口服降血糖重组人胰岛素原的制备方法

    公开(公告)号:CN103045631B

    公开(公告)日:2014-12-24

    申请号:CN201210571799.0

    申请日:2012-12-26

    申请人: 江苏大学

    摘要: 本发明涉及口服降血糖重组人胰岛素原的产品及制备方法和应用,是利用枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为分子载体,与人胰岛素原基因重组,带有肠激酶标签,构建融合表达的整合型重组质粒,并转化枯草芽孢杆菌得到枯草芽孢杆菌重组菌株,诱导重组菌株产生的芽孢表面展示人胰岛素原的重组芽孢。本发明成功的筛选出重组枯草芽孢杆菌菌株,诱导重组菌株产生的芽孢表面展示有人胰岛素原。本发明的重组芽孢可直接用于动物口服进行肠道消化吸收,在保持了芽孢生理特性的基础上同时具有人胰岛素原的部分药效性和营养功能。同时,适合工业化生产。

    N-糖基化的胰岛素类似物
    83.
    发明公开

    公开(公告)号:CN103889444A

    公开(公告)日:2014-06-25

    申请号:CN201280049481.4

    申请日:2012-08-03

    申请人: 默沙东公司

    IPC分类号: A61K38/28 C07K14/62

    CPC分类号: C07K14/62 A61K38/00 A61K38/28

    摘要: 描述了包含N糖基化胰岛素类似物的组合物和制剂。在特定实施方案中,糖基化胰岛素类似物在体内产生且包含一种或多种选自高甘露糖型或岩藻糖基化或非岩藻糖基化杂合型、稀少甘露糖型或复合型N聚糖的N连接的N聚糖。在其他实施方案中,包含高甘露糖型或岩藻糖基化或非岩藻糖基化杂合型、稀少甘露糖型或复合型N聚糖的N聚糖体外连接至胰岛素类似物。N聚糖的实例包括但不限于具有选自Man(1-9)GlcNAc2的N聚糖,或选自GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2的N聚糖;或选自Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2的N聚糖;或选自NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2的N聚糖的结构的分子。

    一种胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的纯化方法

    公开(公告)号:CN103709244A

    公开(公告)日:2014-04-09

    申请号:CN201310455305.7

    申请日:2013-09-29

    IPC分类号: C07K14/62 C07K1/14

    CPC分类号: C07K14/62

    摘要: 本发明属于药物化学领域,公开了一种胰岛素及其类似物结晶的纯化方法。本发明所述纯化方法采用易挥发、低毒性的有机溶剂在短时间内冲洗加淋洗胰岛素结晶或其类似物结晶,以彻底除去结晶中残留的微量的挥发性差且毒性高的有机溶剂,淋洗结束后通过干燥彻底地去除冲洗加淋洗引入的挥发性好的有机溶剂,从而解决结晶中不易挥发的有机溶剂残留的问题。本发明所述纯化方法操作简便快捷,纯化制得的胰岛素结晶或其类似物结晶终产品比未处理过的结晶纯度高,溶剂残留更低,而且颗粒更加均一,分散性更好,便于保存和分装。

    脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法

    公开(公告)号:CN103275210A

    公开(公告)日:2013-09-04

    申请号:CN201310256421.6

    申请日:2013-06-25

    IPC分类号: C07K14/62 C07K1/20

    摘要: 本发明公开了一种脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法。该色谱纯化方法利用中低压色谱系统对脂肪酸单酰化胰岛素进行分离,使用有机聚合物反相色谱材料为固定相,洗脱的流动相为含有至少一种可与水混溶的有机溶剂和至少一种缓冲剂物质、pH值为2~4。该色谱纯化方法步骤简单,可以一步将样品从初始纯度50~60%提高到纯度为98%,且易于放大,经济成本低。

    重组人胰岛素原的复性与纯化方法

    公开(公告)号:CN103172727A

    公开(公告)日:2013-06-26

    申请号:CN201310065815.3

    申请日:2013-03-04

    申请人: 西北大学

    IPC分类号: C07K14/62 C07K1/16

    摘要: 本发明公开了一种高效体积排阻色谱(HPSEC)复性与同时纯化重组人胰岛素原的方法。包括(1)将含有胰岛素原的菌体细胞经超声波细胞破碎,缓冲液洗涤和溶解于强变性剂(如8mol/L或6-7mol/L盐酸胍),由此得到粗分离的重组人胰岛素原;(2)在优化的色谱条件下含有胰岛素原的变性抽提液直接进样,采用脲浓度线性梯度洗脱一步色谱所得的目标馏分rhPI的纯度可达到96%以上,质量回收率为56.8%;(3)将含有胰岛素原馏分进一步脱盐,由此得复性与纯化更高纯度和活性的馏分。本发明所述的方法得到的重组人胰岛素原可以经色谱柱上的酶切或溶液中酶切转换为胰岛素,并且该色谱过程操作简单,重复性高,易于规模化生产。