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公开(公告)号：CN112695006A
公开(公告)日：2021-04-23
申请号：CN202110163604.8
申请日：2021-02-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种表达D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明通过从Dorea sp.CAG317和Clostridium cellulolyticum H10中获得D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶，以枯草芽孢杆菌168作为底盘细胞，pMA5为表达载体构建重组枯草芽孢杆菌，实现该酶的表达。通过强组成型启动子筛选，成功将该重组菌在弱酸条件下催化效率提高至单酶重组菌株的12‑13倍，重组菌株B.subtilis 168/pMA5‑spovG‑DS‑srfA‑RC在30分钟内可产生244.3g/L的D‑阿洛酮糖，转化率为32.6％并消除了反应溶液褐变现象。
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公开(公告)号：CN108103038B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201711352466.8
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成L‑苯甘氨酸的单细胞工厂及其构建与应用，属于微生物技术领域。本发明首先实现了来源于Bacillus cereus的亮氨酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达，并通过定点突变得到还原特性显著提高的突变体N71S，并将该突变酶与甲酸脱氢酶突变体在大肠杆菌中共表达，形成胞内原位辅因子NADH循环体系，通过启动子和RBS序列优化控制甲酸脱氢酶突变体的表达量，成功构建了重组大肠杆菌单细胞工厂，并利用单细胞工厂进行全细胞转化制备L‑苯苷氨酸，该方法转化过程简单快捷，成本低廉，没有副产物，利于分离纯化，在5L发酵罐中转化4h，L‑苯甘氨酸产量可达105.7g/l，转化率为93.3％，L‑苯苷氨酸的时空产率为26.3g/L·h，为L‑苯苷氨酸的工业化生产提供了一种实际有效的策略。
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公开(公告)号：CN110791494B
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN201911191601.4
申请日：2019-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种天冬氨酸酶突变体、包含天冬氨酸酶突变体的重组表达载体和重组菌及应用，属于基因工程技术领域；所述天冬氨酸酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明的天冬氨酸酶突变体是在天冬氨酸酶(氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示)的基础上，将第427位谷氨酸突变成了谷氨酰胺。本发明通过将天冬氨酸酶的第427位氨基酸残基突变成谷氨酰胺，改变了活性位点附近的极性环境，更有利于底物反应时的氨供给，从而提高酶活，加强了该酶合成β‑氨基酸的能力，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN111718884A
公开(公告)日：2020-09-29
申请号：CN202010617003.5
申请日：2020-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了BVG90_08615基因缺失的粘质沙雷氏菌工程菌，属于生物技术领域。本发明提供了一株可高产灵菌红素的粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615，此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615是通过敲除粘质沙雷氏菌JNB5-1中编码转录调控因子BVG90_08615的基因获得的，将此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615接种至LB液体培养基中发酵24h，即可使发酵液中灵菌红素的产量高达58.68mg/L，是野生型粘质沙雷氏菌JNB5-1的1.15倍。
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公开(公告)号：CN111705027A
公开(公告)日：2020-09-25
申请号：CN202010508135.4
申请日：2020-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用微生物发酵生产乙偶姻的方法，属于生物工程技术领域。本发明构建的基因工程菌株B.subtilis 6-7ΔacuBΔacoBΔrex于5L发酵罐中培养96h得到67.5g·L-1的乙偶姻，乙偶姻的生产效率提高至0.7g·L-1·h-1，乙偶姻摩尔得率为0.92，相对于原始菌株B.subtilis 6-7，乙偶姻摩尔得率提高了37％。此外，基因工程菌株B.subtilis 6-7ΔacuBΔacoBΔrex不含抗性基因，得到的产物可直接用于食品加工中，安全高效。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111690624A
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN202010501634.0
申请日：2020-06-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用微生物合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的方法，属于基因工程技术领域。本发明所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明所述突变体是在肠膜明串珠菌来源的蔗糖磷酸化酶的基础上，进行定点突变实现蔗糖磷酸化酶酶活的提高的，将突变体酶在大肠杆菌中表达，并用作全细胞催化剂生产2-O-α-D-甘油葡糖苷，在5L发酵罐水平，可短时间内生产大量的2-O-α-D-甘油葡糖苷，这有利于扩大蔗糖磷酸化酶生产2-O-α-D-甘油葡糖苷工业化应用前景，实现大规模工业化应用。
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公开(公告)号：CN111690585A
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN202010618499.8
申请日：2020-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了rcsB基因缺失的重组粘质沙雷氏菌及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一株可高产灵菌红素的粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔrcsB，此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔrcsB是通过敲除粘质沙雷氏菌JNB5-1中编码转录调控因子RcsB的基因获得的，将此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔrcsB接种至LB液体培养基中发酵24h，即可使发酵液中灵菌红素的产量高达116.48mg/L，是野生型粘质沙雷氏菌JNB5-1的2.28倍。
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公开(公告)号：CN109370993B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201811430826.6
申请日：2018-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的苯乙烯单加氧酶突变体及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。此突变体是通过将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的苯乙烯单加氧酶的第305位氨基酸由天冬氨酸突变为甘氨酸得到的；此突变体的酶活可达99.12±1.5U/mL、Kcat/Km可达268.2±19.5mM‑1·min‑1，分别较野生型提高了1.7倍、3.4倍；此突变体的温度稳定性以及pH稳定性较野生型有了明显的提高，将此突变体在60℃下保持24h依旧可残留59％的酶活，在pH5.0的状态下保持12h依然可残留71％的酶活。
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公开(公告)号：CN108070581B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201711354029.X
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体及其应用，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQIDN0.2所示的氨基酸的基础上，将第484位亮氨酸突变成甲硫氨酸。因为表达包涵体问题将构建的重组载体L484M‑pET28aN端起始密码子后一段冗余序列删除得到重组质粒L484M‑pET28a‑M。本发明得到的突变体在大肠杆菌中表达，经纯化得到的酶做酶学性质研究，pH4.5、pH5.0、pH6.5下相对酶活分别提高了40％、36％、42％。L484M和未突变酶在相同酶活不同pH条件下进行全细胞转化1h取样测定产量，在最适pH5.5条件下，产量提高48.5％。本发明表明484位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN111593038A
公开(公告)日：2020-08-28
申请号：CN202010584474.0
申请日：2020-06-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种稳定性提高的谷氨酰胺酶突变体，属于酶工程和微生物工程技术领域，本发明提供的谷氨酰胺酶突变体是将罗伊氏乳杆菌来源的谷氨酰胺酶亲本的第37位的酪氨酸突变为了半胱氨酸，谷氨酰胺酶突变体突变体在44℃时半衰期达到12h，其稳定性相对于突变前的谷氨酰胺酶提高了50％。
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