公开(公告)号：CN109593750B

公开(公告)日：2020-01-21

申请号：CN201910039981.3

申请日：2019-01-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘中美 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  郭军玲 ,  蓝瑶

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P17/12 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体、含该突变体的基因工程菌及其应用，属于酶工程技术领域。本发明是将腈水合酶突变体αL6T/A19V/F126Y‑βM46K/E108R/S212Y(公开于发明专利CN102216455A)的第47位甘氨酸突变为天冬酰胺，获得的新突变酶具有更好的温度耐受性和产物耐受性，有利于以后的工业生产。将含该腈水合酶突变体的重组菌株高密度发酵，以烟腈为底物，进行全细胞催化反应制备烟酰胺。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，催化效率高，终产物烟酰胺产率95％以上，浓度达到680g/L，简化了产物的分离纯化步骤。

公开(公告)号：CN106636052B

公开(公告)日：2019-06-21

申请号：CN201611108889.0

申请日：2016-12-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  余龙 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  刘中美 ,  郭军玲 ,  张斌

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/46 ,  C12P13/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种马来酸顺反异构酶的热稳定性改造及其应用，属于酶工程领域。本发明将来源于粘质沙雷氏菌的马来酸顺反异构酶基因maiA通过半理性设计的方法进行了热稳定改造，得到的突变体与野生型的马来酸顺反异构酶相比，突变体G27A‑G171A在55℃的半衰期是野生型的2.9倍，酶活是野生型的1.96倍；突变体G27A‑K104R在55℃的半衰期是野生型的4.18倍，酶活是野生型的1.59倍。

公开(公告)号：CN107828714A

公开(公告)日：2018-03-23

申请号：CN201711376385.1

申请日：2017-12-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘中美 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  王超 ,  郭军玲

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/88 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/88 ,  C12P13/06 ,  C12Y401/01011

Abstract: 本发明公开了一株异源表达L-天冬氨酸-α-脱羧酶的大肠杆菌重组菌，属于生物工程领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高酶活的L-天冬氨酸α-脱羧酶菌株，将重组菌株高密度发酵，以L-Asp-Na作为底物，进行全细胞催化反应制备β-丙氨酸。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，催化效率高，终产物β-丙氨酸产率95％以上，简化产物的分离纯化步骤。

公开(公告)号：CN104862296B

公开(公告)日：2017-12-12

申请号：CN201510226690.7

申请日：2015-04-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  崔文璟 ,  刘中美 ,  周丽 ,  夏媛媛

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/88 ,  C07K2319/00 ,  C12P13/02 ,  C12P21/02 ,  C12Y402/01084

Abstract: 本发明公开了一种比酶活和稳定性提高的融合型腈水合酶，属于基因工程领域。本发明将来源于恶臭假单胞菌的腈水合酶在大肠杆菌中高效表达并采用亚基融合策略提高稳定性及产物耐受性。本发明方法简单高效安全，能够在较短的表达周期里获得稳定性高，产物耐受性强的大量可溶性腈水合酶，有利于在简单条件下进行大规模工业生产，以及进一步对融合型腈水合酶成熟机制的理论研究。

公开(公告)号：CN106222122A

公开(公告)日：2016-12-14

申请号：CN201610575998.7

申请日：2016-07-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘文茂 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  刘中美

IPC: C12N1/21 ,  C12P7/46 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12P7/46 ,  C12R1/19 ,  C12N9/88 ,  C12N9/90 ,  C12Y402/01002 ,  C12Y502/01001

Abstract: 本发明涉及一种可高产富马酸的大肠杆菌工程菌，通过敲除大肠杆菌的延胡索酸酶编码基因fumA和fumC，并转化来源于粘质沙雷氏菌的马来酸顺反异构酶基因得到。本发明还公开了上述大肠杆菌工程菌催化马来酸合成富马酸的方法：发酵培养大肠杆菌工程菌，当OD600达到40-80时对大肠杆菌工程菌进行高密度诱导表达，将得到的发酵液生化催化马来酸，得到富马酸。本发明利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌中的fumA和fumC基因，切断其富马酸到L-苹果酸的代谢通路，然后表达来源于粘质沙雷氏菌的马来酸顺反异构酶，获得的基因工程菌株可高效转化马来酸底物合成高纯度富马酸，几乎不合成L-苹果酸副产物，为全细胞法催化马来酸生产富马酸的工业化提供依据。

公开(公告)号：CN104862296A

公开(公告)日：2015-08-26

申请号：CN201510226690.7

申请日：2015-04-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  崔文璟 ,  刘中美 ,  周丽 ,  夏媛媛

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/88 ,  C07K2319/00 ,  C12P13/02 ,  C12P21/02 ,  C12Y402/01084

Abstract: 本发明公开了一种比酶活和稳定性提高的融合型腈水合酶，属于基因工程领域。本发明将来源于恶臭假单胞菌的腈水合酶在大肠杆菌中高效表达并采用亚基融合策略提高稳定性及产物耐受性。本发明方法简单高效安全，能够在较短的表达周期里获得稳定性高，产物耐受性强的大量可溶性腈水合酶，有利于在简单条件下进行大规模工业生产，以及进一步对融合型腈水合酶成熟机制的理论研究。

公开(公告)号：CN104818291A

公开(公告)日：2015-08-05

申请号：CN201510234719.6

申请日：2015-05-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  关成冉 ,  崔文璟 ,  周丽

IPC: C12N15/76 ,  C12N9/10 ,  C12N9/88 ,  C12N9/48

Abstract: 本发明公开了一种链霉菌重组表达载体的构建及应用，属于基因工程领域。本发明提供的链霉菌表达载体，方便外源基因的插入及防止转录通读在载体上添加多克隆位点和终止子，且能够在三种链霉菌中大量分泌表达TGase。

公开(公告)号：CN104789566A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201510203088.1

申请日：2015-04-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  葛春蕾

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/54 ,  C12N9/48 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种新型启动子及其应用，属于微生物基因工程领域。本发明所述方法中涉及的启动子Pd(-35～-10)HpaII基因是在启动子PHpaII的基础上对其核心区进行串联改造而形成的。在新启动子Pd(-35～-10)HpaII控制转录下，重组纳豆激酶的纤溶活力高达200.83FU/ml。该方法高效安全，能够有效提高纳豆激酶的表达量，且为进一步研究启动子对异源基因表达的影响提供了理论基础。

公开(公告)号：CN103409449A

公开(公告)日：2013-11-27

申请号：CN201210345153.0

申请日：2012-09-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  朱龙宝 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  张川

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/88 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种粘红酵母苯丙氨酸脱氨酶基因克隆及高效表达的方法，属于酶学与酶工程技术领域。通过基因克隆，构建重组菌，诱导表达，重组酶的精致，获纯的重组酶，其比酶活达3U/mg。采用本方法可以在较短的时间内获得大量的PAL，以满足工业化生产需求。

公开(公告)号：CN102618478B

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201210102731.8

申请日：2012-04-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 王正祥 ,  周丽 ,  田康明 ,  沈微

IPC: C12N1/21 ,  C12P7/56 ,  C12R1/19

Abstract: 一株产D-乳酸动态调控重组菌及用其制备D-乳酸的方法，属于微生物基因工程技术领域。本重组菌命名为大肠杆菌（Escherichiacoli）B0013-070B，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO：M2012071。该菌株其基因组中乳酸脱氢酶基因启动子ldhAp被替换为培养环境/营养因素控制型启动子。利用该重组菌，在25~50℃条件下分阶段发酵28~40h，产D-乳酸水平达12.5%；光学纯度达99.9%，化学纯度达98.4%。本发明对D-乳酸高产菌B0013-070染色体上的D-乳酸脱氢酶编码基因的表达进行动态调控，使得D-乳酸的生产过程仅需改变发酵温度即可控制，达到以葡萄糖为原料高效合成D-乳酸的目的。本发明经简单修改后，可用于其它工业上重要的微生物代谢产物的生产。