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公开(公告)号：CN103045624B
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201210470064.9
申请日：2012-11-20
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种耐高温高碱木聚糖酶及其基因、工程菌和制备方法，其技术方案是利用易错PCR和定点突变技术对来源于坎皮纳斯类芽孢杆菌的木聚糖酶基因XynG1-1进行耐高温和高碱的定向分子改造，得到耐高温高碱的木聚糖酶突变基因XynG1-1B43CC16，并利用巨大芽孢杆菌表达系统，分泌表达耐高温高碱木聚糖酶的方法。本发明解决了现有木聚糖酶耐高温与耐碱性无法同时兼顾，造成其在造纸工业中应用受限的问题，满足了木聚糖酶在高温和高碱性环境下进行生物制浆和生物漂白的要求，可提高纸浆白度和得率，减少造纸工业中化学试剂的用量，降低环境污染，促进造纸工业的清洁生产。
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公开(公告)号：CN102321558B
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201110282029.X
申请日：2011-09-22
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明公开了一种耐高温木聚糖酶的高产菌株及利用该菌株发酵产耐高温木聚糖酶的方法，并阐述了该酶的部分酶学性质。经菌种鉴定，将该菌命名为坎皮纳斯类芽孢杆菌G1-1(Paenibacillus campinasensis G1-1)，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏号为CGMCC No.5023。该菌种发酵得到的耐高温木聚糖酶，经分离纯化得到单一组分，其相对分子量为41.3KDa，最适作用温度及pH分别为60℃和7.0；在40℃～70℃和pH 5.0～9.0范围内酶活保持相对稳定。本坎皮纳斯类芽孢杆菌木聚糖酶适合造纸、食品和饲料等多个工业领域的应用，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102787130B
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201210246909.6
申请日：2012-07-17
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种耐酸性高温α-淀粉酶及其基因、工程菌和制备方法，其技术方案是利用重组DNA技术定点突变地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因，得到耐高温α-淀粉酶耐酸性突变基因，即耐酸性高温α-淀粉酶基因，并利用枯草芽孢杆菌表达系统，分泌表达耐酸性高温α-淀粉酶的方法。本发明解决了现有耐高温α-淀粉酶耐酸性较差，耐高温与耐酸性无法同时兼顾，造成应用受限的问题，满足了一些在酸性和高温环境下进行淀粉原料液化工艺的要求，可提高产品收得率及质量，简化工艺。
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公开(公告)号：CN102433312A
公开(公告)日：2012-05-02
申请号：CN201110389135.8
申请日：2011-11-30
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种D-3-磷酸甘油酸脱氢酶，其氨基酸序列见序列1，其L-丝氨酸的抑制常数Ki＞250mM，以及一种D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的编码基因，基因序列见序列2。本发明提供的PGDH的氨基酸序列与大肠杆菌野生型PGDH的氨基酸序列(序列3)的不同之处在于第344位氨基酸不是组氨酸而是丙氨酸且第346位氨基酸不是天冬酰胺而是丙氨酸，突变产生的PGDH不受L-丝氨酸的抑制，且本发明的PGDH变体的酶活性与野生型相比未发生改变。
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公开(公告)号：CN102382786A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110333678.8
申请日：2011-10-28
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及碱性蛋白酶高产菌株及碱性蛋白酶，其中菌株的分类命名为嗜碱芽孢杆菌Bacillus alcalophilus，保藏编号为：CGMCC No.5313，保藏日期：2011年9月30日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，酶由碱性蛋白酶高产菌株发酵得到。本发明中诱变获得的产碱性蛋白酶菌株是由嗜碱芽孢杆菌经过低能N+离子注入诱变而得的碱性蛋白酶高产菌株，有效地提高了菌株的产酶能力，其碱性蛋白酶的摇瓶活力最大值到30700U/mL，较出发菌株提高了37.7％。
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公开(公告)号：CN102382771A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110243864.2
申请日：2011-08-25
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及了一种利用体外微生物发酵法模拟体内肠道微生物转化的方式对京尼平苷进行有效的转化而生成京尼平，即利用本实验室筛选保藏的β-葡萄糖苷酶的高产菌发酵中药栀子，通过单因素实验优化，确定微生物转化得到产物京尼平的最佳条件，一方面在温和条件下水解其中的京尼平苷，避免了传统方法导致有效成分损失的缺陷，另一方面利用现代微生物发酵工程技术使桅子的有效成分京尼平苷在体外可控条件下实现规模转化，具有较大的经济效益和社会效益，市场开发前景广阔。
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公开(公告)号：CN101781641B
公开(公告)日：2012-02-08
申请号：CN200910070737.X
申请日：2009-10-09
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种碱性果胶酶基因工程菌培养条件的优化方法，步骤如下：(1)采用单因素实验对碱性果胶酶基因工程菌的发酵培养基组成进行优化，得到初步优化的发酵培养基；(2)响应面方法对目标菌种培养基进行优化，得到目标菌种培养基；(3)采用后优化培养基，对目标菌种进行发酵培养条件优化，得到优化培养条件。本发明摸索到一套最优的发酵培养条件，使工程菌发酵所产生的酶活达到758.7825U/ml，比原始野生型菌株产碱性果胶酶活性提高了50倍，比LB培养基发酵基因工程菌产碱性果胶的酶活力提高了3倍，对提高工业酶的市场竞争力有着非常重要的意义。
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公开(公告)号：CN102286439A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110249360.1
申请日：2011-08-29
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种以大孔阴离子树脂为填充料的果糖基转移酶的初纯化方法，将经预处理大孔阴离子树脂装层析柱，用磷酸缓冲液冲洗层析柱层析柱，平衡层析柱，将含有果糖基转移酶的粗酶液上样，用两倍体积的磷酸缓冲液洗脱，再用两倍体积的磷酸缓冲液配置的1mol/mL的NaCl溶液0-1mol/mL梯度洗脱，用UV280nm在线监测，收集有酶活的峰，将收集到有酶活的酶液浓缩即得果糖基转移酶。本发明通过先球磨再超高压均质的方法得到了酶活较高的酶液，再采用大孔阴离子树脂D290为填充料对果糖基转移酶进行初纯化，得到具有一定纯度的果糖基转移酶，对于利用果糖就转移酶生产低聚果糖具有十分重要的现实意义和工业价值。
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公开(公告)号：CN102277344A
公开(公告)日：2011-12-14
申请号：CN201110220386.3
申请日：2011-08-03
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种低温碱性蛋白酶及其制备方法，属于用重组DNA技术定点突变野生型碱性蛋白酶基因，以改善其特性，并将突变后基因与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒pBE2S连接，将其在枯草芽孢杆菌中高效表达的方法，涉及具有适冷性及碱稳定性的低温碱性蛋白酶及其制备方法。本发明解决了碱性蛋白酶在低温环境下活性较低，以致应用受限的问题。其技术方案是从微生物特别是嗜碱芽孢杆菌分离野生型碱性蛋白酶基因，对其Glu110、Glu134的氨基酸残基进行突变，经在枯草芽孢杆菌中高效表达，检测其发酵液酶活力达到1985U/mL，在40℃下，该低温碱性蛋白酶(Glu110&134Ala)比野生型碱性蛋白酶活力提高了28％；在10℃下，比野生型碱性蛋白酶活力提高了62％。
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公开(公告)号：CN101298604B
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN200810053625.9
申请日：2008-06-25
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种高温耐酸性α-淀粉酶的突变株及其构建方法，是将地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因经突变后(Leu134→Arg和Ser320→Ala)获得的高温耐酸性α-淀粉酶基因，通过构建打靶载体，利用同源重组的方法，将其整合到出发菌株地衣芽孢杆菌的基因组DNA中，得到了地衣芽孢杆菌突变株，实现高温耐酸性α-淀粉酶的同源高效表达。本发明中的突变株所产α-淀粉酶在本身耐高温的基础上，酸稳定性也有了明显地提高，为我国酒精、淀粉糖化等淀粉深加工行业提供了更好的工艺条件，降低了成本，节省了能源和工业用粮，满足了一些在酸性条件下进行淀粉原料液化工艺的要求。
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