一种组成型表达人透明质酸酶的毕赤酵母及其应用

    公开(公告)号:CN117025432B

    公开(公告)日:2024-07-26

    申请号:CN202311030579.1

    申请日:2023-08-16

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明公开了一种组成型表达人透明质酸酶的毕赤酵母及其应用。本发明在保持人透明质酸酶PH‑20核心功能序列的基础上,首先对其信号肽序列进行替换,使rhPH‑20分泌表达水平提升20%;进一步对共翻译内质网转运途径进行针对性强化,使分泌表达提升48%;之后,通过强化内质网未折叠蛋白响应使分泌表达进一步提升31%。最终,经5‑L发酵罐培养,三步改造后的重组菌OE54‑ScHAC1分泌表达rhPH‑20产量达到19.82U·mL‑1,相较出发总共提升约9.38倍,为目前酵母体系组成型表达最高水平。

    一种经高效表达和分子改造构建的磷脂酶D基因工程菌及其应用

    公开(公告)号:CN116731942A

    公开(公告)日:2023-09-12

    申请号:CN202310247277.3

    申请日:2023-03-15

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明公开了一种经高效表达和分子改造构建的磷脂酶D基因工程菌及其应用。本发明通过系统改造表达元件,实现了磷脂酶D的高效分泌表达,胞外酶活达到42.8U/mL,相较于未改造菌株,酶活提高了69.0倍。本发明还采用高密度发酵提高磷脂酶D表达水平的方法,成功实现了高密度胞外表达磷脂酶D,胞外酶活达到149.7U/mL,相较于未改造的出发菌株,酶活提高了249.5倍。本发明的磷脂酶D具有良好的转磷脂酰基能力,能以卵磷脂为底物合成产物磷脂酰丝氨酸和其他磷脂衍生物。重组菌酶活稳定性较好,发酵周期短,为大规模工业化生产奠定了基础具有良好的转酰基能力,在磷脂酰丝氨酸和磷脂衍生物的生物合成领域具有潜在应用价值。

    活性大分子角蛋白的制备方法及其作为生物敷料的应用

    公开(公告)号:CN111606990B

    公开(公告)日:2023-02-21

    申请号:CN202010495522.9

    申请日:2020-06-03

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C07K14/47 C12P21/06 A61L26/00

    摘要: 本发明公开了一种活性大分子角蛋白的制备方法及其作为生物敷料的应用,本发明通过控制角蛋白酶的反应条件,从羊毛废弃物中提取了具有生物活性的大分子角蛋白,其分子量主要分布于45kDa和28kDa,该角蛋白能够有效促进成纤维细胞的增殖和迁移,且表现出明显的抗氧化性能;该再生角蛋白粉末可自组装成水凝胶,能够诱导组织再生修复,有效促进伤口愈合,可作一种良好的医用生物敷料。本发明操作工艺简单,设备成本低廉,易于工业化生产;本方法以畜牧业及纺织工业中废弃羊毛、羊绒等纤维及不能用于纺织加工的羊毛短纤维为原料,既节约资源又保护环境;本方法使用角蛋白酶进行生物提取,提取过程绿色环保,不产生污染。

    一种分枝杆菌的17β-羟基类固醇脱氢酶突变体及其异源表达

    公开(公告)号:CN112592904B

    公开(公告)日:2023-02-07

    申请号:CN202011620795.8

    申请日:2020-12-31

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明公开了一种分枝杆菌的17β‑羟基类固醇脱氢酶突变体及其异源表达,属于酶基因工程及酶工程领域。本发明提供一种来自于分枝杆菌的放线菌17β‑羟基类固醇脱氢酶17β‑HSDy1及其基因序列,以pMA5为表达质粒,以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主,实现了分枝杆菌LY‑1的17β‑HSDy1的外源表达。对软件模拟获得的该酶关键T239位点,突变成了酪氨酸,酶活提高了19.2%,达到9571.77U·mg‑1。对突变获得的重组枯草芽孢杆菌WB600‑pMA5‑17βHSDy1‑T239Y进行酶活‑生长曲线的测定,在发酵28h时,重组枯草芽孢杆菌WB600‑pMA5‑17βHSDy1‑T239Y的比酶活达到最高。该异源表达菌株可用于雄甾烯‑1,4‑烯‑3,17‑二酮转化宝丹酮的生产,具有潜在的工业应用。