一种纳豆芽孢杆菌发酵制备维生素K2的方法

    公开(公告)号:CN114574419A

    公开(公告)日:2022-06-03

    申请号:CN202110734176.X

    申请日:2021-06-30

    Abstract: 一种纳豆芽孢杆菌发酵制备维生素K2的方法,包括下列步骤:步骤1:将纳豆芽孢杆菌菌种接种于发酵培养基进行培养,发酵温度35‑40℃,在发酵过程中,向培养体系中添加其体积0%‑5%的植物油脂进行消泡;步骤2:当菌体生长进入稳定期后,向所述培养体系中加入植物油脂,继续参与发酵直至发酵结束。本发明的植物油脂的添加,会形成有利于维生素K2溶解的微环境,将细胞膜上的维生素K2萃取到油相之中,同时也会同结合蛋白相竞争,而减少维生素K2溶解到水相之中,从而有利于维生素K2的分离。

    一种通过改善细胞膜通透性有效生产维生素K2的方法

    公开(公告)号:CN107475312B

    公开(公告)日:2021-05-18

    申请号:CN201710828555.9

    申请日:2017-09-14

    Abstract: 本发明公开了一种通过改善细胞膜通透性有效生产维生素K2的方法,包括如下步骤:(1)将维生素K2生产菌株接种于斜面培养基中活化;(2)将活化后的菌株接种于添加有非离子型表面活性剂的种子培养基中培养;(3)将得到的培养液继续接种于添加有非离子型表面活性剂的种子培养基中培养;(4)将培养液接入发酵培养基中,100‑700rpm,0.5‑5vvm培养144‑240h;发酵至0‑72h时,添加非离子型表面活性剂,并采用插入式低功率超声间隔处理,定时取样检测细胞和维生素K2浓度。本发明的优点在于:提供了简便、有效、经济的发酵工艺,有效提高维生素K2浓度,提高生产效率,降低生产成本。

    一种基于形态基因共干扰提高柠檬酸发酵生产水平的方法

    公开(公告)号:CN112481290A

    公开(公告)日:2021-03-12

    申请号:CN202011462871.7

    申请日:2020-12-14

    Abstract: 一种基于形态基因共干扰提高柠檬酸发酵生产水平的方法,包括构建几丁质合成酶多基因干扰载体转化黑曲霉获得形态突变菌株、利用黑曲霉形态突变菌株发酵生产柠檬酸;多基因干扰载体的转录受启动子Pgas和Pgmt调控,实现形态基因在不同条件下的顺序调控;Pgas序列为Seq.No.35、Pgmt序列为Seq.No.36;几丁质合成酶多基因干扰基因为几丁质合成酶基因家族的双基因或三基因组合。本发明成功地在黑曲霉中共干扰几丁质合成酶的双基因或三基因,并提供了一种基于形态基因共干扰的方法提高柠檬酸发酵生产水平的方法,为促进丝状真菌发酵生产有机酸及丝状真菌形态基因相互作用等方面提供了有效的方法和新的思路。

    一种异戊烯基转移酶胞外催化制备维生素K2的方法

    公开(公告)号:CN112375790A

    公开(公告)日:2021-02-19

    申请号:CN202011348642.2

    申请日:2020-11-26

    Abstract: 一种异戊烯基转移酶胞外催化制备维生素K2的方法,包括下列步骤:步骤1:对含有NovQ表达菌株的菌液进行超声波处理,然后离心收集上清液得到细胞破碎液;步骤2:将第一反应底物、第二反应底物、MgCl2和细胞破碎液混合得到反应体系;所述第一反应底物为甲萘醌和甲萘醌氢醌中的至少一种,所述第二反应底物是异戊二烯焦磷酸和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸中的至少一种;步骤3:将反应体系置于氮气气氛下,然后在20‑40℃条件下进行反应,反应结束后,将反应液冻干,然后用甲醇萃取,萃取液离心后取上清液,上清液即含有纯化的维生素K2。本发明利用细胞破碎液实现了体外催化合成维生素K2,该法操作简单,排除了全细胞催化过程中的竞争性抑制等不利因素。

    一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用

    公开(公告)号:CN112029678A

    公开(公告)日:2020-12-04

    申请号:CN202010793100.X

    申请日:2020-08-10

    Abstract: 一种复配微生物菌剂及其在姜瘟病防治中的应用,所述复配微生物菌剂为秸秆纤维负载的生物菌剂,该秸秆纤维负载的生物菌剂的制备方法包括向混合菌液中添加秸秆纤维,混合均匀后制成秸秆纤维负载的生物菌剂,秸秆纤维与混合菌液两者之间的质量体积比为1Kg:3-6 L;所述混合菌液为含有解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液。本发明的复配生物菌剂、腐植酸和泥炭土,经过合理组合与应用,对土壤和(或)姜种中病原微生物(如青枯雷尔氏菌等)起到物理隔离、抑制或杀灭作用,同时负载大量功能微生物的秸秆纤维和富含营养元素的栽培基质可调节土壤微生态,改良土壤结构提升地力,增强姜的抗病能力,从而达到防治姜瘟病的目的。

    一种NovQ芳香族异戊烯基转移酶催化合成维生素K2的方法

    公开(公告)号:CN105861582B

    公开(公告)日:2019-04-16

    申请号:CN201610392463.6

    申请日:2016-05-31

    Abstract: 本发明公开一种NovQ芳香族异戊烯基转移酶催化合成维生素K2的方法,(1)维生素K3溶解于乙醇水溶液中,加入NaBH4,在N2保护下,控制温度不超过50℃,搅拌反应至体系呈淡绿色透明液体,中和至pH4.0后,用乙酸乙酯萃取产物,浓缩后冷冻结晶,过滤除清液得到维生素K3氢醌;(2)将维生素K3氢醌和DMAPP加入酶促反应体系中,反应在密闭和N2保护条件下进行,反应完成后,加入Fe3+,去除N2保护,充分氧化后,使用乙酸乙酯萃取得到产物。本发明核心环节为生物酶催化工程技术,利用廉价的维生素K3催化合成高值的维生素K2。本发明生产工艺简单,生产成本低廉,生产过程绿色环保。

    一种提取微生物湿菌体胞内维生素K2粗品的方法

    公开(公告)号:CN105541585A

    公开(公告)日:2016-05-04

    申请号:CN201610080583.2

    申请日:2016-02-03

    CPC classification number: C07C46/10 C07C50/14

    Abstract: 本发明公开一种提取微生物湿菌体胞内维生素K2粗品的方法,包括以下步骤:(1)将发酵液经膜浓缩后离心,得湿菌体;(2)向湿菌体中加入脱水性有机溶剂,搅拌均匀后,进行预处理,离心,吸取上清液,得第一次萃取液;(3)向第一次萃取后的湿菌体中加入有机萃取剂,静置,离心,吸取上清液,得第二次萃取液;(4)重复步骤(3),合并三次萃取液,干燥后,得产物。本发明具有无需干燥设备、节约成本、时间和能源;萃取条件温和,避免了产物的降解和生物活性的丧失;萃取时间短、步骤简单、得率高,提高了生产效率,萃取剂可以回收利用;单一萃取剂即可满足要求,便于后续产品的分离纯化;萃取处理能力大,便于工业化应用的优点。

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