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公开(公告)号：CN115786295B
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202310035122.3
申请日：2023-01-10
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其在微生物催化制备酮基泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码基因如SEQ ID NO.2所示。本发明挖掘的源自Pseudonocardia sp.73‑21的L‑泛解酸内酯脱氢酶具有严格的L‑立体选择性，本发明构建的重组大肠杆菌表达L‑泛解酸内酯脱氢酶具有良好的溶解性，避免了L‑泛解酸内酯脱氢酶异源表达容易形成大量包涵体的问题。本发明提供的L‑泛解酸内酯脱氢酶在生物催化制备酮基泛解酸内酯/D‑泛解酸内酯中具有应用价值。
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公开(公告)号：CN119570758A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411799940.1
申请日：2024-12-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司 , 浙江永太手心医药科技有限公司
Abstract: 本发明涉及酶工程技术领域，公开了一种氨基转移酶突变体及其应用。本发明提供了一种野生型来源于燕麦曲霉(Aspergillus avenaceus)的氨基转移酶突变体。所述氨基转移酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第20位、第60位、第92位、第186位进行单位点或多点联合突变获得，作为生物催化剂可以直接以西他列汀中间体前体酮为底物、以异丙胺为氨基供体、以磷酸吡多醛为辅酶、以二甲基亚砜为底物助溶剂，催化制备高光学纯度的西他列汀中间体，在DMSO体积终浓度为50％反应体系下比酶活达到139.3U/g，极大地提高催化效率且产物具有高立体选择性(产物e.e.值达到99％)，具有广泛的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN118956796A
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202411029085.6
申请日：2024-07-30
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种羰基还原酶突变体M6，由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经下列组合突变所得：(1)第138位丙氨酸突变为缬氨酸；(2)第190位丙氨酸突变为甲硫氨酸；(3)第193位丝氨酸突变为丙氨酸；(4)第201位酪氨酸突变为色氨酸；(5)第204位天冬酰胺突变为组氨酸；(6)第205位缬氨酸突变为谷氨酸。本发明的突变体的相对活性与野生型相比提高了19倍，易于发酵制备，湿菌体单位酶活高，可直接用于氟苯尼考关键中间体2a的酶法催化制备，在300g/L底物浓度下反应8小时即可实现完全转化，且产物立体选择性高，相较于化学法来说该反应绿色安全，具有很好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN109761755B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN201910205265.8
申请日：2019-03-18
Applicant: 浙江华康药业股份有限公司 , 浙江大学 , 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种集成蒸发、结晶和离心分离制备木糖醇的装置，包括木糖醇罐、清洗液罐、循环回收罐和多元分流系统，多元分流系统包括J组用于蒸发浓缩的蒸发器、K组用于真空结晶的真空结晶釜和L组用于离心分离的离心机，其中2≤J≤6、6≤K≤12、2≤L≤4，各组内的蒸发器、真空结晶釜和离心机之间分别通过管道和阀门依次相互串联连接；通过控制各阀门的通断实现木糖醇交换液在多元分流系统内进行串联模式和并联模式的切换和控制，使得蒸发、结晶和分离过程的效果达到最佳调配，产率提高。本发明还公开了该装置的控制方法。本发明过程和装备高度集成，实现制备木糖醇的一体化连续生产，能耗低且自动化程度高，原料得到充分利用。
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公开(公告)号：CN117603935A
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202311312527.3
申请日：2023-10-11
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种ω‑转氨酶突变体及其编码基因与应用。本发明构建的ω‑转氨酶嵌合体MwTAMc对底物前西他列汀酮第一次出现催化活性，且表现出严格的(R)‑立体选择性。针对MwTAMc的酶活改造，获得一系列优势突变菌株。突变体MwTAM3、MwTAM4、MwTAM7和MwTAM8的比细胞活力较过表达嵌合体的菌株MwTAMc分别提高了11.28倍、20.33倍、42.33倍和278.48倍。其中，嵌合体和突变体催化2g/L前西他列汀酮时，底物转化率由MwTAMc的4.5％提高到MwTAM4的30.3％，以及MwTAM8的95.6％。最佳优势突变体MwTAM8基本实现了2g/L前西他列汀酮的全转化，具有一定的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114410599B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202210110728.4
申请日：2022-01-29
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种羰基还原酶突变体、编码基因及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第233位甘氨酸突变为天冬酰胺获得的。本发明突变体相较于野生型酶在转化上述反应时催化活力明显提高，催化制备(3R,5S)‑CDHH效率高，反应时间短，且重组工程菌的酶表达量高，易于发酵制备，湿菌体单位酶活高，可直接用于瑞舒伐他汀中间体的酶法催化制备，具有生产成本低、效率高的突出优势，具有良好的开发与应用价值；本发明提供的技术所得产品立体选择性高，简化了繁琐的化学催化步骤，反应条件更加温和，对设备要求低，降低了反应成本，且对环境友好。
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公开(公告)号：CN116083383A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202310088946.7
申请日：2023-01-16
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其在微生物催化制备酮基泛解酸内酯/D‑泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体，由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第156位、第224位、第164位进行单突变或多点联合突变获得。本发明构建的RhoLPLDH突变体菌株的比酶活较对照组提升显著，RhoLPLDH突变体与分子伴侣pGro7共表达进一步提高蓝了目的蛋白可溶性表达。本发明构建的RhoLPLDH突变体和pGro7共表达工程菌相较于出发菌株的比细胞活力也有显著提升。突变体特异性催化LPL，30小时底物转化率可达到94％，突变体在催化D,L‑PL底物时，48小时转化率可达到91.8％。突变体和共表达共轭聚酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的工程菌采用“双菌一锅法”催化D,L‑PL拆分制备DPL时，DPL收率可达到92.7％。
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公开(公告)号：CN111440785B
公开(公告)日：2022-07-15
申请号：CN202010126502.4
申请日：2020-02-28
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法，所述方法是将含葡萄糖异构酶基因的基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体经缓冲液悬浮，制成菌悬液；向菌悬液中添加改性硅藻土，搅拌混匀，加入聚乙烯亚胺，然后再加入戊二醛进行交联，15～35℃搅拌交联0.5～5h后抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤后，粉碎成粒，得到含葡萄糖异构酶的固定化葡萄糖异构酶制剂；本发明所提供的固定化方法具有固定化材料成本低，操作简单，机械强度高，制备的固定化产葡萄糖异构酶重组大肠杆菌全细胞用于催化D‑葡萄糖生产D‑果糖，在60℃条件下，分批次反应重复使用40批次后，仍具有86％以上的残余酶活力；连续反应603h，时空产率为3.8kg/L/d，平均转化率大于42％，具有良好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN111549008B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202010275136.9
申请日：2020-04-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种胺转氨酶AcATA突变体及其在制备西他列汀中间体中的应用，该胺转氨酶AcATA突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第122位进行单突变获得；其中，第122位的甲硫氨酸突变成组氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸。本发明通过分子对接和同源建模等方法获得可能影响其催化活性的位点，并进行了定点突变，最终得到的胺转氨酶AcATA突变体不仅具有较高的酶活，酶活均高于460U/g，均是野生型的4倍以上；而且能够高效催化西他列汀中间体前体酮1‑哌啶‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1,3‑二丁酮合成西他列汀中间体(R)‑3‑氨基‑1‑哌啶‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1‑丁酮，24h转化率高达90％。
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公开(公告)号：CN111411095B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202010277479.9
申请日：2020-04-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种新型重组(R)‑ω‑转氨酶及其突变体和应用，该新型重组(R)‑ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第72位和第248位经单点或二点突变得到。本发明先通过基因重组技术获得高酶活的新型重组(R)‑ω‑转氨酶，再进一步通过定点突变获得新型重组(R)‑ω‑转氨酶突变体，该突变体不仅具有高酶活(1245.2U/g)、高立体选择特性(e.e.值99.9％)，而且能够高效催化前体酮类似物制备西他列汀中间体，转化率最高可达97.4％。
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