一种高效表达磷脂酶D的方法及应用

    公开(公告)号:CN118931874A

    公开(公告)日:2024-11-12

    申请号:CN202411100911.1

    申请日:2024-08-12

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明涉及一种高效表达磷脂酶D的方法及应用,属于基因工程技术领域。本发明通过表达元件共优化策略,实现了磷脂酶D的高效分泌表达,胞外酶活达到4055.9U/mL,相较于未改造菌株,酶活提高了43.6倍。本发明还根据此表达体系,通过整合位点筛选和多拷贝整合策略,首次实现了磷脂酶D的整合表达,整合菌株胞外酶活达到392.9U/mL。本发明的磷脂酶D具有良好的催化活性,能在水相条件下以大豆卵磷脂为底物高效合成磷脂酸。重组菌株酶活稳定性好、发酵周期短、催化效率高,为大规模工业化生产奠定了基础,表明该菌株在磷脂类衍生物的生物合成领域具有潜在应用价值。同时,整合菌株避免了发酵过程中抗生素的添加,拓宽了菌株的应用范围。

    调控CapBCA单体表达水平的菌株及在聚谷氨酸生产的应用

    公开(公告)号:CN114369561B

    公开(公告)日:2024-07-02

    申请号:CN202210026910.1

    申请日:2022-01-11

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明公开了一种调控CapBCA单体表达水平的菌株及在聚谷氨酸生产中的应用,本发明将天然生产菌地衣芽孢杆菌的γ‑聚谷氨酸合成酶的基因簇capBCA克隆至一株高产谷氨酸的谷氨酸棒杆菌F343中进行外源表达,在此基础上,利用不同数量的lacO调控合成酶基因簇各基因的表达水平,获得的重组菌株所生产的γ‑PGA产量为3.63~5.84g/L,产率为0.15~0.27g/L/OD600。还发现单独提高CapB和CapC的表达强度,及适度表达CapA均有利于γ‑PGA的合成,而且CapC对于γ‑PGA的合成发挥着至关重要的作用,其表达水平对γ‑PGA产量的影响贡献度可达68.24%。结果有助于深入了解γ‑PGA合成酶单体的功能,以及对γ‑PGA合成的影响规律。