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公开(公告)号：CN114574618B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202210219429.4
申请日：2022-03-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12Q1/6806 , C12N15/11 , C12R1/84
Abstract: 本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母不同生长阶段的内参基因及其引物和应用，所述内参基因为TIF1基因和/或RPL19A基因。本发明获得了适用于巴斯德毕赤酵母不同生长阶段的实时荧光定量内参基因，并设计了候选内参基因的实时荧光定量引物，该引物特异性强，扩增效率高，填补了巴斯德毕赤酵母不同生长阶段没有针对性的内参基因的现状。
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公开(公告)号：CN114574490B
公开(公告)日：2022-11-11
申请号：CN202210238177.X
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母组成型启动子及其改造方法和应用，所述组成型启动子为P0887‑GAP、P0887‑AOX1和P0887‑GS中的一种；所述启动子P0887‑GAP的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示；所述启动子P0887‑AOX1的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；所述启动子P0887‑GS的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示。本发明通过替换启动子P0887的5’非翻译区序列，改造后启动子的转录活性基本不变，荧光强度提高至原始启动子的37倍。
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公开(公告)号：CN110511954B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN201910107636.9
申请日：2019-02-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其能实现于谷氨酸棒杆菌高分泌表达木聚糖酶。一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其特征在于：重组载体包括可操作性连接的序列原件：AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因，AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列和SD序列连接构成的片段其序列如SEQ ID NO.1所示，cspB信号肽的序列如SEQ ID NO.2所示。AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因构成双顺反子结构，能够实现木聚糖酶于谷氨酸棒杆菌的高分泌表达，酶活达到486.2 U/ml。
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公开(公告)号：CN110511953B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN201811015441.3
申请日：2018-08-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌的重组表达载体，该表达载体适用于在谷氨酸棒杆菌中表达外源蛋白并具有较高的表达水平。一种适用于谷氨酸棒杆菌的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体中外源蛋白基因的启动子为∆cspB启动子、信号肽为∆cspB信号肽，所述∆cspB启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，∆cspB信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。本发明中的外源蛋白在表达过程中，在信号肽的引导下，表达的外源蛋白能分泌到胞外，不需要经过菌体破碎，分泌出的外源蛋白相对于胞内表达易于纯化；且无胞外蛋白酶，分泌出的外源蛋白在培养基中较为稳定。此外，本发明还提供了外源蛋白的外源蛋白表达系统、应用和外源蛋白的制备方法。
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公开(公告)号：CN113549619B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202110785194.0
申请日：2021-07-12
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/77 , C12N1/21 , C07K14/435 , C12R1/15
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子、其质粒载体及其应用，谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子，其基因序列如SEQ ID NO.5所示。本发明使用启动子PA368构建蛋白表达载体，并通过在培养基中添加乙醇，实现重组蛋白在谷氨酸棒杆菌二次生长阶段的高水平表达，克服了现有启动子强度低、诱导物渗透性且昂贵等不足，相比于现有的谷氨酸棒杆菌强启动子PH36，本发明启动子PA368调控下的绿色荧光蛋白表达水平提高了2.43倍，同时在分泌重组蛋白VHH及XynA时可以实现更高的表达水平。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113652442A
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN202110998111.6
申请日：2021-08-27
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/77
Abstract: 本发明基于pEC‑XK99E中的pGA1棒杆菌复制子这一在谷氨酸棒杆菌中拷贝数约为30的低拷贝质粒复制子，将复制蛋白Rep的325位异亮氨酸突变为苏氨酸、398位编码丝氨酸的氨基酸变为同义密码子，成功获得了一种可以提高棒杆菌质粒拷贝数的复制子pGA1‑Rep‑I325T/S398。将该复制子用于高拷贝质粒的构建，携带有pGA1‑Rep‑I325T/S398复制子的质粒pEC‑XK99E‑Rep‑T/S在谷氨酸棒杆菌中复制后，通过质粒体外抽提证实增加了菌体中质粒的数量。构建pEC‑XK99E‑EGFP‑Rep‑T/S质粒，通过测定不同菌体量下的荧光值，与为突变质粒相比荧光量增加三倍即改造后的质粒提高了蛋白的表达量。同时通过荧光定量PCR手段，测定突变后拷贝数为野生型复制子的质粒的8倍约为245。
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公开(公告)号：CN110511954A
公开(公告)日：2019-11-29
申请号：CN201910107636.9
申请日：2019-02-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其能实现于谷氨酸棒杆菌高分泌表达木聚糖酶。一种适用于谷氨酸棒杆菌分泌表达木聚糖酶的重组载体，其特征在于：重组载体包括可操作性连接的序列原件：AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因，AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列和SD序列连接构成的片段其序列如SEQ ID NO.1所示，cspB信号肽的序列如SEQ ID NO.2所示。AH6启动子、5’UTR及其前38bp序列、SD序列、cspB信号肽和木聚糖酶基因构成双顺反子结构，能够实现木聚糖酶于谷氨酸棒杆菌的高分泌表达，酶活达到486.2 U/ml。
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公开(公告)号：CN106434733B
公开(公告)日：2019-09-27
申请号：CN201610626318.X
申请日：2016-08-01
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/77
Abstract: 本发明提供了一种适用于谷氨酸棒杆菌的表达载体，其能实现谷氨酸棒杆菌对外源蛋白的稳定表达。其包括启动子和外源蛋白编码序列，其特征在于：启动子为aph启动子，其还包括第一编码序列、与第一编码序列连接的RBS序列，aph启动子和第一编码序列连接构成第一顺反子，RBS序列和外源蛋白编码序列连接构成第二顺反子；第一顺反子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，RBS序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示。
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公开(公告)号：CN108333352A
公开(公告)日：2018-07-27
申请号：CN201810084644.1
申请日：2018-01-29
Applicant: 江苏拜明生物技术有限公司 , 江南大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558
Abstract: 本发明提供了一种O型口蹄疫抗体的高通量检测方法，其能解决解决液相阻断ELISA方法检测速度慢，检测通量低，无法满足大量样本下的快速高通量检测需求的技术问题。该检测方法，其采用化学发光免疫吸附法测定待测样本的待测血清相对光强度RLU和抗原对照相对光强度RLU，并根据待测血清相对光强度RLU和抗原对照相对光强度RLU计算抑制率PI，其特征在于：化学发光免疫吸附法的样品处理过程中待测样本血清、阴性质控血清和阳性质控血清进行单次稀释，单次稀释倍数下各效价血清对应的抑制率PI统计区间无重叠现象；抑制率PI通过与各效价血清对应的临界抑制率进行对比确定待测血清的效价。
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