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公开(公告)号：CN105296444B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201510878108.5
申请日：2015-12-04
申请人： 郑州大学
摘要： 本发明公开了一种重组乙酰胆碱酯酶在甲醇毕赤酵母中表达的中试发酵工艺：首先将活化的重组毕赤酵母菌株进行培养，制得发酵工作种子液，然后将该其转接到基础盐培养基中，氨水或磷酸调整发酵体系pH后接种，并加入适量微量元素溶液，生长至一定阶段后，加入甘油与微量元素的混合溶液，最后流加含微量元素的甲醇溶液进行蛋白诱导发酵，发酵过程中温度持续维持在29℃，DO维持在20%以上，甲醇诱导120h，整个发酵过程结束。本发明的发酵工艺简单，操作方便，蛋白可溶性表达且表达量高，酶活性高，但蛋白表达成本却较低。本发明首次在酵母表达系统内对乙酰胆碱酯酶进行了大规模的发酵罐表达，为AChE的大规模生产和最终应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105296444A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510878108.5
申请日：2015-12-04
申请人： 郑州大学
摘要： 本发明公开了一种重组乙酰胆碱酯酶在甲醇毕赤酵母中表达的中试发酵工艺：首先将活化的重组毕赤酵母菌株进行培养，制得发酵工作种子液，然后将该其转接到基础盐培养基中，氨水或磷酸调整发酵体系pH后接种，并加入适量微量元素溶液，生长至一定阶段后，加入甘油与微量元素的混合溶液，最后流加含微量元素的甲醇溶液进行蛋白诱导发酵，发酵过程中温度持续维持在29℃，DO维持在20%以上，甲醇诱导120h，整个发酵过程结束。本发明的发酵工艺简单，操作方便，蛋白可溶性表达且表达量高，酶活性高，但蛋白表达成本却较低。本发明首次在酵母表达系统内对乙酰胆碱酯酶进行了大规模的发酵罐表达，为AChE的大规模生产和最终应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104593378A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510004144.9
申请日：2015-01-06
申请人： 郑州大学
IPC分类号： C12N15/16 , C07K14/575 , C12N15/70
摘要： 本发明属于基因工程制药技术领域，具体涉及一种类人胸腺肽α1基因序列、类人胸腺肽α1及其制备方法。该肽氨基酸序列为，SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEQ。该肽的制备方法包括引物设计、PCR扩增、酶切、自连接、构建重组质粒表达载体、转化、筛选、重组质粒载体的改造、再转化、诱导表达、串联体类人胸腺肽α1的纯化、切割获得类人胸腺肽α1蛋白单体等步骤。本发明所提供的类人胸腺肽α1单体与人胸腺肽α1结构类似，生物学功能相同，可以替代人胸腺肽α1的使用。同时本发明所提供的类人胸腺肽α1的制备方法，具有产量高、纯度高、制备方法简便快捷等优点，适于推广应用。
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公开(公告)号：CN104593378B
公开(公告)日：2017-11-03
申请号：CN201510004144.9
申请日：2015-01-06
申请人： 郑州大学
IPC分类号： C12N15/16 , C07K14/575 , C12N15/70
摘要： 本发明属于基因工程制药技术领域，具体涉及一种类人胸腺肽α1基因序列、类人胸腺肽α1及其制备方法。该肽氨基酸序列为，SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEQ。该肽的制备方法包括引物设计、PCR扩增、酶切、自连接、构建重组质粒表达载体、转化、筛选、重组质粒载体的改造、再转化、诱导表达、串联体类人胸腺肽α1的纯化、切割获得类人胸腺肽α1蛋白单体等步骤。本发明所提供的类人胸腺肽α1单体与人胸腺肽α1结构类似，生物学功能相同，可以替代人胸腺肽α1的使用。同时本发明所提供的类人胸腺肽α1的制备方法，具有产量高、纯度高、制备方法简便快捷等优点，适于推广应用。
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公开(公告)号：CN105504018A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201610019890.X
申请日：2016-01-13
申请人： 郑州大学
摘要： 本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种LAG-3亲和肽N13、制备方法及其在抗肿瘤方面的应用。该亲和肽包括12个氨基酸，分子量为1634.8Da，其序列具体DDFRVWWPNFPR。该肽可采用Fmoc固相多肽合成法制备，同时该肽可作为肿瘤治疗中的药物应用。本申请以真核蛋白rhLAG3-Fc为靶分子，以hIgG1-Fc为标签蛋白，通过噬菌体展示肽库高通量技术筛选出了LAG-3胞外段的亲和肽N13。针对该肽，进一步的体外信号通路阻断试验和小鼠荷瘤试验表明，该肽在肿瘤治疗、延长生物体生存期方面具有较好地应用前景，为生物体肿瘤的免疫治疗提供了新的可能。
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公开(公告)号：CN118206765A
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202410136503.5
申请日：2024-01-31
申请人： 郑州大学
摘要： 本发明涉及农药残留检测技术领域，尤其涉及一种用于农药残留检测的磁性荧光金属有机骨架的制备方法及应用，所述制备方法包括以下步骤：将六水氯化铁、醋酸钠、聚乙二醇和乙二醇混合，进行水热反应，得到磁性颗粒Fe3O4；然后将硝酸锌、咪唑‑2‑甲醛、磁性颗粒Fe3O4和荧光染料混合，得到包裹磁性颗粒Fe3O4和荧光的锌金属有机骨架Fe3O4@RhB@ZIF90；最后将乙酰胆碱酯酶与之混合，得到磁性荧光金属有机骨架Fe3O4@RhB@ZIF90@AChE。本发明首次使用磁性荧光金属有机骨架Fe3O4@RhB@ZIF90@AChE应用于农药残留的检测，成本低廉、操作简单，摆脱了传统比色法的色素、样品残渣等干扰，并且本发明反应体系稳定，检测结果更加灵敏、准确。
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公开(公告)号：CN110037996A
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201910359269.1
申请日：2019-04-30
申请人： 郑州大学
IPC分类号： A61K9/50 , A61K31/7105 , A61K47/46 , A61P35/00 , C12N15/113 , C12N15/70
摘要： 本发明公开了一种内源性高表达核酸抗肿瘤药物的大肠杆菌内膜囊泡的制备方法，采用“tRNA支架法”，将miRNA稳定插入到载体中，再将载体转化到大肠杆菌中使其内源性大量表达具有杀伤癌细胞功能的miRNA,使用溶菌酶去除大肠杆菌的细胞外膜和周质成分，得到大肠杆菌原生质体，使用聚碳酸酯膜过滤原生质体，将原生质体打碎，最后采用超速离心的方法纯化并分离原生质体内膜囊泡，得到高表达miRNA的低毒大肠杆菌的内膜囊泡。本发明提供的方法操作简单，生产成本低，可规模化发酵制备，低毒高效。作为一种新型药物载体，将其应用在制备抗肿瘤药物中，可明显抑制非小细胞肺癌的生长，在药物载体领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN105504018B
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201610019890.X
申请日：2016-01-13
申请人： 郑州大学
摘要： 本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种LAG‑3亲和肽N13、制备方法及其在抗肿瘤方面的应用。该亲和肽包括12个氨基酸，分子量为1634.8 Da，其序列具体DDFRVWWPNFPR。该肽可采用Fmoc固相多肽合成法制备，同时该肽可作为肿瘤治疗中的药物应用。本申请以真核蛋白rhLAG3‑Fc为靶分子，以hIgG1‑Fc为标签蛋白，通过噬菌体展示肽库高通量技术筛选出了LAG‑3胞外段的亲和肽N13。针对该肽，进一步的体外信号通路阻断试验和小鼠荷瘤试验表明，该肽在肿瘤治疗、延长生物体生存期方面具有较好地应用前景，为生物体肿瘤的免疫治疗提供了新的可能。
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公开(公告)号：CN105928929A
公开(公告)日：2016-09-07
申请号：CN201610246230.5
申请日：2016-04-20
申请人： 郑州大学
IPC分类号： G01N21/78
CPC分类号： G01N21/78
摘要： 本发明公开了一种农药残留快速检测点卡，包括长条形扁平薄壳状卡体，卡体由卡座和扣合在卡座上的卡盖组成，卡座上间隔排列有多个检测孔，检测孔内自下而上依次叠放有底物膜和酶膜；卡盖由左卡盖和右卡盖组成，在左卡盖上开设有与卡座最左侧的检测孔相对应的对照品加样孔，在右卡盖上开设有与其他检测孔位置分别相对应的多个加样孔；底物膜由滤纸膜、玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜在吲哚乙酸酯中充分浸泡并经冷冻抽干后制成；酶膜由滤纸膜、聚酯纤维素膜或玻璃纤维素膜在乙酰胆碱酯酶液中经充分浸泡并经冷冻抽干后制成。本发明提供的农药残留快速检测点卡使用方便，检测灵敏度更高，可以满足现有国家标准的限量要求，在实际中具有较大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN102174410A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN200910066221.8
申请日：2009-10-22
CPC分类号： Y02E50/16
摘要： 本发明涉及一种微生物及其应用，特别涉及一株高产纤维素酶的土曲霉菌株M11，以及利用此菌综合生物工艺发酵纤维素产乙醇的新方法。本发明的技术包括：获得一株高产耐热耐酸纤维素酶的土曲霉M11，所产纤维素酶在pH2-3，温度60-65℃具有最高酶活；以及利用此菌将产酶、水解糖化与乙醇发酵在一个体系中完成。新的综合生物工艺发酵方法，直接将预处理过的木质纤维素一步发酵产乙醇，实现了综合生物工艺发酵，大大节省了生产成本。
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