和青色荧光蛋白eCFP分别连接于其N端和C端,构建出具有荧光能量转移特性的功能蛋白YDC;同时利用能特异性切割DdrO的耐辐射奇球菌损伤响应调控因子PprI蛋白,将PprI蛋白的91号位点的天冬氨酸(D)突变为丙氨酸(A)后得到蛋白PprI‑D91A,以降低其不存在单链DNA时的酶切活性;当体系中存在损伤产生的单链DNA时,PprI‑D91A能够快速地酶切YDC,在440 nm激发光的作用下,YDC发射光的480 nm峰升高且530 nm峰下降;同时还提供了YDC和PprI‑D91A的氨基酸序列以及检测DNA损伤的反应体系。本发明对开发新型分子生物学的工具具有重要指导意义。

    一种缺口DNA偏好性高保真聚合酶及其应用

    公开(公告)号:CN111849939A

    公开(公告)日:2020-10-30

    申请号:CN202010687851.3

    申请日:2020-07-16

    申请人: 浙江大学

    摘要: 本发明公开了一种缺口DNA偏好性高保真聚合酶及其应用。本发明公开了源自耐辐射奇球菌DNA聚合酶I的Klenow片段(KlenDr)的高保真聚合特性具有非3’-5’校正外切活性依赖的特点,且具有结合缺口DNA的偏好性,不同于现有的商用高保真聚合酶。由于KlenDr对缺口DNA底物特异的亲和性,不会切除上游引物的3’末端,且很少替换下游核苷酸链,结合其高保真聚合特性,本发明提出KlenDr在核酸扩增,DNA缺口填充等基因工程操作以及测序文库的构建中将具有十分广阔的应用前景。

    一种耐辐射奇球菌转录抑制因子

    公开(公告)号:CN104211788A

    公开(公告)日:2014-12-17

    申请号:CN201410262939.5

    申请日:2014-06-13

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C07K14/195

    CPC分类号: C07K14/195

    摘要: 本发明公开了一种耐辐射奇球菌转录抑制因子。所述转录抑制因子可以在体外结合耐辐射奇球菌内含RDRM位点的DNA损伤应急响应与修复基因启动子。结合反应缓冲液成分为100-200mMNaCl、10-50mMTris-HCl8.0、5-10mMMgCl2,反应温度为30℃。该转录抑制因子可以在体内抑制DNA损伤应急响应与修复基因的转录表达。本发明发现了一种迄今为止未曾被报道过的转录抑制因子,对DNA损伤修复的研究具有重要意义。

    一种血鹦鹉鱼幼鱼的褪黑方法

    公开(公告)号:CN103355233A

    公开(公告)日:2013-10-23

    申请号:CN201310289525.7

    申请日:2013-07-10

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: A01K61/00

    CPC分类号: Y02A40/81

    摘要: 本发明公开了一种血鹦鹉鱼幼鱼的褪黑方法,包括:采用60Co-γ射线对鱼苗进行辐射处理,处理完成后将鱼苗置于鱼池中饲养;其中,辐射剂量的范围为10~50Gy。本发明利用核技术60Co-γ辐射来改良血鹦鹉鱼的生长特性,能够加速血鹦鹉鱼的幼鱼褪黑速度,幼鱼完全褪黑的时间最多可提前80天左右。另外,本发明通过辐照处理,能够使血鹦鹉鱼生长周期加快,在同等的养殖条件生长下,辐射处理过的血鹦鹉鱼生长周期可提高2-3周,一年可增加二层左右的产量。

    提高耐辐射奇球菌类胡萝卜素产量的方法

    公开(公告)号:CN101402987B

    公开(公告)日:2011-10-26

    申请号:CN200810121883.6

    申请日:2008-10-21

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12P23/00 C12R1/01

    摘要: 本发明提供一种提高耐辐射奇球菌类胡萝卜素产量的方法,是将发酵培养到稳定早期的耐辐射奇球菌通过光照诱导处理和后培养,诱导菌体类胡萝卜素大量合成,以提高其产量。本发明的菌体经过离心分离,低温有机溶剂提取,所获得的类胡萝卜素产量比未经光照处理的提高了25%以上。本发明方法设计合理,条件温和、操作简便,可用于有效提高发酵法生产类胡萝卜素的产量。