公开(公告)号：CN103194460A

公开(公告)日：2013-07-10

申请号：CN201310133843.4

申请日：2013-04-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  张亮 ,  郭素琴 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张瑞 ,  张威

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C07K14/325 ,  A01N47/44 ,  A01P7/04 ,  C12N15/70 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry3Bb的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-2064位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry3Bb（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry3Bb基因（N-Cry3Bb基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN103145815A

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201310070417.0

申请日：2013-03-06

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  张亮 ,  曹振 ,  郭素琴 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  李召虎

IPC: C07K14/325 ,  C07K1/36 ,  C07K1/34 ,  C07K1/30 ,  C07K1/22

Abstract: 本发明公开了一种从抗虫棉种子中纯化Bt毒蛋白的方法。本发明提供的从抗虫棉种子中纯化Bt Cry1Ac蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将抗虫棉种子去壳后进行可溶性总蛋白的提取，得到溶液甲；（2）将所述溶液甲进行60%饱和度的硫酸铵沉淀，离心收集沉淀；（3）溶解步骤（2）得到的沉淀并进行透析，得到溶液乙；（4）将所述溶液乙进行免疫亲和层析，收集与抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体特异结合的蛋白组分，即为Bt毒蛋白；所述抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体为是由杂交瘤Bt2F9 CGMCC No.5162分泌产生的单克隆抗体。本发明具有以下优点：（1）简化了纯化流程，降低了纯化成本；（2）缩短了纯化时间，减少了目的蛋白损失。

公开(公告)号：CN101914152B

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201010259922.6

申请日：2010-08-20

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  谭桂玉 ,  高巍 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种汞离子抗原及其制备方法与应用。本发明提供的方法包括如下步骤：1)活化4-巯基苯基乙酸，得到活化的4-巯基苯基乙酸；2)将步骤1)得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白偶联，得到活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物；3)将步骤2)得到的所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子螯合，得到所述偶联物和汞离子的螯合物，即得到汞离子抗原。本发明的制备汞离子抗原的方法能够方便、快捷地获得汞离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。

公开(公告)号：CN102492671A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110378381.3

申请日：2011-11-24

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  高巍 ,  王敏 ,  孙硕 ,  曹振

IPC: C12N9/10 ,  C07K16/40 ,  G01N33/573

Abstract: 本发明公开了5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶的多肽抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的制备5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶的多肽抗原的方法，包括如下步骤：(1)将载体蛋白与双功能试剂进行反应，得到反应产物I；所述双功能试剂选自4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯、琥珀酰亚胺基4-[p-马来酰亚胺苯基]丁酸盐或N-[ε-马来酰亚胺乙酰基氧]硫代琥珀酰亚胺酯；(2)将所述步骤(1)得到的反应产物I与序列表中序列1所示的多肽进行反应，得到反应产物II，即得到5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原。本发明所提供的制备EPSPS多肽抗原的方法以及由该方法获得的EPSPS多肽抗原，将在EPSPS蛋白的酶联免疫检测中有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN103159778B

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201310102015.4

申请日：2013-03-27

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  郭素琴 ,  崔永亮 ,  王敏 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张亮 ,  张瑞 ,  张威

IPC: C07D493/20 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  G01N33/531 ,  G01N30/60

Abstract: 本发明公开了一种半抗原、其抗原、其相应的抗体及其在检测蒿甲醚中的应用。本发明提供的半抗原为式（Ⅱ）所示的化合物。本发明提供的化合物，可以作为半抗原，该半抗原与载体蛋白偶联后可以得到抗原，用抗原免疫动物，可以得到特异性针对蒿甲醚抗原的抗体。本发明还提供了所述化合物的制备方法，步骤简洁、成本低廉。用本发明方法制备的抗体的特异性好（与蒿甲醚结构类似物的交叉反应率低）、灵敏度高。本发明可用于蒿甲醚药物的大规模检测与质量控制，在蒿甲醚的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。式（Ⅱ）。

公开(公告)号：CN103233021B

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201310133824.1

申请日：2013-04-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  曹振 ,  谭桂玉 ,  张亮 ,  张威 ,  郭素琴 ,  张瑞 ,  何丽珊

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/15 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N15/70 ,  C07K14/325 ,  C07K19/00 ,  A01N57/16 ,  A01N63/02 ,  A61P7/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry35Ba2的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-1269位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry35Ba2（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry35Ba2基因（N-Cry35Ba2基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN103159778A

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201310102015.4

申请日：2013-03-27

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  郭素琴 ,  崔永亮 ,  王敏 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张亮 ,  张瑞 ,  张威

IPC: C07D493/20 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  G01N33/531 ,  G01N30/60

Abstract: 本发明公开了一种半抗原、其抗原、其相应的抗体及其在检测蒿甲醚中的应用。本发明提供的半抗原为式（Ⅱ）所示的化合物。本发明提供的化合物，可以作为半抗原，该半抗原与载体蛋白偶联后可以得到抗原，用抗原免疫动物，可以得到特异性针对蒿甲醚抗原的抗体。本发明还提供了所述化合物的制备方法，步骤简洁、成本低廉。用本发明方法制备的抗体的特异性好（与蒿甲醚结构类似物的交叉反应率低）、灵敏度高。本发明可用于蒿甲醚药物的大规模检测与质量控制，在蒿甲醚的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。式（Ⅱ）。

公开(公告)号：CN101445557B

公开(公告)日：2012-07-25

申请号：CN200810239765.5

申请日：2008-12-16

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  高巍 ,  南铁贵 ,  何素平 ,  赵洪伟 ,  刘威 ,  谭桂玉 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种镉离子抗原及其制备方法与应用。该镉离子抗原，是螯合剂与载体蛋白的偶联物与镉离子形成的络合物。该制备镉离子抗原的方法，包括如下步骤：(1)将螯合剂重氮化，得到重氮化的螯合剂；(2)将载体蛋白与所述重氮化的螯合剂混合，进行偶联反应，得到载体蛋白与重氮化的螯合剂的偶联物；(3)将镉离子与所述偶联物混合，进行络合反应，得到镉离子抗原。利用本发明的方法能方便快捷地获得镉离子抗原，成本低，效果好。用本发明方法制得的完全抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。因此，本发明方法及由该方法获得的抗原在镉离子的酶联免疫检测中会有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN101968481A

公开(公告)日：2011-02-09

申请号：CN201010253926.3

申请日：2010-08-13

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  赵洪伟 ,  南铁贵 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  高巍 ,  王敏 ,  孙硕 ,  李召虎

IPC: G01N33/53 ,  G01N33/566 ,  C07K16/44 ,  C12N5/20 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种检测样品中是否含有重金属的方法及其专用试剂盒。该试剂盒，包括包被原、抗待检重金属的抗体；所述包被原与抗待检重金属的抗体相互作用，且所述包被原与所述抗待检重金属的抗体的亲和力小于所述待检重金属与所述抗待检重金属的抗体的亲和力。实验证明，本发明所提供的制备铜离子非均等竞争ELISA检测法中，包被抗原的制备方法简单，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的包被抗原对ELISA检测灵敏度有明显提高。本发明的制备包被抗原的方法及由该方法建立的铜离子快速免疫检测方法将有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN101885768A

公开(公告)日：2010-11-17

申请号：CN200910083947.2

申请日：2009-05-11

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  高巍 ,  刘威 ,  谭桂玉 ,  何素平 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K14/77 ,  C07K1/113 ,  G01N33/84

Abstract: 本发明公开了一种汞离子抗原及其制备方法与应用。该汞离子抗原的制备方法包括以下步骤：(1)将对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的酸溶液与可溶性亚硝酸盐反应，得到重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸；(2)将上述步骤(1)的重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白反应，得到偶联产物；(3)将上述步骤(2)的偶联产物与汞离子反应，得到汞离子抗原。本发明的汞离子抗原的制备方法能够方便、快捷地获得汞离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的汞离子抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。本发明的制备汞离子抗原的方法及由该方法获得的汞离子抗原在汞离子的酶联免疫检测中将有广阔的应用前景。