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公开(公告)号:CN108359717A
公开(公告)日:2018-08-03
申请号:CN201810447842.X
申请日:2018-05-11
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/6895 , C12Q1/689 , C12Q1/14 , C12N15/11
Abstract: 一种直扩RPA现场可视化检测方法,包括如下步骤:1)粗提待测样品基因组DNA;2)针对目的基因设计RPA特异性引物;3)将RPA特异性引物加入到RPA反应体系中进行RPA扩增反应,所述RPA反应体系中成分的终浓度为:外引物F 0.12-0.48μM,内引物R 0.12-0.48μM,dNTPs1.4-1.8mM,MgOAc 8.4-14mM,模板DNA 1~2μL;反应程序:32-42℃,5-10min;4)鉴定扩增结果:向扩增产物中加入SYBR Green I染料,直接在日光灯或者阳光下观察颜色变化:显色为绿色的样品为阳性;显色为橘色的样品为阴性。本发明可应用于来源于动物、植物、微生物的所有基因进行RPA检测,对RPA扩增产物实现了快速、简便、可视化鉴定。
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公开(公告)号:CN107236826A
公开(公告)日:2017-10-10
申请号:CN201710590207.2
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
CPC classification number: C12Q1/701
Abstract: 一种检测百合无症病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到LSV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括外引物F3和B3,内引物FIP和BIP,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的百合无症病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN103757115B
公开(公告)日:2016-01-20
申请号:CN201410022452.X
申请日:2014-01-17
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种基于多重微滴PCR偶联荧光分光光度法的生物基因定性、定量、高通量检测方法。首先,设计特异性引物并对其选择性地进行不同荧光基团标记,随后应用上述荧光标记的特异性引物进行微滴PCR扩增,扩增产物经纯化后,用荧光分光光度计或酶标仪来测量纯化后的PCR产物中各个发射波长和荧光值含量,达到自动检测的目的,可同时进行定性、定量和高通量检测。本发明方法可实现对大量目标DNA分子同时进行高通量的扩增和定性、定量和高通量检测。
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公开(公告)号:CN106011314B
公开(公告)日:2019-08-06
申请号:CN201610613054.4
申请日:2016-07-29
Applicant: 上海佳牧生物制品有限公司 , 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 一种用于检测猪细小病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,该LAMP引物组序列分别为引物F3:5’‑ACGGAGGTAAAATTGGACA‑3’;引物B3:5’‑TCCCTTTAGCTTTTTTTTTAGC‑3’;FIP:5’‑GAGATGTAGTTGGTGAGTCTGTTTTTTTTTCTTCAGAGCAAAGCGTG‑3’;引物BIP:5’‑CAACCAGAGGTAAGAAGATCGCTTTTAAAAATATGTCTTGGAGCAGGT‑3’。本发明还提供了含有上述引物组的检测试剂盒及检测方法,通过向LAMP反应产物中加入荧光染料后的颜色变化来判断被测样品是否含有PPV,实现了可视化,反应结果易判定,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN107304454A
公开(公告)日:2017-10-31
申请号:CN201610259975.5
申请日:2016-04-25
Applicant: 上海市农业科学院 , 上海佳牧生物制品有限公司
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2型的LAMP可视化快速检测试剂盒,还公开了用于检测猪圆环病毒2型的LAMP引物及其检测方法,根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列,设计合成3对引物,通过对LAMP条件的优化建立了PCV2的LAMP诊断方法,为猪圆环病毒2型的现场快速诊断提供了一种简便快速的方法,并依据该方法研制成PCV2的LAMP可视化快速检测试剂盒,该试剂盒的操作简单,并直接通过颜色变化进行结果判定,实现了可视化,反应结果易判定,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN107177700A
公开(公告)日:2017-09-19
申请号:CN201710590061.1
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/107
Abstract: 一种检测黄瓜花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到CMV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括外引物F3和B3,内引物FIP和BIP,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的黄瓜花叶病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN107164566A
公开(公告)日:2017-09-15
申请号:CN201710590225.0
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
Abstract: 一种检测百合斑驳病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到LMoV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括内引物FIP和BIP,外引物F3和B3,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的百合斑驳病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN107164566B
公开(公告)日:2020-09-29
申请号:CN201710590225.0
申请日:2017-07-19
Applicant: 上海市农业科学院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 一种检测百合斑驳病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,根据Genbank中查找到LMoV的CP序列进行引物设计,该LAMP引物组包括内引物FIP和BIP,外引物F3和B3,该LAMP引物组特异性强,与常见侵染百合的7种病毒无交叉,灵敏度高,可在模板纯度只有101拷贝数下进行扩增,建立的百合斑驳病毒的LAMP诊断方法,具有反应条件简单、操作简便快速、结果判定方便、准确等优点,可用于环介导逆转录等温扩增,直接检验百合样品总RNA,减少实验假阴性或假阳性实验结果发生,在保证实验结果准确性的同时,更加经济节约,高效,非常易于临床推广。
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公开(公告)号:CN106011314A
公开(公告)日:2016-10-12
申请号:CN201610613054.4
申请日:2016-07-29
Applicant: 上海佳牧生物制品有限公司 , 上海市农业科学院
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2545/113 , C12Q2563/107
Abstract: 一种用于检测猪细小病毒的LAMP引物组、试剂盒及检测方法,该LAMP引物组序列分别为引物F3:5’‑ACGGAGGTAAAATTGGACA‑3’;引物B3:5’‑TCCCTTTAGCTTTTTTTTTAGC‑3’;FIP:5’‑GAGATGTAGTTGGTGAGTCTGTTTTTTTTTCTTCAGAGCAAAGCGTG‑3’;引物BIP:5’‑CAACCAGAGGTAAGAAGATCGCTTTTAAAAATATGTCTTGGAGCAGGT‑3’。本发明还提供了含有上述引物组的检测试剂盒及检测方法,通过向LAMP反应产物中加入荧光染料后的颜色变化来判断被测样品是否含有PPV,实现了可视化,反应结果易判定,非常易于临床推广。
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