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公开(公告)号：CN118006474A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410232601.9
申请日：2024-02-29
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明公开了高效制备氢化可的松的蓝色犁头霉菌种及其构建方法，属于基因工程技术领域。发明利用CRISPR‑Cas9编辑技术将来源于蓝色犁头霉的C11β‑羟化酶CYP5311B2T329A突变体在缺失CYP5311B2的蓝色犁头霉菌株中高效表达，获得高效转化底物11‑脱氧皮质甾醇制备氢化可的松的蓝色犁头霉重组菌株。底物11‑脱氧皮质甾醇的总投料量为4g/L，通过转化72h，产物氢化可的松的得率达到85％。本发明为研究开发高效C11β‑羟化11‑脱氧皮质甾醇生产氢化可的松工艺提供了宝贵的工业菌种和技术方法。
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公开(公告)号：CN117327594A
公开(公告)日：2024-01-02
申请号：CN202311244554.1
申请日：2023-09-26
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明公开了一种高效制备14α‑羟基孕酮的重组赭曲霉菌株的构建，属于基因工程技术领域。发明以11α‑羟化酶CYP68J5缺失的赭曲霉菌株为底盘细胞，异源表达具有高羟化特异性的新月弯孢霉14α‑羟化酶CYP5103B5突变体，获得的重组菌能够以孕酮为底物制备14α‑羟基孕酮，投料量达5g/L，具有工业应用前景。
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公开(公告)号：CN111454855B
公开(公告)日：2022-10-14
申请号：CN202010402827.0
申请日：2020-05-13
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明提供了一种重组毕赤酵母及其构建方法和在高效制备15α‑左旋乙基甾烯二酮中的应用，属于发酵工程技术领域；本发明以毕赤酵母为宿主，首次以胞内产酶方式同时诱导15α‑甾体羟化酶和葡糖‑6‑磷酸脱氢酶，采用毕赤酵母全细胞边诱导边催化的方式实现左旋乙基甾烯二酮转化高投料量和高转化率。
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公开(公告)号：CN114806915A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210611631.1
申请日：2022-06-01
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明专利提供了一株重组毕赤酵母及其在高效制备14α‑羟基孕酮中的应用，属于发酵工程技术领域；本发明以毕赤酵母为宿主，采用毕赤酵母全细胞边诱导边催化的方式实现14α‑羟基孕酮转化高投料量和高转化率，为研究开发高效孕酮C14α‑羟化生产工艺提供了宝贵材料(菌种)和基础数据支撑。
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公开(公告)号：CN113667666A
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN202010405811.5
申请日：2020-05-14
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明专利提供了一种来自丝状真菌黑曲霉的新型诱导型启动子及其质粒载体构建，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，该启动子能够诱导外源基因在黑曲霉细胞中高效诱导表达，如P450甾体羟化酶基因的高水平表达，考察了赭曲霉C11α‑羟化酶基因68J5在黑曲霉ATCC1015细胞中高水平表达以及重组菌对甾体底物16，17α‑环氧黄体酮的转化效率，因此可用于构建黑曲霉高效基因工程菌。
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公开(公告)号：CN113667650A
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN202010405130.9
申请日：2020-05-14
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明专利提供了赭曲霉甾体C11α‑羟化酶突变体I303L，DNA序列如SEQ ID NO：2所示。同C11α‑羟化酶CYP68J5相比，突变体I303L转化甾体底物孕酮显示更高的特异性，无明显副产物生成。本发明专利还提供了基于突变体I303L异源过表达的表达载体、毕赤酵母重组菌及其甾体转化工艺，为研究开发高效黄体酮C11α‑羟化生产工艺提供了宝贵材料(基因和菌种)和基础数据支撑。
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公开(公告)号：CN112980702A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110301235.4
申请日：2021-03-22
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种高效表达C16β羟化酶的重组菌及其构建方法和应用，特别涉及基因工程领域。本发明提供了一种高效表达甾体C16β羟化酶的重组菌的构建方法，包括以下步骤：PCR扩增CYP5061基因左右同源臂，分别克隆到pBluescriptⅡKS(+)中后回收，将回收得到的CYP5061基因左右同源臂分别插入pPZP中，得到重组质粒；将重组质粒电转化至根癌农杆菌中，得到重组根癌农杆菌；将所述重组根癌农杆菌与黑曲霉共培养，得到重组黑曲霉。敲除本发明所述基因得到的菌株转化4‑AD生成16β‑OH‑4AD特异性明显提高。
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公开(公告)号：CN108753626A
公开(公告)日：2018-11-06
申请号：CN201810555158.3
申请日：2018-06-01
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一株能将19‑去甲‑4‑雄烯二酮有效转化为16β‑羟基‑19‑去甲‑4‑雄烯二酮的黑曲霉(Aspergillus niger)(保藏编号：CGMCC No.15662)及其在转化甾体药物中的应用，属于微生物技术领域。本发明所述的菌株具有生长迅速，易于培养的特点，该菌株可高效的将19‑去甲‑4‑雄烯二酮有效转化为16β‑羟基‑19‑去甲‑4‑雄烯二酮，并且产物易于萃取分离，终产物纯度高。经检测，19‑去甲‑4‑雄烯二酮的生物转化率为80～90％，产物提取得率75～80％，16β‑羟基‑19‑去甲‑4‑雄烯二酮产品纯度大于99.5％。
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公开(公告)号：CN104017786B
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201410279966.3
申请日：2014-06-20
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种磷脂酶A2突变体及其制备的方法，其技术方案是利用重组DNA技术定点突变来源于天蓝色链霉菌的野生型磷脂酶A2的Glu37、Asp78的氨基酸残基，得到活力较高的磷脂酶A2基因，然后将高活力磷脂酶A2基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达，得到产高活力磷脂酶A2的重组菌株，表达后，检测高活力磷脂酶A2的比酶活较野生型磷脂酶A2提高13.7％，其中枯草芽孢杆菌高活力磷脂酶A2重组菌发酵后磷脂酶A2的酶活可达到53.5U/ml，毕赤酵母游离表达高活力磷脂酶A2重组菌的酶活可达106.4U/ml，毕赤酵母细胞表面展示高活力磷脂酶A2全细胞催化剂的酶活可达260U/(g·干细胞)。
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公开(公告)号：CN103205450B
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201310080877.1
申请日：2013-03-14
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种能在简单节杆菌（Arthrobacter Simplex）中复制并高效表达甾体类化合物A环1,2位脱氢酶基因的质粒在构建高效表达甾体化合物A环1,2位脱氢的简单节杆菌工程菌中的应用。本发明质粒能在简单节杆菌里复制并且高效表达甾体类化合物A环1,2位脱氢酶基因，本发明质粒为进一步利用质粒pXJM19通过分子手段改良简单节杆菌提供了依据，具有重要的实用意义。
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