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公开(公告)号:CN108359717A
公开(公告)日:2018-08-03
申请号:CN201810447842.X
申请日:2018-05-11
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/6895 , C12Q1/689 , C12Q1/14 , C12N15/11
Abstract: 一种直扩RPA现场可视化检测方法,包括如下步骤:1)粗提待测样品基因组DNA;2)针对目的基因设计RPA特异性引物;3)将RPA特异性引物加入到RPA反应体系中进行RPA扩增反应,所述RPA反应体系中成分的终浓度为:外引物F 0.12-0.48μM,内引物R 0.12-0.48μM,dNTPs1.4-1.8mM,MgOAc 8.4-14mM,模板DNA 1~2μL;反应程序:32-42℃,5-10min;4)鉴定扩增结果:向扩增产物中加入SYBR Green I染料,直接在日光灯或者阳光下观察颜色变化:显色为绿色的样品为阳性;显色为橘色的样品为阴性。本发明可应用于来源于动物、植物、微生物的所有基因进行RPA检测,对RPA扩增产物实现了快速、简便、可视化鉴定。
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公开(公告)号:CN107236826A
公开(公告)日:2017-10-10
申请号:CN201710590207.2
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
CPC classification number: C12Q1/701
Abstract: 一种检测百合无症病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到LSV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括外引物F3和B3,内引物FIP和BIP,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的百合无症病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN107177700A
公开(公告)日:2017-09-19
申请号:CN201710590061.1
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/107
Abstract: 一种检测黄瓜花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到CMV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括外引物F3和B3,内引物FIP和BIP,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的黄瓜花叶病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN107164566A
公开(公告)日:2017-09-15
申请号:CN201710590225.0
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 一种检测百合斑驳病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到LMoV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括内引物FIP和BIP,外引物F3和B3,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的百合斑驳病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN107164566B
公开(公告)日:2020-09-29
申请号:CN201710590225.0
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 一种检测百合斑驳病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到LMoV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括内引物FIP和BIP,外引物F3和B3,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的百合斑驳病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN108315493A
公开(公告)日:2018-07-24
申请号:CN201810365523.4
申请日:2018-04-23
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 一种用于检测大麦黄花叶病毒的LAMP引物组及检测方法,根据Genbank中查找到的BaYMV基因的CP序列进行引物设计,获得LAMP引物组,其包括外引物F3和B3,内引物FIP和BIP,该LAMP引物组特异性强,减少了非靶标序列的影响,可以识别目的序列上6个不同的区域,具有高度的选择性,灵敏度高,检测方法具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,通过添加显色剂用肉眼来直接观察检测结果,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,易于推广。
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公开(公告)号:CN107723346A
公开(公告)日:2018-02-23
申请号:CN201711210493.1
申请日:2017-11-28
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/686 , C12Q1/6895 , C12N15/11
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q1/6895 , C12Q2537/143 , C12Q2563/159 , C12Q2565/125
Abstract: 一种用于转基因玉米多重检测的微滴PCR偶联DGGE分析方法,首先,针对待测样品分别设计PCR特异性引物对,进行微滴PCR扩增,扩增产物经纯化后进行DGGE电泳,并进行SYBRGreen染色,在紫外光下显影观察,来检测转基因玉米基因组的多重DNA分子。该方法可以实现高通量分析多个DNA目标核酸分子,且灵敏度高,内标基因的稳定性也很好。因此,本发明利用微滴PCR偶联DGGE技术实现了生物基因定性、高通量检测。
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公开(公告)号:CN114015808A
公开(公告)日:2022-02-08
申请号:CN202111401011.7
申请日:2021-11-24
Applicant: 上海市农业科学院 , 上海佳牧生物制品有限公司
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 一种猪圆环病毒2型的荧光定量PCR检测方法及试剂盒,对猪圆环病毒2型即PCV2的ORF2基因设计了相应的特异性引物和探针,与PCV1、CSFV、PRRSV、PRV不发生交叉反应,检测极限和定量极限分别为10和100拷贝数。本发明的试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性好,循环阈值(Ct)与标准DNA模板在102~106拷贝/μL浓度范围内具有极好的线性关系,相关系数为1;重复性好,批内实验中Ct值的变异系数在0.59%到1.05%之间,批间实验的Ct值变异系数为1.9%到4.2%,为猪圆环病毒Ⅱ型的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的诊断方法。
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