一种构建和生产限制性内切酶Ecop15I的方法

    公开(公告)号:CN101538579B

    公开(公告)日:2013-12-04

    申请号:CN200810019839.4

    申请日:2008-03-19

    摘要: 本发明提供了一种构建和生产重组III型限制性内切酶Ecop15I的方法。III型限制性内切酶Ecop15I在基因表达系列分析具有重要作用,而传统方法难以实现大规模的表达和纯化。本发明利用基因重组的方法,人工合成融合有纯化标签的Ecop15I的2个亚基片段,分别克隆到原核共表达载体pACYCDuet-1的两个独立表达单元中。在IPTG诱导下,具有独立的T7启动子、核糖体结合位点、起始密码子和终止密码子表达单元在大肠杆菌中,同时独立表达酶的2个亚基,并折叠成具有生物学活性的复合结构。再通过Ni亲和层析和DEAE离子交换层析的方法进行纯化。最终得到了产量较高,活力和稳定性较好的重组型Ecop15I内切酶,从而为大规模生产提供了有效的途径。

    一种修饰的小干扰核酸及其制备方法

    公开(公告)号:CN101851619A

    公开(公告)日:2010-10-06

    申请号:CN200910081145.8

    申请日:2009-04-03

    申请人: 北京大学

    发明人: 梁子才 杜权

    IPC分类号: C12N15/11 A61K48/00

    摘要: 本发明提供了一种修饰的小干扰核酸,其包括第一片段和第二片段,并且所述第一片段和第二片段能够形成双链区域,所述第一片段包括至少一个连续的CA序列或UG序列,所述第二片段包括至少一个与所述第一片段的CA序列或UG序列互补的连续的UG或CA序列,所述第一片段的CA序列或UG序列与所述第二片段的UG序列或CA序列形成CA/UG位点,其特征在于,所述CA/UG位点中的至少一个核苷酸是经过修饰的,该修饰使修饰的小干扰核酸的稳定性高于未修饰的小干扰核酸。本发明增加了修饰后的小干扰核酸的血清稳定性的目的,并且降低了修饰后的小干扰核酸分子的潜在的细胞毒性,以及修饰对小干扰核酸的生物学活性的影响。