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公开(公告)号：CN105907735A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610286036.X
申请日：2016-05-03
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1217 , C12P13/10 , C12Y207/02008
Abstract: 本发明公开了一种催化效率与热稳定性提高的N?乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5?5)的N?乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第91位由苯丙氨酸F突变为组氨酸H。本发明所述的N?乙酰谷氨酸激酶突变体的催化效率是野生型的2.12倍，在37℃下的半衰期是突变前的2.78倍。本发明所得N?乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L?精氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105838689A
公开(公告)日：2016-08-10
申请号：CN201610285765.3
申请日：2016-05-03
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1217 , C12Y207/02008
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的N?乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。将来源于钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5?5)的N?乙酰谷氨酸激酶的基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第74位由异亮氨酸I突变为缬氨酸V。本发明所述的N?乙酰谷氨酸激酶突变体的催化效率(Kcat/Km)由野生型的513mM?1min?1提高到843mM?1min?1，是突变之前的1.64倍，并且此突变体的热稳定性也有所提高。本发明所得N?乙酰谷氨酸激酶突变体更有利于精氨酸的生产需求，为高效合成L?精氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103215198B
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201310043508.5
申请日：2013-02-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 利用重组钝齿棒杆菌以葡萄糖为底物一步法合成γ-氨基丁酸的方法属于基因工程和酶工程领域。本发明应用基因工程方法，将钝齿棒杆菌SYPA5-5基因argB敲除，获得能够积累谷氨酸的安全菌株钝齿棒杆菌E01；从L.Plantarum GB01-21克隆谷氨酸脱羧酶基因于钝齿棒杆菌E01中表达，获得以葡萄糖为底物直接合成γ-氨基丁酸的重组钝齿棒杆菌C.crenatum E01/pGAD。重组菌发酵液γ-氨基丁酸积累量达13.98g/L。此发明成功整合谷氨酸和γ-氨基丁酸代谢途径，实现葡萄糖到γ-氨基丁酸一步法生产，简化制备途径，降低成本，提高安全性，为氨基酸的高效低成本制备提供崭新的思路。
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公开(公告)号：CN105418461A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201510819440.4
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
IPC: C07C277/08 , C07C279/14
CPC classification number: C07C277/08 , C07C279/14
Abstract: 本发明提供了一种L-精氨酸的提取工艺，所述L-精氨酸是通过微生物发酵制得，包括以下步骤：1)L-精氨酸发酵液通过陶瓷膜过滤除菌，再经超滤膜过滤除蛋白；2)膜过滤液进入连续离子交换系统，经阳离子交换树脂吸附，氨水洗脱，得到的L-精氨酸的洗脱液；3)经连续离子交换后经驱氨，脱色，浓缩结晶，离心分离，烘干后得到L-精氨酸成品，L-精氨酸总收率为80％以上，产品纯度95％以上。
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公开(公告)号：CN105296523A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510819766.7
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种信号肽及其在利用淀粉产γ-氨基丁酸重组菌中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过分子克隆技术和基因工程技术将去除N端信号肽的α-淀粉酶的融合前期筛选出一条高效分泌α-淀粉酶的信号肽SEQ ID N0.1，构建表达载体，在高产γ-氨基丁酸的菌种中表达。首次报道，以该信号肽介导分泌α-淀粉酶的重组菌天津短杆菌SW07-1/pGAD-pMSPamy能利用廉价淀粉发酵生产γ-氨基丁酸，最优碳源添加条件下5L发酵罐上产量为46.9g/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105296456A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510819438.7
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/005 , C12Y401/01015
Abstract: 本发明公开了一种酸性稳定的谷氨酸脱羧酶(GAD)的pH稳定性向中性范围偏移的突变体，属于生物工程领域。将来源于植物乳杆菌GB01-21谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶编码基因进行定点突变，主要将第89位的谷氨酸E分别突变为精氨酸R或丙氨酸A。谷氨酸脱羧酶突变体分别在pH6.5时的相对酶活由原来的38％提高至72％或84％，在中性pH范围内的酶活稳定性显著提高。以重组大肠杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时，GABA产量达到260g/L,产率为99.6％；而以重组谷氨酸棒杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时，GABA产量达到116g/L,产率为99.5％。本发明减少了发酵设备在酸性条件下的损耗，为高效合成γ-氨基丁酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105255849A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510815792.2
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/005 , C12Y401/01015
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的谷氨酸脱羧酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.1所示的氨基酸的基础上，将第172位酪氨酸突变成半胱氨酸。本发明得到的突变体在大肠杆菌中表达，摇瓶发酵24h后酶活为28.6U/mL，突变酶活提高了81％，底物亲和力较原始酶降低53％，同时比酶活提高83％，在35℃下酶的半衰期由16h延长至24h。在大肠杆菌中表达该重组酶，并全细胞转化谷氨酸18h可得到283.8g/L的γ-氨基丁酸；在谷氨酸棒菌中表达该重组酶，并全细胞转化谷氨酸18h可得到126.7g/L的γ-氨基丁酸。本发明表明172位氨基酸残基对酶的催化作用和稳定性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN103602624B
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201310342415.2
申请日：2013-08-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明从B.amyloliqefaciens B10-127中克隆出参与2,3-丁二醇合成途径中辅酶循环再生的关键酶基因3-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)和3-羟基-2-丁酮还原酶(acr)，并将该基因与穿梭表达质粒pMA5-HpaII连接，成功构建了携带基因gapdh和acr基因的穿梭表达质粒pMA5-HpaII-acr-HapII-gapdh，并转入解淀粉芽孢杆菌B10-127中，获得加强gapdh和acr基因表达的解淀粉芽孢杆菌pMA5-HpaII-acr-HapII-gapdh／B.amyloliquefaciens。原始菌株相比，重组菌2,3-丁二醇产量提高了14.7％，副产物如3-羟基-2-丁酮、乳酸和丁二酸的积累分别降低65.6％、43.8％和42.4％，且发酵周期有所缩短。通过补料流加发酵，2,3-丁二醇产量达到121.3g／L。
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公开(公告)号：CN104531747A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410748914.6
申请日：2014-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 通过引入PHB代谢途径到Corynebacterium crenatum SYPA中，从而高产L-精氨酸，属于基因工程和生物工程领域。该发明酶切质粒pBHR68获得合成PHB的操纵子，与棒杆菌表达载体pDXW-10连接，并将其在C.crenatum SYPA中表达，为国内外首次通过引入PHB代谢途径在野生型钝齿棒杆菌中高产L-精氨酸。对构建的基因工程菌株进行酶活力测定及胞内辅酶水平研究证明C.crenatum SYPA/pDXW-10-phbCAB合成L-精氨酸的能力得到加强。最终在30℃，pH 7.0及600rpm条件下，C.crenatum SYPA/pDXW-10-phbCAB在5-L发酵罐发酵96h可产得43.21 g/L的L-精氨酸，为国内外首次通过引入PHB代谢途径到菌体内，调节胞内代谢网络，最终实现高产L-精氨酸的目的，为微生物工业化生产L-精氨酸提供了基础。
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公开(公告)号：CN104480137A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410748908.0
申请日：2014-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 一株产酪氨酸酶重组钝齿棒杆菌的构建及其在黑色素生产中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过本实验室前期筛选得到的被命名为Streptomyces kathirae SC-1的菌株，利用分子技术克隆了以来自Streptomyces kathirae SC-1的酪氨酸酶基因(melC1C2)，构建重组表达载体pXMJ19-melC1C2，并将其电击转化到C.crenatum SYPA5-5，成功构建了基因工程菌C.crenatum SYPA5-5/pXMJ19-melC1C2。对构建的基因工程菌进行酶活测定，发现重组菌的酶活为61.5U/ml，而原始菌株C.crenatum SYPA5-5没有酶活。以L-酪氨酸为底物进行全细胞转化，黑色素产量为3.49g/L。本发明为首次将酪氨酸酶克隆到重组钝齿棒杆菌并用于黑色素的生产。
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