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公开(公告)号：CN114317589B
公开(公告)日：2024-01-16
申请号：CN202011055743.0
申请日：2020-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了SpRYn‑ABE碱基编辑系统在植物基因组碱基替换中的应用。本发明的SpRYn‑ABE碱基编辑系统包括SpRYn、腺嘌呤脱氨酶和esgRNA；所述esgRNA靶向靶点序列；所述esgRNA如式I所示：所述靶点序列转录的RNA‑esgRNA骨架(式I)。通过实验证明：本发明的SpRYn‑ABE碱基编辑系统可对位于植物基因组上的PAM序列为NAN或NCN或NTN的靶点序列中的碱基A进行编辑，实现碱基A到碱基G的替换，大大拓展了可编辑的A的范围。
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公开(公告)号：CN114317518B
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202011055742.6
申请日：2020-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了SpRYn‑CBE碱基编辑系统在植物基因组碱基替换中的应用。本发明的SpRYn‑CBE碱基编辑系统包括SpRYn、PmCDA1、UGI和sgRNA；所述sgRNA靶向靶点序列。通过实验证明：本发明的SpRYn‑CBE碱基编辑系统可对位于植物基因组上的PAM序列为NAN或NCN或NTN的靶点序列中的碱基C进行编辑，实现碱基C到碱基T的替换，大大拓展了可编辑的C的范围。
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公开(公告)号：CN116478987A
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310298314.3
申请日：2023-03-24
申请人： 北京市农林科学院 , 北京农科院种业科技有限公司
摘要： 本发明公开了PE‑Nt4引导编辑系统及其在基因组碱基编辑中的应用。所述PE‑Nt4引导编辑系统包括nesgRNA、pegRNA、融合蛋白和紫色筛选标记蛋白PAP1，其中，融合蛋白依次包括M‑MLV RT、Cas9n(H840A)、P2A和潮霉素磷酸转移酶。通过实验证明：与PE‑Nt2和PE‑Nt3相比，PE‑Nt4引导编辑系统对烟草靶点的编辑效率显著提高。同时，PAP1基因表达会导致花青素的合成，形成肉眼可辨的紫色，不仅可用于阳性T0苗的直接筛选，还可用于直接剔除含有转基因标签的T1苗。更为重要的是，本发明利用PE‑Nt4系统在双子叶植物中实现了目标碱基突变的稳定遗传。
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公开(公告)号：CN112538477B
公开(公告)日：2022-09-16
申请号：CN202011398790.5
申请日：2020-12-02
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了xCas9基因编辑系统在基因组编辑中的应用。所述xCas9基因编辑系统包括xCas9和sgRNA。所述基因组编辑的方法包括如下步骤：将xCas9和sgRNA导入生物体或生物细胞内，实现基因组靶点序列的编辑；所述编辑为使所述靶点序列或其邻近序列发生碱基插入和/或缺失；所述sgRNA靶向靶点序列；所述靶点序列的PAM序列为GAD或NGN；D为G、T或A；N为A、T、C或G。通过实验证明：本发明的xCas9基因编辑系统可对位于生物基因组上的PAM序列为GAD或NGN的靶点序列或其邻近序列进行编辑，大大拓展了可编辑靶点的范围。
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公开(公告)号：CN114317518A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202011055742.6
申请日：2020-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了SpRYn‑CBE碱基编辑系统在植物基因组碱基替换中的应用。本发明的SpRYn‑CBE碱基编辑系统包括SpRYn、PmCDA1、UGI和sgRNA；所述sgRNA靶向靶点序列。通过实验证明：本发明的SpRYn‑CBE碱基编辑系统可对位于植物基因组上的PAM序列为NAN或NCN或NTN的靶点序列中的碱基C进行编辑，实现碱基C到碱基T的替换，大大拓展了可编辑的C的范围。
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公开(公告)号：CN110628794B
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN201910938668.3
申请日：2019-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用。所述细胞富集技术载体包括如下试剂：sgRNA、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；sgRNA由靶向目标基因靶点序列的tRNA‑sgRNA和靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA‑sgRNA组成；C·T碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA‑sgRNA的向导下，可通过对功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行C·T碱基替换使功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。本发明实现了细胞水平上C·T碱基替换细胞富集，大大提高C·T碱基替换效率。
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公开(公告)号：CN111378051A
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN202010219352.1
申请日：2020-03-25
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了PE-P2引导编辑系统及其在基因组碱基编辑中的应用。所述PE-P2引导编辑系统包括融合蛋白、pegRNA；所述融合蛋白为依次由Cas9切刻酶或其变体、反转录酶、自切割寡肽和筛选标记蛋白组成的融合蛋白或依次由筛选标记蛋白、自切割寡肽、Cas9切刻酶或其变体和反转录酶组成的融合蛋白。本发明通过自剪切多肽P2A使得PE-P1系统中的RT、Cas9n(H840A)和HPT三者融合表达，并将sgRNA骨架替换为了esgRNA骨架，得到PE-P2引导编辑系统。与PE-P1引导编辑系统相比，本发明的PE-P2引导编辑系统不仅可提高编辑靶点的编辑效率，还实现了不可编辑靶点的有效编辑。
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公开(公告)号：CN111304242A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN201911202341.6
申请日：2019-11-29
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种基于SaKKHn-pBE系统制备单突变体的方法。所述单突变体的制备方法，包括如下步骤：将SaKKHn-pBE碱基编辑系统导入生物体或生物细胞内，通过所述SaKKHn-pBE碱基编辑系统实现基因组靶点序列的编辑，获得所述单突变体；所述单突变体为所述靶点序列中单个位点C突变为T的生物突变体；所述SaKKHn-pBE碱基编辑系统包括SaKKHn蛋白质、tRNA-sgRNA和PmCDA1蛋白质。通过本发明的方法对23个水稻基因组靶点序列进行测试，结果发现几乎所有靶点均能够获得突变效率最高的单位点C的单突变体，且其单突变体所占比例大多超过50％。
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公开(公告)号：CN110835630A
公开(公告)日：2020-02-25
申请号：CN201911200779.0
申请日：2019-11-29
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一种高效的sgRNA及其在基因编辑中的应用。所述sgRNA如式I所示：所述靶点序列转录的RNA-改造的sgRNA骨架(式I)；所述改造的sgRNA骨架为在sgRNA骨架第14-15位之间插入RNA片段甲，且在所述sgRNA骨架第18-19位之间插入RNA片段乙后得到的RNA分子；所述RNA片段甲与所述RNA片段乙反向互补；所述RNA片段甲与所述RNA片段乙大小均为3nt；所述sgRNA骨架为序列9所示的RNA分子。通过实验证明：本发明的改造的sgRNA可显著提高胞嘧啶碱基编辑器(CBE)的C·T碱基替换效率，最高可达86.4％。
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公开(公告)号：CN110669775A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201910938672.X
申请日：2019-09-30
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了差异代理技术在A·G碱基替换细胞富集中的应用。本发明的差异代理技术载体包括靶向目标基因靶点序列的esgRNA、靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA、A·G碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；A·G碱基替换系统在靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列进行A·G碱基替换使所述功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。本发明实现了细胞水平上A·G碱基替换细胞富集，大大提高A·G碱基替换效率。
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