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公开(公告)号：CN117802024A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311856029.5
申请日：2023-12-29
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/75 , C12N9/22 , C12N15/50 , C12N15/113 , A61K39/215 , A61K39/225 , A61P31/14 , A61P37/04 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了三种孢子蛋白融合稳定展示猪腹泻病毒三种关键抗原重组枯草芽孢杆菌及其构建方法和应用，所述重组菌以枯草芽孢杆菌为出发菌株，将包含Cas9蛋白的表达载体PBE‑Cas9以及优化的PDCOV、TGEV和PEDV三种猪腹泻病毒的关键抗原部分S1蛋白片段合成基因PDCOV‑S1、TGEV‑S1和PEDV‑S1中的任意一种或者多种，所述PDCOV‑S1、TGEV‑S1和PEDV‑S1其序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示。本发明将上述两种载体结合转入枯草芽孢杆菌中构建三种具有猪腹泻病毒抗原位点的重组枯草芽孢杆菌，并通过小鼠实验初步验证重组菌具有良好的免疫效力。本发明为猪腹泻病毒新型口服疫苗的研究提供了研究基础。
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公开(公告)号：CN116411006A
公开(公告)日：2023-07-11
申请号：CN202211725678.7
申请日：2022-12-30
摘要： 本发明公开了一种野生型枯草芽孢杆菌基因编辑系统及其构建与应用，所述基因编辑系统包括PBE‑Cas9穿梭质粒载体，以及PTN‑CotB‑YFP穿梭质粒载体、pTN‑CotA‑RFP穿梭质粒载体和pTC‑CgeA‑GFP穿梭质粒载体三种中的任一一种或者多种，其序列分别为SEQ ID NO.1‑4所示。本发明的多质粒基因编辑系统可以同时编辑野生型枯草芽孢杆菌JCL16基因组中2‑3个基因，具有连续、精准和快速的基因编辑能力，采用该基因编辑系统实现多个荧光蛋白基因在野生型枯草芽孢杆菌JCL16孢子表面协同共表达。本发明为以枯草芽孢杆菌孢子作为纳米载体研发新型生物疫苗等生物制品提供基因编辑技术和材料。
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公开(公告)号：CN114292867A
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202111680804.7
申请日：2021-12-31
申请人： 淮阴工学院
摘要： 本发明公开了芽孢杆菌表达载体及其构建方法和应用，该表达载体以pTC、pTN、pBE、pTK为出发载体将不同的启动子PlacI‑IPTG、Psrf、P43、PrepU与终止子T1T2组合分别插入上述载体中，构建四种表达载体。本发明以绿色荧光蛋白和β‑半乳糖苷酶作为报告基因明确该系列表达载体启动异源基因特征，四种表达载体均能在芽孢杆菌宿主中成功表达绿色荧光蛋白和β‑半乳糖苷酶基因，本发明构建的四种表达载体采用强启动子与强的转录终止子进行组合表达，可以在芽孢杆菌中稳定表达的转录出来的RNA，可以进行外源基因的高表达、特异性表达。
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公开(公告)号：CN113980991B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202111297649.0
申请日：2021-11-04
摘要： 本发明公开了大肠杆菌‑芽孢杆菌穿梭质粒载体及其构建方法和应用，该穿梭质粒载体包括pTC、pBE、pTN和pTK中的任意一种，序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示。本发明从PUC19出发获得大肠杆菌复制起点和氨苄青霉素抗性的基因片段，从pMarA出发获得芽孢杆菌温敏复制起点和卡那霉素抗性和红霉素抗性的基因片段，从pBEST502和pSG1164中分别获得新霉素抗性基因和氯霉素抗性基因，经过酶切和酶链接构建了大肠杆菌芽孢杆菌穿梭质粒载体。本发明中的四个质粒载体可在不同芽孢杆菌中穿梭、共存以及消除，避免质粒发生漂移对环境产生污染，可潜在应用于外源蛋白的表达，实现对芽孢杆菌基因组DNA的编辑。
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公开(公告)号：CN114292867B
公开(公告)日：2024-01-23
申请号：CN202111680804.7
申请日：2021-12-31
申请人： 淮阴工学院
摘要： 糖苷酶基因，本发明构建的四种表达载体采用强本发明公开了芽孢杆菌表达载体及其构建 启动子与强的转录终止子进行组合表达，可以在方法和应用，该表达载体以pTC、pTN、pBE、pTK为 芽孢杆菌中稳定表达的转录出来的RNA，可以进出发载体将不同的启动子PlacI‑IPTG、Psrf、 行外源基因的高表达、特异性表达。P43、PrepU与终止子T1T2组合分别插入上述载体中，构建四种表达载体。本发明以绿色荧光蛋白和β‑半乳糖苷酶作为报告基因明确该系列表达(56)对比文件Yuxiang Xu等.Enhanced production ofiturin A in Bacillus amyloliquefaciens bygenetic engineering and mediumoptimization《.Process Biochemistry》.2020,第90卷全文.陈坤;黎明;高伟;路福平.以绿色荧光蛋白为报告基因的原核启动子检测体系构建.生物技术通报.2008,(第02期),全文.梁晓梅等.大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的构建及碱性蛋白酶的表达.生物技术通报.2011,(第06期),全文.
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公开(公告)号：CN117802023A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311856017.2
申请日：2023-12-29
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/75 , C12N15/34 , C12N9/22 , C12N15/113 , A61K39/12 , A61K39/39 , A61P31/20 , A61P37/04 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌及其构建方法和应用，本发明重组菌是通过基因编辑和化学转化的方法将非洲猪瘟p72、p30和p54蛋白整合到解淀粉芽孢杆菌CPLK1314孢子表面，然后将重组菌分别以及混和免疫小鼠，该重组菌不仅是生物安全的益生菌，还可以诱导小鼠的体液和细胞免疫，进而诱导针对非洲猪瘟抗原的特异性抗体的产生。本研究发明的重组解淀粉芽孢杆菌，不仅为非洲猪瘟口服疫苗的研究提供理论基础，还提供了研发新思路。
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公开(公告)号：CN115975899A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202211726230.7
申请日：2022-12-30
申请人： 淮阴工学院
摘要： 本发明公开了具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程菌及其构建方法和应用，基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株，将编码蛋白酶yow、AprE、NprE的信号肽核苷酸序列分别与优化改造的编码抗原P72的核苷酸序列进行融合构成新的融合基因SyP72、SAP72、SNP72转化到解解淀粉芽孢杆菌中得到三株基因工程菌株。本发明构建的最优工程菌株在优化的培养基中进行发酵培养，采用SDS‑PAGE电泳和Western Blot在发酵液中成功检测到重组抗原P72表达，蛋白含量达到4.5mg/mL；经口服和灌胃实验，表达的重组抗原P72能有效刺激小鼠P72抗体的产生。
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公开(公告)号：CN116463370A
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202211742436.9
申请日：2022-12-30
摘要： 本发明公开了用于贝莱斯芽孢杆菌HCK2孢子表面表达的三质粒基因组编辑系统及其构建与应用，该基因编辑系统包括编辑载体pTN‑Cas9，以及编辑载体pTK‑GFP‑CotB、pTC‑RFP‑CgeA中的任意一种或者多种，其序列分别为SEQ ID NO.1‑3所示。本发明基因编辑系统可以精准、快速对贝莱斯芽孢杆菌HCK2基因组中的孢子蛋白基因进行同时编辑，且可通过高温处理消除质粒进行连续编辑，采用该编辑系统实现了对贝莱斯芽孢杆菌HCK2基因组进行编辑，实现两个荧光蛋白基因在孢子表面协同共表达，该基因编辑系统的构建为利用贝莱斯芽孢杆菌孢子作为纳米载体研制新型的生物制品奠定基础。
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公开(公告)号：CN113980991A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202111297649.0
申请日：2021-11-04
摘要： 本发明公开了大肠杆菌‑芽孢杆菌穿梭质粒载体及其构建方法和应用，该穿梭质粒载体包括pTC、pBE、pTN和pTK中的任意一种，序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示。本发明从PUC19出发获得大肠杆菌复制起点和氨苄青霉素抗性的基因片段，从pMarA出发获得芽孢杆菌温敏复制起点和卡那霉素抗性和红霉素抗性的基因片段，从pBEST502和pSG1164中分别获得新霉素抗性基因和氯霉素抗性基因，经过酶切和酶链接构建了大肠杆菌芽孢杆菌穿梭质粒载体。本发明中的四个质粒载体可在不同芽孢杆菌中穿梭、共存以及消除，避免质粒发生漂移对环境产生污染，可潜在应用于外源蛋白的表达，实现对芽孢杆菌基因组DNA的编辑。
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