公开(公告)号：CN109609530A

公开(公告)日：2019-04-12

申请号：CN201910078599.3

申请日：2019-01-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  吴傲 ,  张显 ,  徐美娟 ,  杨套伟 ,  邵明龙

IPC: C12N15/61 ,  C12N9/90 ,  C12P19/24 ,  C12P19/12

Abstract: 本发明公开了一种海藻糖合成酶及其在海藻糖生产中的应用，属于酶工程技术领域。本发明海藻糖合成酶的酶活较高，将携带本发明海藻糖合成酶的大肠杆菌诱导培养12h，即可使粗酶液中海藻糖合成酶的比酶活高达35.2U/mg，将携带本发明海藻糖合成酶的谷氨酸棒杆菌诱导培养12h，即可使粗酶液中海藻糖合成酶的比酶活高达33.5U/mg；本发明海藻糖合成酶突变体的比酶活与海藻糖转化率均较野生型海藻糖合成酶有了较为明显的提高，其中，海藻糖合成酶突变体K246A的比酶活较野生型酶提高了1.43倍，海藻糖转化率较野生型酶提高了约15％。

公开(公告)号：CN109486738A

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201811507100.8

申请日：2018-12-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  吴玉玲 ,  邵明龙 ,  杨套伟 ,  徐美娟 ,  张显 ,  许正宏

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P33/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌全细胞转化生产宝丹酮的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明克隆了来源于Bipolaris oryzae的17β-羟基类固醇脱氢酶，并实现在E.coli BL21(DE3)中过量共表达。此全细胞转化体系的建立，首次鉴定出Bipolaris oryzae来源的17β-HSD具有17β-羟基甾体脱氢酶功能，并在大肠杆菌表达体系中实现了Bipolaris oryzae来源的17β-HSD的功能鉴定。经过24h全细胞转化，1g/L ADD可转化为872.9mg/L宝丹酮。本发明为微生物工业化生产宝丹酮提供了基础。

公开(公告)号：CN109370975A

公开(公告)日：2019-02-22

申请号：CN201811479829.9

申请日：2018-12-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐美娟 ,  饶志明 ,  李静 ,  舒群峰 ,  张显 ,  杨套伟

IPC: C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12N15/77 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了敲除氮转录调控因子AmtR，过量表达铵转运蛋白AmtB的重组钝齿棒杆菌的构建。采用5-L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌Cc5-5/pXMJ19-amtB发酵至96h，重组菌的L-精氨酸产量达到60.9±1.31g/L，较出发菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5提高了30.56％，生产强度达到0.634g/L·h，并且糖酸转化率为0.36±0.018g/g，实现了L-精氨酸的高产。同时，该重组钝齿棒杆菌增加了NH4+的利用，说明敲除氮转录调控因子和过量表达铵转运蛋白对L-精氨酸的产量具有显著效果。

公开(公告)号：CN105255849B

公开(公告)日：2018-12-04

申请号：CN201510815792.2

申请日：2015-11-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  张显 ,  杨套伟 ,  徐美娟

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00

Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的谷氨酸脱羧酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.1所示的氨基酸的基础上，将第172位酪氨酸突变成半胱氨酸。本发明得到的突变体在大肠杆菌中表达，摇瓶发酵24h后酶活为28.6U/mL，突变酶活提高了81％，底物亲和力较原始酶降低53％，同时比酶活提高83％，在35℃下酶的半衰期由16h延长至24h。在大肠杆菌中表达该重组酶，并全细胞转化谷氨酸18h可得到283.8g/L的γ‑氨基丁酸；在谷氨酸棒菌中表达该重组酶，并全细胞转化谷氨酸18h可得到126.7g/L的γ‑氨基丁酸。本发明表明172位氨基酸残基对酶的催化作用和稳定性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。

公开(公告)号：CN108611333A

公开(公告)日：2018-10-02

申请号：CN201810442796.4

申请日：2018-05-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 杨套伟 ,  饶志明 ,  杨晨 ,  张显 ,  徐美娟 ,  刘会灵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种转肽活力提高的γ-谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.3所示的氨基酸的基础上，将第463位氨基酸由苏氨酸突变成天冬氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，γ-谷氨酰转肽酶突变体酶的转肽反应活力较突变前提高22.6％，水解反应活力降低了90％。本发明表明463位氨基酸残基对γ-谷氨酰转肽酶的转肽反应活力有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。本发明所得的γ-谷氨酰转肽酶突变体可用于制备L-茶氨酸。

公开(公告)号：CN104388477B

公开(公告)日：2018-06-19

申请号：CN201410748634.5

申请日：2014-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  杨套伟 ,  张显 ,  徐美娟 ,  李秀鹏

IPC: C12P7/18 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明首次公开了利用一株环境安全菌株Bacillus amyloliquefaciens CCTCC M2012349，以酒糟为唯一碳氮源，发酵生产2,3‑丁二醇的方法，属于生物工程中发酵技术领域。该方法主要包括种子培养和发酵培养。具体的说，将种子液按4％接种量接种于发酵培养基中，在37℃，空气流量为120m3/h·m3培养基，搅拌转速为350r/min条件下进行发酵培养，发酵60h，即刻停止发酵，发酵液即为含有2,3‑丁二醇液体。能有效地降低白酒生产成本、提高资源利用率、延伸产业链，是建立高效、经济的生物质能源综合利用产业的重要措施，将大大提升白酒产业的整体技术水平和循环效益。

公开(公告)号：CN104830888B

公开(公告)日：2018-05-01

申请号：CN201510143997.0

申请日：2015-03-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  张乐乐 ,  张显 ,  徐美娟 ,  杨套伟

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/53 ,  C12N1/21 ,  C12P33/16 ,  C12P33/02 ,  C12R1/32

Abstract: 本发明公开了一种新金色分枝杆菌表达载体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明的新金色分枝杆菌表达载体pMTac‑2，可用于在新金色分枝杆菌高效表达蛋白，适用于分枝杆菌代谢产物的研究和生产。利用pMTac‑2在新金色分枝杆菌中过量表达KSDD，使重组菌M.neoaurum JC‑12/pMTac‑2‑ksdd胞内的KSDD活性比原始菌提高15.12倍。以30g/L植物甾醇为底物，5L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC‑12/pMTac‑2‑ksdd的ADD产量达到15g/L以上，为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。因此，该表达体系能够有效利用于新金色分枝杆菌的遗传改造。

公开(公告)号：CN104404089B

公开(公告)日：2018-02-23

申请号：CN201410748883.4

申请日：2014-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  包腾 ,  张显 ,  赵晓静 ,  杨套伟 ,  徐美娟

IPC: C12P7/26 ,  C12R1/125

Abstract: 添加葡萄糖酸提高乙偶姻产量的方法，属于发酵工程领域。利用本实验室前期筛选得到的高产乙偶姻野生型枯草芽孢杆菌B.subtilis JNA(保藏号CCTCC M209309；专利申请公布号CN 101864381A)进行发酵，通过调节葡萄糖与葡萄糖酸的比例改变胞内辅酶变化水平从而改变乙偶姻与2,3‑丁二醇比例。最终在较低NADH浓度及NADH/NAD+比例下(50g/L葡萄糖和50g/L葡萄糖酸)，转化约为55.8g/L的乙偶姻，副产物2,3‑丁二醇仅为4.1g/L；与使用葡萄糖作为唯一碳源相比较，乙偶姻生产效率上升到0.78g/(L·h)，乙偶姻产量提高近86％，副产物2,3‑丁二醇积累量下降80％。为国内外首次利用混合还原态底物降低NADH浓度及其NADH/NAD+比例发酵生产乙偶姻，实现了提高生产效率、减少NADH依赖型副产物的目的。

公开(公告)号：CN106520651A

公开(公告)日：2017-03-22

申请号：CN201610979842.5

申请日：2016-11-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  戚云龙 ,  杨套伟 ,  周俊平 ,  郑俊贤 ,  徐美娟 ,  张显

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/06 ,  C12N9/02 ,  C12P13/08 ,  C12R1/15 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/0024 ,  C12N9/0008 ,  C12N9/0016 ,  C12P13/08 ,  C12Y102/01002 ,  C12Y104/01009 ,  C12Y104/03003

Abstract: 通过大肠杆菌和钝齿棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19，将来源于Trigonopsis variabilis的D-氨基酸氧化酶成功在C.glutamicum ATCC13032中表达。通过构建重组质粒pET-28a(+)-leudh和pET-28a(+)-fdh，将来源于Bacillus cereus和Candida boidinii的亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶成功在E.coli BL21中表达。以上述三株工程菌的粗酶液作为生物催化剂，以混合型DL-正缬氨酸作为底物，同时确定了最佳的反应温度为30℃和pH为7.5。在最佳的转化条件下进行酶法动力学拆分生产L-正缬氨酸。25h后转化液中的L-正缬氨酸的含量为80.09g/L，L-正缬氨酸产率为98.3％。本发明方法生产L-正缬氨酸具有效率高，绿色环保，产品纯度高等优点。

公开(公告)号：CN106119272A

公开(公告)日：2016-11-16

申请号：CN201610574812.6

申请日：2016-07-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  刘巧利 ,  周俊平 ,  杨套伟 ,  张显 ,  徐美娟

IPC: C12N15/70 ,  C12P13/22 ,  C12P7/58

Abstract: 本发明是一种将葡萄糖脱氢酶与L‑亮氨酸脱氢酶在大肠杆菌中单独和共表达，利用重组大肠杆菌酶法和全细胞法联产L‑苯甘氨酸和葡萄糖酸盐的方法。本发明在于：将葡萄糖脱氢酶基因和L‑亮氨酸脱氢酶基因构建重组单独和共表达载体并将其转化至基因工程菌大肠杆菌内。利用重组菌酶法和全细胞法转化可以促进辅因子在转化体系中的循环，仅需添加少量外源辅因子或不添加外源辅因子，利用该辅因子循环再生系统可以利用底物苯甲酰甲酸及葡萄糖联产高附加值的L‑苯苷氨酸和葡萄糖酸，该转化过程简单快捷，成本低廉。在5L发酵罐中转化2‑4h，该方法所得的L‑苯甘氨酸和葡萄糖酸产量分别可达58.8g/L及75.6g/L，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。